湖北省自然科学基金(2009CDA118)
- 作品数：11 被引量：33H指数：4
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- 相关机构：武汉工业学院日本九州大学浙江工业大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程生物学理学更多>>
- 食品中非O157大肠杆菌志贺毒素基因序列分析被引量：1
- 2010年
- 对一株从食品中分离的非O157产志贺毒素1型大肠杆菌(EC6)进行研究。将该菌株所产志贺毒素Stx1用PCR扩增stx1基因全长并克隆测序,其stx1基因与GenBank数据库收录的stx1基因最高同源性为99%,表明EC6发生了一定程度的基因突变。采用邻位相连法构建进化树,结果表明EC6为stx1基因亚型。
- 李睿戴诗皎戴锴杜德龙朱廷恒
- 关键词：产志贺毒素大肠杆菌食品
- 大肠杆菌O157的志贺毒素基因克隆和测序
- 2010年
- 将一株大肠杆菌O157PCR扩增stx2基因全长并克隆测序。该菌株stx2基因与GenBank数据库收录的stx2基因最高同源性为98%,在3个核苷酸位点存在基因突变。采用邻位相连法构建进化树,序列分析结果表明O157为stx2C基因亚型。了解大肠杆菌O157的基因突变情况,并为开发大肠杆菌分子检测方法提供了参考。
- 李睿孙言凤王芳熊燕
- 关键词：大肠杆菌O157基因克隆测序
- 产志贺毒素突变株的毒力分析被引量：2
- 2010年
- 对2株食物中毒病人体内分离的产志贺毒素突变株EC130和EC169进行毒力分析。EC130和EC169携带stx基因但不能正常表达志贺毒素,具有eae基因和hly基因,仍具有一定毒力。初步探讨了产志贺毒素突变株不能正常表达志贺毒素的机理,高产志贺毒素的对照株携带Q933基因,而EC130和EC169不携带Q933基因。结果表明,单一采用志贺毒素作为检测靶标,容易造成产志贺毒素突变株漏检,今后在检测食品中产志贺毒素株时应增加检验eae基因和hly基因。
- 戴诗皎李睿刘志国宫本敬久
- 关键词：毒力食品检测
- PCR-RFLP法分析白酒小曲细菌多样性被引量：3
- 2012年
- 采用CTAB法提取白酒小曲细菌总DNA,用细菌通用引物扩增16S rDNA,并构建16S rDNA克隆文库。采用限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)技术对16S rDNA文库进行分析,获得76个克隆的酶切指纹图谱。选择酶切带型不同的阳性克隆进行测序并且构建进化树。结果表明,小曲主要细菌种类为黄单胞菌属、沙雷氏菌属、乳杆菌属、木崎氏菌属和片球菌属,其中优势细菌是以戊糖片球菌为主的乳酸菌。
- 翟平平李嘉文毕旺来陈道玉李睿
- 关键词：白酒小曲细菌多样性
- 观音土曲功能细菌的分子鉴定被引量：4
- 2010年
- 采用SDS-酶裂解法提取观音土曲的细菌DNA。提取的DNA进行16S rDNA的PCR扩增、克隆测序并构建进化树,结果表明获得的三个有效克隆分别属于未培养细菌和胚芽乳杆菌。探讨了采用分子生物学技术鉴定观音土曲中功能细菌的可行性。
- 李睿许芳刘晓红陈道玉
- 关键词：白酒小曲
- 检测产志贺毒素大肠杆菌的菌落PCR方法被引量：8
- 2010年
- 针对产志贺毒素大肠杆菌的毒力基因stx设计特异性引物,并建立一种菌落PCR方法。菌落PCR模拟实验证实,该方法特异性强,能良好的扩增出O157的stx1和stx2基因,而普通大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌则无PCR扩增产物。应用分子检测初筛、选择性培养、菌落PCR相结合的方法,检测实际食品样品,分离检测到一株携带stx1的产志贺毒素大肠杆菌。本实验建立的菌落PCR方法可应用于食品检验。
- 李睿许芳张忠美宫本敬久朱廷恒
- 关键词：产志贺毒素大肠杆菌食品检验菌落PCR
- 检测食品中大肠杆菌O157的多重荧光PCR方法的建立被引量：5
- 2010年
- 针对大肠杆菌O157的志贺毒素编码基因stx1、stx2和O157血清型的标志基因wzy的保守序列,设计特异性的引物和探针,反复优化反应体系和条件,建立了一种新的多重荧光PCR检验方法。结果显示,该方法灵敏度高,stx1、stx2的扩增效率分别为96.4%和94.6%,实际样品检测时stx1、stx2的最低检出限分别为4.2×102cfu/mL和4.2×103cfu/mL。该方法特异性强,扩增结果与各参考菌株基因型一致,能良好的区分出O157菌株和非O157型大肠杆菌。该方法能用于食品样品的检测和流行病学分离株的快速鉴定。
- 李睿刘晓红宫本敬久王芳熊燕
- 关键词：大肠杆菌O157食品检测
- 16SrDNA克隆法分析小曲优势细菌被引量：4
- 2011年
- 用16S rDNA克隆法对某酒厂小曲中优势细菌进行分析,以期探讨强化酵母菌制曲后酒体风味变差的问题。用SDS-酶裂解法提取小曲总DNA,采用细菌通用引物对用PCR方法扩增其16S rDNA,并对PCR产物进行克隆与测序分析。结果表明,小曲中的优势细菌种类是以植物乳杆菌为主的乳酸菌。故强化制曲后发酵生产的白酒中乳酸乙酯含量增加,乙酸乙酯含量下降,造成酒整体风味变差。
- 戴诗皎翟平平程颖源王学峰李睿
- 关键词：小曲聚合酶链反应
- 食品中大肠杆菌O157的PCR检测与wzy基因的测序分析被引量：5
- 2010年
- 大肠杆菌O157:H7和O157:H-是重要食品致病菌。从食品中分离得到一株O157:H7菌株EC5。将该菌株PCR扩增wzy基因全长并克隆测序。结果表明,wzy基因序列与大肠杆菌O157:H7标准株EDL933有100%同源性。从NCBIGenBank数据库下载O157菌株wzy基因序列,针对保守序列设计引物并扩增O157菌株和非O157菌株。PCR结果表明,wzy基因特异性强,可作为检测O157菌株的标志基因。本研究为开发大肠杆菌O157的分子检测技术提供新的研究思路。
- 李睿张忠美戴诗皎孙言凤黄万琪
- 关键词：大肠杆菌O157PCR检测测序
- 绿衣观音土曲细菌DNA的提取被引量：1
- 2010年
- 采用土壤DNA提取试剂盒和SDS-酶裂解法分别提取观音土曲的细菌DNA。基于SDS-酶法裂解原理的提取方法获得的结果比较理想,此方法获得的基因组片段大于15kb;A260/A280为1.82,A260/A230为1.54,DNA纯度很高;提取的DNA不经纯化能直接用于细菌16S rDNA的扩增。该法提取的DNA能直接用于后续的分子生物学实验操作。
- 李睿陈道玉陈平许芳
- 关键词：小曲DNA提取RDNAPCR细菌
