目的:探讨孕酮诱导的蜕膜蛋白(decidual protein induced by progesterone,DEPP)在血管内皮细胞EA.hy926中的定位、对细胞存活及基因表达的影响。方法:构建表达人DEPP的重组腺病毒,测定病毒滴度并鉴定其表达的DEPP蛋白水平。用构建好的腺病毒感染EA.hy926内皮细胞,通过免疫荧光和Western blot确定DEPP蛋白在细胞中的定位。观察DEPP过表达对EA.hy926细胞存活的影响,用MTT法测定细胞的存活率,通过流式细胞仪检测EA.hy926细胞的坏死和凋亡情况。利用蛋白质芯片检测DEPP过表达时内皮细胞中血管发生相关基因表达水平的变化。结果:本研究成功构建了表达人DEPP蛋白的重组腺病毒。通过免疫荧光检测,发现DEPP蛋白呈全细胞分布。与过表达GFP的对照细胞相比,过表达DEPP时EA.hy926细胞明显皱缩、变圆,MTT检测显示细胞的存活率明显下降,流式细胞仪检测显示EA.hy926细胞感染腺病毒后细胞的坏死水平与对照组相比升高。蛋白质芯片检测发现,DEPP过表达导致内皮细胞中多种血管发生相关蛋白的水平发生明显改变。结论:DEPP蛋白的表达升高对血管内皮细胞有损伤作用,可能参与血管发生的调控过程。
