长江学者和创新团队发展计划(IRT0978)
- 作品数：78 被引量：271H指数：8
- 相关作者：秦爱建金文杰邵红霞钱琨陈素娟更多>>
- 相关机构：扬州大学江苏省家禽科学研究所中国农业科学院家禽研究所更多>>
- 发文基金：长江学者和创新团队发展计划国家自然科学基金江苏高校优势学科建设工程资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 猪源弓形虫YZ株的分离与鉴定被引量：1
- 2013年
- 为确定江苏某猪场疑似弓形虫病发病猪群的病原,本研究取患病仔猪淋巴结、肺脏、肝脏、心和脑等组织制作常规石蜡切片,进行HE染色和免疫组化染色。将仔猪的淋巴结、肺和肝组织混合用盐酸-胃蛋白酶溶液消化处理后接种ICR鼠,经连续传代分离弓形虫,采用特异PCR方法对分离的虫株进行鉴定。结果显示在淋巴结和肺脏等组织中可见弓形虫假包囊,免疫组化染色呈强阳性;盲传第3代小鼠腹水可见弓形虫速殖子,而且通过PCR方法可以扩增得到其约301 bp的B1基因特异片段。结果表明,本研究分离鉴定出一株弓形虫虫株,命名为YZ株。
- 王小波许金俊吴力力邱江许益民陶建平
- 关键词：弓形虫仔猪
- 猪氨肽酶N基因的克隆、表达系统构建和鉴定被引量：5
- 2013年
- 为探讨猪氨肽酶N(APN)作为产肠毒素性大肠杆菌F4ac的受体蛋白的可能性,根据GenBank上的猪APN mRNA序列设计合成特异性引物,从新鲜的猪小肠组织中提取总RNA并反转录成cDNA第一链,RT-PCR扩增猪APN全长基因,并分别构建真核表达和原核表达系统。结果表明:APN基因已正确插入pcDNA3.1真核表达载体和pET-28a(+)原核表达载体,SDS-PAGE结果证明重组蛋白为包涵体,且纯化产物在110ku处有单一明显条带。pcDNA3.1-APN和pET28a-TAPN双系统的成功构建以及APN蛋白的成功表达,为进一步研究和验证该蛋白作为猪F4ac受体候选蛋白的可能性奠定基础。
- 夏芃芃宋玉洁段进坤朱国强
- 关键词：真核表达原核表达
- 弓形虫感染对子一代雄性小鼠脑部多巴胺水平的影响
- 2015年
- 目的探讨弓形虫感染对子一代雄性小鼠发育期脑部多巴胺水平的影响。方法 36只雌性ICR小鼠随机分为健康对照组和弓形虫感染组,每组18只。感染组每鼠分别经口感染弓形虫PRU弱毒株10个包囊。感染后90 d,与健康雄性ICR小鼠按1∶1交配。每组各取2只交配成功的母鼠于孕20 d时剖腹取胎鼠。其他交配成功的母鼠自然分娩。应用高效液相色谱-电化学法对孕20 d的雄性胎鼠及出生后14 d和63 d的雄性仔鼠(各6只)进行脑皮层、小脑、海马和纹状体多巴胺含量的测定。结果感染组小鼠感染后死亡3只,余15只感染鼠中,仅6只交配成功。2只于孕20 d剖腹取胎鼠12只,其中雄性7只;4只自然分娩,仔鼠存活21只,其中雄性15只。18只对照组小鼠均交配成功,2只于孕20 d时剖腹取胎鼠23只,其中雄性12只;16只自然分娩,仔鼠存活179只,其中雄性92只。感染组和对照组雄性胎鼠小脑区多巴胺含量分别为(413.25±21.78)ng/g和(346.30±51.83)ng/g,感染组显著高于对照组(P<0.01),两者皮层区多巴胺含量差异无统计学意义(P>0.05)。感染组出生后14 d和63 d,雄性仔鼠皮层区[(462.50±24.80)ng/g和(1 215.77±113.64)ng/g]、小脑区[(271.55±26.19)ng/g和(1 328.82±39.62)ng/g]、海马区[(225.78±24.17)ng/g和(1 322.70±58.34)ng/g]和纹状体区[(455.23±61.53)ng/g和(991.32±54.31)ng/g]的多巴胺含量均显著高于相应对照组(P<0.05或P<0.01)。结论弓形虫感染能引起子一代雄性小鼠发育期脑部多巴胺水平显著升高。
