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国家自然科学基金(81070538)
作品数:
3
被引量:2
H指数:1
相关作者:
袁正伟
李慧
范洋
单立平
周凤华
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相关机构:
中国医科大学
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发文基金:
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相关领域:
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医药卫生
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中国医科大学
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厦门市第三医...
作者
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袁正伟
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顾卉
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周凤华
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单立平
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范洋
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李慧
1篇
蒋俊红
1篇
杨兆辉
传媒
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中华小儿外科...
1篇
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年份
1篇
2014
1篇
2013
1篇
2012
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大鼠羊水双向电泳样品不同处理方法的比较
被引量:1
2012年
目的比较羊水样品2-d电泳的不同处理方法,以建立相对简单、重复性好、检出效率高的2-d电泳方法。方法提取孕17天正常大鼠单水,分别采用三氯乙酸一丙酮沉淀法(方案1)、三氯乙酸一丙酮沉淀法联合白蛋白和IgG去除试剂盒(方案2)及超滤膜浓缩法联合白蛋白和IgG去除试剂盒(方案3)三种方法处理羊水,之后进行双向电泳分离、胶体染色、软件分析和质谱检测。结果方案1、2和3分别检测到的蛋白点为253±28、749±32和782±27个,方案1与方案2和方案3比较差异均具有统计学意义(P〈0.05);方案2与方案3比较,差异具有统计学意义(P〈O.05)。方案1、2和3检测的相对分子质量〉50000蛋白点分别为57±14,45±13和41±14个,差异无统计学意义;方案1、2和3检测的相对分子质量〈50000蛋白点分别为196±29,702士35,735±29个,方案1与方案2和方案3比较差异均具有统计学意义(P〈0.05);方案2与方案3比较,差异具有统计学意义(P〈O.05)。结论采用超滤膜和去除高丰度蛋白预处理羊水标本可去除高丰度蛋白,提高低丰度蛋白含量,是研究羊水蛋白组的有效方法。
单立平
李慧
范洋
周凤华
顾卉
袁正伟
关键词:
蛋白组
羊水
质谱
双向电泳
先天显性脊柱裂胎鼠羊水蛋白谱差异性分析
被引量:1
2013年
目的采用2-D/质谱电泳方法,比较孕17d正常组胎鼠和全反式维甲酸诱导的显性脊柱裂胎鼠羊水蛋白表达谱的变化,筛查先天性显性脊柱裂相关羊水标记物。方法孕10d大鼠,采用全反式维甲酸胃管灌饲的方法建立先天显性脊柱裂动物模型24只(脊柱裂组),正常对照组9只(正常组)。孕17d晨,麻醉孕鼠,显微镜下获取每个胎囊的羊水及胎鼠,并检查胎鼠畸形情况。提取羊水蛋白质,merck试剂盒去除高丰度白蛋白和IgG,行2-D、胶体染色、图像扫描分析及质谱检测,Western—blot进一步验证2-D结果。结果鉴定出6种蛋白质(其中1种蛋白质可能对应多个蛋白点):甲胎蛋白(AFP)、转铁蛋白(transferrin,TF)、信号识别颗粒受体B亚基(srprb)55kDa、srprb 77kD、α-1抗蛋白酶及载脂蛋白A4(Apo A4)。其中,Apo A4和Srprb 77kDa在脊柱裂组表达下调,而TF、Srprb 55kDa和α-1抗蛋白酶在脊柱裂组表达上调。46个蛋白质点被鉴定为AFP及其片段,11个AFP蛋白点在脊柱裂组表达降低,35个蛋白点在脊柱裂组表达升高。通过Western-blot共发现69kDa、52kDa、36kDa、24kDa和14kDa5种分子量的AFP片段,其中69kDa的AFP在脊柱裂组和正常组含量均为最高。脊柱裂组与正常组比较,AFP上调42%,而Apo A4下调44%,组间差异有统计学意义(P〈0.05)。结论本研究发现羊水中6种蛋白质与显性脊柱裂畸形发生有关,进一步研究这些差异表达蛋白,可以为了解脊柱裂的发病机制和产前诊断提供实验依据。
单立平
李慧
范洋
周凤华
顾卉
袁正伟
关键词:
椎管闭合不全
电泳
蛋白质组学
宫内移植骨髓间充质干细胞对显性脊柱裂胎鼠神经元重建的作用研究
2014年
目的胚胎期移植骨髓间充质干细胞(bonemarrowstemcell,BMSCs)至先天性脊柱裂模型胎鼠脊髓中,观察其在显性脊柱裂胎鼠脊髓中存活及分化情况,并探讨其对脊髓神经元修复的治疗潜能。方法利用胎仔外科和显微注射技术将绿色荧光蛋白(eGFP)转染的BMSCs分别在胚胎第16、17和18天移植到83只脊柱裂和20只正常大鼠胚胎中(groupE16、E17andE18),胚胎20d的胎鼠脊髓被取出并固定。经冰冻切片后,计数eGFP阳性细胞数目,并利用免疫荧光方法检测脊髓中eGFP阳性的BMSCs中神经干细胞(Nestin)、神经元(Neurofilament)和神经胶质细胞(GFAP)的分布与表达。结果本研究成功的将MSC在宫内移植入胎鼠体内,孕鼠的存活率为94%(81/86),胎鼠的存活率为78.1%(136/174);实验中孕16d的胎鼠存活率为75.8%(91/120)低于孕·17d的80.6%(25/31)和孕18d的87.O%(20/23)。计数脊髓中eGFP阳性细胞数,范围在166~735个/根,其中P0代MSCs存活率最低,为10.8%;P3~6代为22.6%、P10~14代为20.1%;P10~14代MSC在母鼠孕16d时移植得到最佳分化率;统计eGFP阳性细胞表达Nestin、Neurofilament和GFAP的阳性率分别为4%~5%、1%~2%和5%~7%。结论BMSCs移植到显性脊柱裂胎鼠脊髓中能够存活,并在脊髓中表达Nestin、Neurofilament和GFAP,提示移植骨髓间充质干细胞具有向神经干细胞、神经元和神经胶质细胞分化的可能。
马丽丽
袁正伟
蒋俊红
陈海琛
杨兆辉
姜艳
徐延波
关键词:
间质干细胞
细胞分化
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