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国家自然科学基金(81070530)
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免疫磁珠法分选小鼠iPS细胞获得原始生殖细胞的初步研究
2013年
目的 探讨经MACS系统体外分选小鼠诱导性多能干细胞(inducedpluripotentstemcells,iPS)IP14D-1得到纯度较高诱导性原始生殖细胞(inducedprimordialgermcells,iPGCs)的方法,并对其表面标志、形态进行鉴定。方法未分化IP14D-1细胞培养扩增,分化形成iEBs(inducedembryoidbodies,iEBs),以4、7、9d的iEB为研究对象,胰酶消化制成单细胞悬液,用特异性表面抗原Ssea-1(specialstageembryonicantigenI)单抗标记,间接免疫磁珠法分选得到Ssea-1阳性细胞,即为假定iPGCs。采用免疫荧光和碱性磷酸酶染色鉴定假定iPGCs,流式细胞术鉴定MACS分选得到的目的细胞群纯度。结果分选得到的Ssea-1阳性细胞表达PGC特异性表面标志Blimpl和组织非特异碱性磷酸酶(TNAP);7d的iEB分选获得细胞经扩增后iPGC量较多(83.5%)。结论MACS分选方法可作为获得较纯化的iPGC体外分选体系。
张艳敏
秦洁
漆正宇
崔光辉
郭新
关键词:
免疫磁珠分选
多能干细胞
生殖细胞
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