南通市科技局社会发展科技计划项目(S2009031)
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
- 相关作者：陈钟常仁安倪侃陈佳慧吴龙祥更多>>
- 相关机构：南通大学无锡市人民医院更多>>
- 发文基金：南通市科技局社会发展科技计划项目江苏省医学重点人才培养基金江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 靶向polo样激酶-1基因小干扰RNA质粒的构建及其效能检测
- 2012年
- 目的:用脂质体法构建polo样激酶-1(polo-like kinase-1,PLK1)基因RNA(siRNA)。方法 :设计合成PLK1siRNA干扰序列,构建干扰载体,然后以该siRNA转染SMMC-7721细胞后,以实时定量Western Blot检测各组细胞PLK1蛋白表达情况。结果:应用靶向PLK1的siRNA转染SMMC-7721细胞48 h后,PLK1蛋白的表达siRNA分别较无关对照组和空白对照组有明显下降。结论:通过脂质体转染法成功构建靶向PLK1的siRNA,实现了细胞的稳定转染,为进一步研究奠定了基础。
- 倪侃陈佳慧贾乃昕吴龙祥常仁安陈钟
- 关键词：肝细胞性肝癌小干扰RNA
- RNA干扰PLK1基因表达对肝癌细胞增殖的影响被引量：1
- 2010年
- 目的探讨靶向PLK1基因在肝癌基因治疗中的可行性。方法采用PLK1小干扰核糖核酸分子(siRNA)转染人肝癌HepG2细胞,分别以荧光实时定量PCR和Western blot检测PLK1基因和蛋白的表达水平,观察PLK1 siRNA转染对肝癌细胞体外增殖的影响。并于转染不同时间后收集细胞,分别采用琼脂糖凝胶电泳和TUNEL方法检测肝癌细胞的凋亡情况。结果 PLK1基因明显抑制癌细胞体外生长(P<0.05)。肝癌HepG2细胞经siRNA转染处理后,PLK1 mRNA和蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。DNA电泳出现明显的梯度图谱;转染组癌细胞凋亡指数明显增加。结论 PLK1 siRNA转染可明显抑制肝癌细胞增殖,其机制可能与诱导细胞凋亡有关。本结果为肝癌以PLK1基因治疗提供了一条新的思路。
- 陈钟陈小建常仁安
- 关键词：PLK1小干扰RNA细胞增殖
- 丝/苏氨酸蛋白激酶PLK1在肿瘤中的研究进展被引量：1
- 2012年
- PLK1是一类高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。PLK1与不同细胞周期检查点的精密调控有关,其在细胞有丝分裂进程中的重要作用已被阐明。PLK1在增殖活跃的细胞中呈高水平表达,PLK1的高度表达和肿瘤患者的低存活率之间具有相关性;PLK1有可能成为肿瘤分子靶向治疗中的有效靶点。
- 倪侃陈钟
- 关键词：肿瘤细胞周期
- GPC-3和HIF-1α异常表达对肝癌诊断与预后的临床价值被引量：4
- 2010年
- 目的分析肝癌组织缺氧诱导因子(HIF)-1α和磷脂酰肌醇蛋白多糖(GPC)-3表达及其临床意义。方法以自身配对法分别收集经手术切除的36份肝癌及癌周组织,以免疫组织化学法分析肝癌及癌周组织HIF-1α和GPC-3的表达及分布,探讨其临床意义。结果肝癌及癌周组织HIF-1α和GPC-3表达呈棕黄色,颗粒状。前者主要定位于胞浆中,中央静脉周围明显;后者定位于胞浆和细胞膜。癌组织HIF-1α表达阳性率为80.6%,明显低于癌旁的100.0%(P<0.01),与肿瘤大小相关,其强度与分化程度负相关,与HBV感染、肿瘤数目及AFP浓度均无关;癌组织GPC-3阳性率为80.6%,明显高于癌旁的41.7%(P<0.01),与分化程度、肿瘤数目、AFP和HBsAg阳性与否之间未见明显相关。结论肝癌组织HIF-1α和GPC-3的异常表达反映肝癌的生物学行为,可作为诊断肝癌和浸润转移的有用指标。
- 杨燕姚登福董志珍姚宁华邱历伟吴玮杨君伶
- 关键词：肝癌缺氧诱导因子-1Α磷脂酰肌醇蛋白多糖-3
- polo样激酶-1干扰质粒构建及对人肝癌SMMC-7721细胞株凋亡的影响
- 2012年
- 目的构建polo样激酶-1（PLK1）基因小于扰RNA（siRNA），观察其对肝癌细胞凋亡的影响。方法设计合成3个PLK1siRNA（siRNAl、siRNA2、siRNA3）干扰序列，构建干扰载体，转染人肝癌细胞株SMMC-7721，观察48h后转染效率，采用实时定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）筛选下调PLK1mRNA效果最好的siRNA；然后选择以该siRNA转染48h的SMMC-7721细胞，分别以实时定量RT－PCR和Westernblot法检测空白组、对照组及转染组细胞中PLK1基因和蛋白表达；流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡的改变。结果肝癌细胞株SMMC-7721中存在PLK1蛋白的过表达。应用靶向PLK1的siRNA转染SMMC-7721细胞48h后，PLK1mRNA相对水平siRNA2组分别较无关对照组和空白对照组下降了74％和78％，而PLK1蛋白的表达siRNA2组分别较无关对照组和空白对照组下降了83％和88％，抑制率达88％；siRNA2组中出现大量凋亡细胞，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论PLK1基因在肝癌细胞增殖中具有重要的调控作用。PLK1-siRNA转染可明显抑制癌细胞增殖，诱导凋亡是其重要机制之一。
- 倪侃陈佳慧贾乃昕吴龙祥常仁安陈钟
- 关键词：肝细胞小干扰RNA
- MAGE-A3基因过量表达对人肝癌细胞株SMMC7721的作用被引量：2
- 2010年
- 目的 观察MAGE-A3基因过量表达对人肝癌细胞株增殖及侵袭能力的影响.方法 采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）从肝癌组织中制备出含NheI和KpnI酶切位点的MAGE-A3目的 基因,克隆到pcDNA3.1（-）真核表达载体,并通过酶切鉴定、测序验证.经脂质体法正义瞬时转染肝癌细胞株SMMC7721,通过RT-PCR、Western blot分别检测MAGE-A3 mRNA和蛋白表达产量.以噻唑蓝（MTT）比色法、Boy-den小室实验观察MAGE-A3基因过量表达对人肝癌细胞增殖及侵袭的影响.结果成功扩增出目的 基因;得到重组质粒pcDNA3.1-MAGE-A3,经过酶切鉴定与测序,结果正确;RT-PCR和Western blot检测显示,MAGE-A3基因mRNA及蛋白产物的表达水平明显高于未转染组和空载体组（3组MAGE-A3 mRNA量分别为7838、2847、1557,蛋白量分别为30938、24 088、29 654）;转染组细胞数量增多,穿透Matrigel膜的细胞数显著增加,与未转染组和空载体组比较差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 成功构建pcDNA3.1-MAGE-A3真核表达载体,转染人肝癌细胞株SMMC7721后可促进细胞增殖和侵袭能力,提示MAGE-A3基因在肝癌复发和转移中起到重要作用.
- 陈钟孙金兵
- 关键词：黑色素瘤抗原转染增殖
