广东省自然科学基金(020024)
- 作品数：4 被引量：19H指数：2
- 相关作者：赵彤沈丽佳朱梅刚谢思明何滢更多>>
- 相关机构：南方医科大学南方医院南方医科大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- mic2/CD99在经典型霍奇金淋巴瘤H/RS细胞中的表达及与Eber-1/LMP-1相关性的研究被引量：12
- 2006年
- 目的:检测mic2基因与CD99蛋白和Eber-1基因与潜伏膜蛋白-1(LMP1)在经典型霍奇金淋巴瘤(cHL)H/RS细胞中的表达,探讨mic2/CD99表达与Eber-1/LMP-1的相关性。方法:采用分子原位杂交和免疫组化技术并结合组织芯片技术检测59例石蜡包埋淋巴瘤组织标本[43例cHL,16例非霍奇金淋巴瘤(NHL)]mic2/CD99和Eber-1/LMP-1的表达,比较分析mic2/CD99在两组中的表达及与Eber-1/LMP-1的关系。结果:cHL组CD99蛋白表达阳性率为2·3%,mic2基因表达为55·8%,LMP1表达为58·1%,Eber-1表达为53·5%;NHL组CD99蛋白与mic2基因表达高于cHL组(P<0·05);LMP1和Eber-1的表达低于cHL组(P<0·05);mic2基因的表达高于CD99蛋白的表达(P<0·05);Eber-1与LMP1的表达无统计学意义(P>0·05)。CD99蛋白与LMP1的表达呈负相关(P<0·05),各项指标的表达与性别无关。CD99蛋白与LMP1的表达与年龄呈负相关(P<0·05),mic2与Eber-1的表达与年龄无关(P>0·05)。结论:CD99蛋白在cHL H/RS细胞中低表达,并与LMP1的表达呈负相关。
- 沈丽佳何滢蒋会勇谢思明朱梅刚赵彤
- 关键词：霍奇金淋巴瘤
- 小鼠B淋巴瘤A20细胞株mCD99L2基因表达检测及真核表达载体构建被引量：8
- 2006年
- 目的检测及克隆小鼠B淋巴瘤A20细胞株mCD99L2基因,构建真核表达载体。方法设计寡核苷酸探针,应用原位分子杂交方法检测A20细胞中mCD99L2基因的mRNA表达,RT-PCR法从A20细胞总RNA中获取mCD99L2 基因含编码区全长cDNA,克隆入T载体,筛选阳性克隆、酶切鉴定并经序列测定;设计含酶切位点的PCR引物,PCR 获取含mCD99L2基因编码区片段,用限制性内切酶EcoR I和Xho I双酶切取所需目的片段,利用分子克隆技术与 pcDNA3．1／MycHis C(+)质粒重组,对产生的重组子进行PCR、双酶切鉴定,并经过测序证实。结果原位杂交方法检测 A20细胞中mCD99L2基因mRNA呈阳性表达;RT-PCR法成功获得mCD99L2基因编码区全长cDNA序列,DNA序列测序结果与GenBank提供的已知序列(NM-138309)比较,结果完全一致;重组质粒pcDNA3．1-mCD99L2中的插入片段经DNA测序后与GenBank中mD99L2基因相应序列比较,100％同源。结论小鼠B淋巴瘤A20细胞株存在 mCD99L2基因,采用RT-PCR和T-A技术克隆了A20细胞的mCD99L2基因,成功构建了pcDNA3．1-mCD99L2真核表达载体,为下一步探索mCD99L2基因在小鼠B淋巴瘤A20细胞株中的功能奠定了实验基础。
- 沈丽佳方唯意谢思明何滢蒋会勇赵彤
- 关键词：淋巴瘤基因克隆真核表达载体
- LMP1与绿色荧光蛋白融合基因慢病毒的制备被引量：2
- 2005年
- 目的:制备EB病毒LMP1与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因慢病毒.方法:采用RT-PCR方法获得LMP1全外显子片段,使之克隆到带绿色荧光蛋白慢病毒表达载体质粒FUGW中.经限制性酶切、PCR扩增和测序鉴定重组载体.在脂质体介导下将慢病毒包装系统的包装结构基因pCMV.△8.9、包膜基因VSVG、目的基因FUGW-LMP1导入病毒包装细胞293FT,荧光显微镜检测基因的表达,包装成病毒后,收集病毒上清,浓缩,PCR鉴定.结果:限制性内切酶酶切和DNA测序分析证实RT-PCR获得的LMP1 cDNA片段与Gen-Bank中的数据完全吻合;LMP1准确克隆入FUGW的多克隆位点.慢病毒的3种质粒可高效转染入293FT细胞,荧光显微镜下观察可见大量的绿色荧光.绿色荧光位于细胞的胞膜及胞质.结论:成功制备了LMP1与GFP融合基因慢病毒,为研究EBV瘤基因LMP1在多种疾病中的作用机制提供适合的稳定转染细胞的载体.
- 李先茂赵彤朱梅刚张三泉张进华
- 关键词：潜伏膜蛋白1聚合酶链反应慢病毒
- 小鼠A20RS样细胞模型的初步建立被引量：2
- 2005年
- 目的:研究EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)转染小鼠 B淋巴瘤细胞A20能否诱导出霍奇金淋巴瘤H/R S样细胞. 方法:采用RT PCR方法获得LMP1全外显子片段,使之克隆 到真核表达载体PLXSN中,限制性酶切、PCR扩增和测序鉴 定重组载体;运用脂质体介导转染技术,将LMP1的真核表达 重组质粒和空载体质粒导入A20细胞.结果:扩增的 LMP1cDNA长度为1.1kb,测序结果与已知序列吻合,重组真 核表达质粒经酶切鉴定表明获得正确重组子;经G418筛选获 得稳定整合了LMP1和空载体的亚克隆细胞,WesternBlot印迹 鉴定PLXSN LMP1组有LMP1蛋白的表达,出现了H/R S样细 胞形态改变.结论:建立了小鼠A20RS样细胞模型,为下一步 建立霍奇金淋巴瘤动物模型,研究其发病机制奠定了基础.
- 李先茂朱梅刚沈丽佳刘腾飞张三泉张进华张彦赵彤
- 关键词：霍奇金病
