江苏省自然科学基金(BK2011150)
- 作品数：4 被引量：18H指数：3
- 相关作者：孙志浩倪晔王云宋亮徐志豪更多>>
- 相关机构：江南大学更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”江苏省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学化学工程动力工程及工程热物理轻工技术与工程更多>>
- 基于蛋白质组学的假单胞菌耐溶剂机制研究被引量：3
- 2012年
- 【目的】有机溶剂对微生物有强烈的毒害作用致使绝大多数微生物不能在较高的有机溶剂浓度下生长。为了探究微生物的耐溶剂性机制,由野生型假单胞菌Pseudomonas putida JUCS驯化获得一株能够在60%(V/V)的环己烷中生长的菌株P.putidaJUCT1。【方法】采用蛋白质二维电泳对P.putida JUCT1在不同溶剂条件下的蛋白组分表达量的差异进行分析比对。【结果】从总共22个表达量差异均超过50%的蛋白质中,选取了3个高丰度蛋白质,通过MALDI-TOF/TOF鉴定为:3-羟基异丁酸水解酶、蛋白质延伸因子EF-Ts、异分支酸水解酶超家族(编码基因分别为mmsB、tsf、PSEEN0851)。将这3个基因在大肠杆菌中重组表达,3个蛋白均能不同程度地提高E.coli JM109的耐溶剂性,其中3-羟基异丁酸脱氢酶(编码基因mmsB)对菌株的溶剂耐受性影响最为显著。【结论】证明了运用蛋白组学的方法研究微生物的耐溶剂性的可行性,并为构建适用于工业化应用的溶剂耐受性整体细胞生物催化剂提供理论依据。
- 宋亮倪晔孙志浩
- 关键词：耐溶剂性恶臭假单胞菌环己烷
- 高产(+)γ-内酰胺酶菌株的筛选与发酵产酶研究被引量：5
- 2012年
- 从土壤中筛选获得高产(+)γ-内酰胺酶的微生物菌株,并鉴定和保藏为Delftia sp.CGMCC No.5755。对该Delftia sp菌株的发酵产酶条件进行了研究,结果表明,最适发酵培养基为:蔗糖30 g/L,蛋白胨30 g/L,牛肉膏25 g/L,乙酰胺5 g/L,MgSO41 g/L;最适发酵温度及初始pH分别为32℃和pH 7.0。该菌株在上述条件下发酵培养20 h,菌体生物量为16.0 g/L,(+)γ-内酰胺酶的酶活为692 U/L。采用Delftia sp.静息细胞对100 g/L的外消旋底物2-氮杂二环-[2.2.1]-庚烷-5-烯-3-酮(简称(±)γ-内酰胺)的水解拆分反应中,产物(-)γ-内酰胺光学纯度大于99.9%e.e.,转化率为53.7%。研究为生物催化法高效制备光学纯(+)γ-内酰胺提供了可行的途径。
- 陈红干倪晔孙志浩
- 不对称还原制备光学纯(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯的双酶共表达重组菌的构建被引量：2
- 2012年
- 克隆了来自于枯草芽孢杆菌的羰基还原酶基因IolS和葡萄糖脱氢酶基因GDH,采用Ni-NTA镍亲和层析柱对重组蛋白IolS进行纯化,并对纯酶进行了酶学性质研究.结果表明,该羰基还原酶的最适温度和pH值分别为30oC和6.0;在40oC以下具有较好的热稳定性;在pH5.57.0的偏酸性范围内能保持75%以上的酶活.采用三种策略构建了IolS和GDH的共表达重组质粒,结果发现,采用双启动子的重组质粒能够实现羰基还原酶IolS的高效表达,粗酶液中的IolS和GDH的比酶活均达到1.5U/mg.运用该重组菌对10g/L的OPBE进行不对称还原,反应15h后,底物转化率大于99%,产物(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯的ee值达到99.5%.
- 宿宇宁倪晔王骏超徐志豪孙志浩
- 关键词：羰基还原酶葡萄糖脱氢酶共表达(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯
- 利用Clostridium saccharobutylicum DSM 13864连续发酵生产丁醇被引量：8
- 2013年
- 为使用廉价糖质原料进行连续发酵生产丁醇提供理论依据和实验指导,以Clostridium saccharobutylicumDSM 13864为发酵菌种,考察了稀释率和温度等因素对以葡萄糖为原料的四级连续发酵生产丁醇的影响。结果表明:高稀释率有利于酸的积累和菌体的生长,低稀释率有利于溶剂的生产。当稀释率为0.05 h 1,4个发酵罐温度控制在37℃时,总溶剂产量为11.57 g/L,其中丁醇7.29 g/L,生产率为0.145 g/(L.h)。在0.05 h 1稀释率的条件下进行变温连续发酵证实低温有利于溶剂的积累,当一级和二级罐温度控制在37℃,三级和四级罐温度控制在33℃时总溶剂产量最高为13.69 g/L,其中丁醇为8.36 g/L,生产率为0.171 g/(L.h)。
- 夏子义倪晔孙志浩王云吴香玉
- 关键词：CLOSTRIDIUM连续发酵丁醇稀释率温度