- 周永华朱虎平许金俊张英毛爱民杨静范峰许永良赵中兴陶建平
- 关键词：刚地弓形虫多巴胺子一代
- 家禽活疫苗中鸡传染性贫血病毒PCR检测方法的建立被引量：16
- 2012年
- 为建立不依赖于病毒分离的快速,特异的禽活疫苗中鸡传染性贫血病毒(CAV)监测方法,本研究建立了CAV的PCR检测方法。试验表明:该PCR不仅具有良好的CAV特异性,且检测灵敏度达3.98个TCID50/反应。用该方法监测9份随机抽取的商品禽用活疫苗发现,其中2份活疫苗呈PCR强阳性。以上结果表明,本研究建立的鸡传染性贫血病毒PCR检测方法具有特异、敏感等特点,能用于禽用活疫苗中CAV污染的快速监测。
- 邵红霞王平平武敏金文杰钱琨秦爱建
- 关键词：鸡传染性贫血病毒PCR疫苗
- 马立克氏病病毒RB1B株UL14蛋白原核表达及多抗血清制备被引量：2
- 2013年
- 为研究UL14蛋白在马立克氏病病毒感染过程中的生物学作用,本文以RB1B毒株感染的鸡胚成纤维细胞基因组DNA为模板,经PCR扩增出UL14基因,然后克隆入pET32a载体,转化BL21(DE3)工程细菌且经IPTG诱导进行原核表达。结果显示,pET32a-UL14重组质粒在大肠杆菌中表达,表达的重组蛋白具有可溶性。IFA分析证实,用此融合蛋白免疫BALB/c小鼠后获得的多抗血清能与MDV RB1B感染的CEF细胞发生特异性反应。本研究结果为UL14蛋白的生物学功能研究提供了条件。
- 徐文财刘秋秦爱建胡序明吴庚华孙苹钱琨邵红霞金文杰
- 关键词：马立克氏病病毒原核表达
- 江苏省七个县域猪嵴病毒感染的流行病学调查被引量：4
- 2014年
- 根据猪嵴病毒3D基因保守序列设计1对特异性引物,用RT-PCR方法对从江苏省7个县域采集的220份猪腹泻肛拭样品进行检测,调查猪嵴病毒在江苏省的流行情况,以进一步丰富猪嵴病毒在我国的流行病学调查数据。所有样品猪嵴病毒感染阳性率达52.73%(116/220),阳性猪场占79.41%(27/34)。对5个不同来源阳性样品中获得的3D基因序列进行测序分析,结果显示,5株猪嵴病毒3D序列与GenBank中已知的国内外猪嵴病毒的相应序列在核苷酸水平具有较高同源性。调查结果表明,猪嵴病毒在江苏省部分县域腹泻猪群中有较高感染率,但猪嵴病毒在其中的作用尚有待进一步的研究。
- 杨振张笛于恩琪赵振鹏单玉平洪枫王秋生邓建中秦爱建金文杰
- 关键词：3D基因腹泻反转录-聚合酶链反应
- 毒害艾美耳球虫-田间分离株的致病性试验被引量：1
- 2012年
- 毒害艾美耳球虫扬州田间分离株以不同的剂量(10 000,30 000,50 000,70 000,90 000个卵囊/羽)感染28日龄黄羽肉雏鸡,以平均增重、死亡率、病变记分等指标评价其致病性。结果显示,除10 000个卵囊组外,其余4个剂量组均显著影响增重(P<0.05),并引起鸡的死亡,死亡率分别为37.5%～50%、37.5%～50%、62.5%、75%～87.5%;各感染组均出现肠道病变,其中10 000个卵囊组的病变值显著小于其余4个剂量组(P<0.05),但与不感染对照组相比有显著差异(P<0.05)。结论表明,该毒害艾美耳球虫田间分离株有很强的致病性。
