国家自然科学基金(30770814)
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 相关作者：熊承良胡廉李红钢黄翔刘燕更多>>
- 相关机构：华中科技大学浙江大学医学院附属妇产科医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- siRNA干扰小鼠睾丸支持细胞uPA表达的初步研究被引量：1
- 2012年
- 该研究在验证小鼠睾丸支持细胞TM4有内源性uPA基因表达的基础上,针对uPAmRNA靶序列设计三段不同的siRNA序列(si-uPA),通过瞬时转染TM4细胞,筛选确定uPA基因的有效干扰序列。将该有效干扰序列进行时效、量效实验,观察siRNA对TM4细胞uPA mRNA和蛋白表达的影响。结果显示,siRNA的最佳转染浓度为50 nmol/L。三种si-uPA转染TM4细胞后,uPA mRNA和蛋白表达量均较空白对照组明显下降(P<0.05),以si-uPA1作用最为明显。si-uPA1转染24 h后,转染组细胞uPA mRNA的表达均较对照组显著降低,其中100 nmol/L组抑制效果最为明显,抑制率达到70%;随转染时间的延长,uPA mRNA表达持续降低,转染72 h后,三组转染细胞uPA mRNA表达量分别为对照组的53.9%、35.3%和27.7%(P<0.05)。该研究成功筛选出针对uPA mRNA靶序列的有效干扰序列,抑制效应持续至72 h;同一时间点内,抑制效应随转染浓度的增加而增强,表现出良好的量效关系。
- 胡廉刘燕李红钢熊承良
- 关键词：UPA
- 真核表达CatSper1用于筛选有效siRNA的体外实验研究
- 2011年
- 目的构建pEGFP-N1-CatSper1重组质粒,在真核细胞中表达CatSper1,利用化学合成siRNA抑制小鼠CatSper1基因的表达,并筛选抑制效果最佳的siRNA序列。方法利用重组PCR克隆小鼠CatSper1全长cDNA,构建到真核表达载体中。生物信息分析软件校正结果,获得三条针对雄性小鼠CatSper1的siRNA序列,合成后分别与重组质粒pEGFP-N1-CatSper1共转染到小鼠成神经瘤N2a细胞株中,通过观察EGFP荧光强度、实时定量聚合酶链反应和WesternBlot等方法,分析干扰效果,筛选能显著降低N2a细胞中外源性CatSper1表达量的siRNA序列。结果成功克隆小鼠CatSper1基因的全长cDNA片段(2,061 bp),并构建到pEGFP-N1表达载体中。三个siRNA干扰组的CatSper1 mRNA和蛋白表达与空白对照组相比均下降,其中以靠近3′端的siRNA干扰作用更为明显,阴性对照siRNA组未引起CatSper1 mRNA和CatSper1蛋白表达明显变化。结论在小鼠神经瘤N2a细胞株中成功表达外源性CatSper1蛋白,并筛选出有效的siRNA,为深入研究CatSper1功能及用于避孕提供参考。
- 梅小琴李红钢熊承良
- 关键词：RNA干扰共转染
- RNA干扰技术及其在男科学研究中的应用被引量：1
- 2008年
- RNA干扰(RNA interference,RNAi),是一种在动植物中存在的通过双链RNA诱导同源特异性序列转录后基因沉默的过程。RNAi在抵抗病毒感染、抑制转座子活动、调控内源性基因表达等方面发挥着重要作用,已成为当前生物医学的研究热点之一。近年来,RNAi作为一种研究工具,已开始应用于ED、PCa及精子发生等男科学研究中,并取得了一定进展。本文就RNAi的基本原理、研究进展及其在男科学研究中的应用作一概述。
- 万虹熊承良
- 关键词：RNA干扰男科学基因沉默
- 大鼠抑制素α亚基启动子的克隆及其在睾丸支持细胞中转录活性的初步分析被引量：1
- 2010年
- 目的克隆大鼠抑制素α亚基(Inhα)启动子,建立报告基因表达系统,初步分析其在睾丸支持细胞中的转录活性。方法采用降落聚合酶链反应(touch-down PCR)法,从大鼠睾丸组织DNA中扩增三段不同长度的Inhα启动子序列(395、606、775 bp),克隆入载体pEGFP-N1,构建绿色荧光蛋白的报告基因系统,转染大鼠睾丸支持细胞,荧光显微镜观察绿色荧光表达情况。结果成功构建带有Inhα启动子的绿色荧光蛋白报告基因表达系统。三段重组质粒转染支持细胞后均可见绿色荧光表达,但荧光量和强度均弱于CMV启动子,其中395片段最为显著。结论 Inhα启动子在睾丸支持细胞中的转录活性弱于CMV启动子,可能与启动子本身的序列结构有关。
- 胡廉黄翔田永红熊承良
- 关键词：抑制素启动子睾丸