- 刘梅李建梅刘丹丹王尚尚程旭沈欣悦戴亚斌陶建平
- 关键词：毒害艾美耳球虫死亡率增重
- J亚群禽白血病病毒SUJ及兔IgGFc基因在腺病毒表达系统中的融合表达被引量：1
- 2016年
- 为获得J亚群禽白血病病毒(ALV-J)囊膜蛋白gp85和兔IgGFc的融合蛋白,通过腺病毒表达系统融合表达ALV-J SUJ和兔IgGFc(r IgGFc)基因。将pc DNA3.1-SUJ-r IgGFc用XhoⅠ、KpnⅠ进行双酶切,获得SUJ-r IgGFc基因,将其克隆至p Shuttle-CMV质粒,构建穿梭载体p Shuttle-CMV-SUJ-r IgGFc,重组质粒转化含p Adeasy-1的BJ5183-AD-1感受态细胞,获得重组腺病毒质粒p Ad-SUJ-r IgGFc,最后转染人293T细胞。表达的融合蛋白可被ALV-J单克隆抗体JE9以及羊抗兔IgG识别,重组蛋白的分子量大小约9.5×104,且与JE9及羊抗兔IgG都有很好的反应性;免疫共沉淀试验结果显示融合蛋白可与DF1细胞膜蛋白混合物反应并获得差异蛋白。该融合蛋白可与ALV-J宿主细胞蛋白发生特异性反应。
- 梅梅钱科唐应华秦爱建侯继波
- 关键词：J亚群禽白血病病毒GP85基因腺病毒
- J亚群禽白血病病毒SU基因与兔IgG Fc基因在sf9细胞中的融合表达
- 为了获得ALV-J SU和兔IgG Fc的融合蛋白,研究病毒与宿主的相互作用,本研究用PCR方法扩增出SUJ-IgG Fc基因,并克隆至pFastBac1质粒,构建转移载体pFastBac1-SUJ-IgG Fc;再将其...
- 孙薇薇秦爱建梅梅钱琨金文杰范忠军杭柏林尹丽萍
- 关键词：J亚群禽白血病病毒
- 文献传递
- 猪CD151转基因PK-15细胞系构建及其对猪繁殖与呼吸综合征病毒的易感性
- 2013年
- 【目的】建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)易感的猪CD151转基因PK-15细胞系,研究CD151分子在PRRSV感染猪源细胞中的作用。【方法】用RT-PCR从猪肺泡巨噬细胞中扩增CD151全长cDNA,测序正确后克隆入真核表达载体pcDNA3;用重组载体pcDNA-CD151转染PK-15细胞,经G418抗性筛选获得转基因细胞系PK15-CD151,用RT-PCR和免疫荧光试验检测CD151表达;用VR-2332株PRRSV分别感染PK-15细胞、PK15-CD151细胞、MARC-145细胞和3D4-CD163细胞,定期观察细胞病变,用RT-PCR和免疫荧光试验检测病毒RNA基因组和病毒抗原,用半数组织细胞感染剂量测定病毒滴度。【结果】从猪巨噬细胞中克隆得序列正确的猪CD151 cDNA;从重组载体转染的PK-15细胞培养中筛选得G418抗性细胞克隆,并能正确表达猪CD151分子;在PRRSV感染后,PK15-CD151细胞虽然不表现明显的细胞病变,但能检测到病毒RNA基因组和病毒抗原,并能产生较高滴度的感染性病毒;该细胞系已在体外传30代以上,第10、20、30代细胞的PRRSV滴度无明显变化。【结论】猪CD151基因转染能使非易感PK-15细胞获得对PRRSV的易感性,提示猪CD151参与PRRSV感染猪源细胞。
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