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HO-1基因修饰对急性肾损伤微环境下骨髓间充质干细胞增生分化的影响被引量：3: 2015年; 目的观察经血红素加氧酶-1(HO-1)基因修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)在急性肾损伤(AKI)微环境下的增生分化,并探讨其机制。方法 Gateway技术构建含HO-1目的基因的质粒,同时构建仅含示踪基因e GFP的对照载体;脂质体法转染293FT细胞获得慢病毒原液lenti-HO-1-e GFP和lenti-e GFP;稀释后分别感染BMSCs获得HO-1-BMSCs和e GFP-BMSCs(空载体对照),检测转染细胞的活力、分化潜能。制作缺血再灌注诱导AKI大鼠的肾脏匀浆上清(AKI-KHS),以正常大鼠肾脏匀浆上清(N-KHS)作为对照,分别干预BMSCs、e GFP-BMSCs和HO-1-BMSCs,构成空白组(BMSCs组)、对照组(BMSCs/N-KHS组)、BMSCs/AKI-KHS组、e GFP-BMSCs/AKI-KHS组和HO-1-BMSCs/AKI-KHS组,于37℃、5%CO2培养箱中培养3 d。MTT法检测培养BMSCs的生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡,透射电镜观察细胞超微结构变化,免疫组化法检测细胞内角蛋白18(CK18)表达,Western印迹对各组细胞内HO-1、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p AKT)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p ERK)水平进行检测。用SPSS19.0统计软件进行统计学分析。结果基因修饰并未改变BMSCs活力及多向分化潜能。与对照组比,BMSCs/AKI-KHS组的细胞生长抑制率和凋亡阳性细胞比例显著增加(t=12.581,t=16.283;P<0.05);经HO-1基因修饰后,HO-1-BMSCs/AKI-KHS组的细胞生长抑制率和凋亡阳性细胞比例均有显著下降(t=5.958,t=7.957;P<0.05)。AKI-KHS可诱导BMSCs出现肾小管上皮细胞样分化的超微结构改变,胞浆中可观察到CK18表达,以HO-1-BMSCs/AKI-KHS组的CK18+细胞比例最高(t=4.057,P<0.05)。与BMSCs/AKI-KHS组相比,HO-1-BMSCs/AKI-KHS组的细胞内HO-1蛋白水平显著增高(t=4.163,P<0.05),并伴随着细胞内p AKT、p ERK蛋白水平显著增高(tp AKT=14.305,tp ERK=7.148;P<0.05)。结论 HO-1基因修饰可改善AKI微环境下培养BMSCs的增殖,细胞凋亡减轻,向肾小管上皮样细胞转分化能力增加,HO-1的过表达及其下游的AKT、ERK�; 刘楠梅王会玲韩国锋于秀峙田军胡伟锋张金元; 关键词：血红素加氧酶-1 急性肾损伤

Role of adult resident renal progenitor cells in tubular repair after acute kidney injury被引量：3: 2014年; Acute kidney injury is a serious global health problem and determinant of morbidity and mortality. Recent advancements in the fi eld of stem cell research raise hopes for stem cell-based regenerative approaches to treat acute kidney diseases. In this review, the authors summarized the latest research advances of the adult resident renal progenitor cells(ARPCs) on kidney repair, the role of ARPCs on tubular regeneration after acute kidney injury, the current understanding of the mechanisms rela ted to ARPC activation and modulation, as well as the challenges that remain to be faced.; Hui-ling WangNan-mei LiuRui Li; 关键词：祖细胞

过表达CXCR4的骨髓间充质干细胞对共培养低氧／复氧肾小管上皮细胞的修复作用被引量：3: 2013年; 目的构建CXCR4质粒并转染小鼠骨髓间充质干细胞（BMSC），与低氧／复氧（hypoxia／re—oxygenation，HR）预处理的肾小管上皮细胞（RTEC）共培养，观察CXCR4-BMSC对HR—RTEC的修复效应并探讨其机制。方法采用基因转染技术获得CXCR4-BMSC（CXCR4-BMSC／eGFP，eGFP为示踪基因）和null—BMSC（BMSC／eGFP），检测转染细胞的CXCR4表达。RTEC于低氧／复氧环境中各培养12h获得HR．RETC，体外模拟急性肾损伤（AKI）细胞模型。BMSC与HR—RTEC共培养12h，免疫荧光法检测HR—RTEC的凋亡细胞比例，Western印迹法检测HR—RTEC内的凋亡相关蛋白cleavedCaspase-3和Bcl．2水平，结晶紫法计数迁移BMSC数量。以HR-RTEC上清液分别干预BMSC、CXCR4-BMSC和null—BMSC，免疫荧光法检测各组BMSC角蛋白18（CKl8）的表达，ELISA法检测BMSC上清中骨形态发生蛋白7（BMP-7）、肝细胞生长因子（HGF）和白细胞介素10（IL—lo）的浓度。结果成功转染的CXCR4．BMSC可高效表达CXCR4。HR—RTEC分别与BMSC、CXCR4-BMSC、null—BMSC共培养后，凋亡细胞比例均有下降，尤以与CXCR4．BMSC共培养组降低最为明显，并伴随着细胞内cleavedCaspase．3水平显著降低、Bcl-2表达升高（均P〈0．05）。结晶紫计数显示CXCR4-BMSC向HR—RTEC培养室的迁移数量最多。经HR—RTEC上清液干预后，BMSC、CXCR4-BMSC和null．BMSC均仅能微量表达CKl8，各组间差异无统计学意义。CXCR4过表达可显著增加BMSC的BMP-7、HGF和IL—10分泌。结论过表达CXCR4的BMSC对共培养HR—RTEC的修复效应增强，BMSC的定向迁移能力增加和迁移BMSC的分泌能力增强可能是CXCR4-BMSC的作用机制。; 刘楠梅梅长林张金元田军程劲; 关键词：骨髓间充质干细胞肾小管上皮细胞低氧复氧 CXCR4

缺血-再灌注急性肾损伤后原位成人干/祖细胞参与肾小管上皮细胞再生被引量：1: 2017年; 目的对急性肾损伤(AKI)模型大鼠肾小管损伤部位肾原位成人干/祖细胞(ARPC)的动态改变进行观察,探讨ARPC对AKI肾小管再生修复的影响。方法雄性SD大鼠右侧肾切除同时左侧肾动脉夹闭45 min建立缺血-再灌注肾损伤模型(AKI组),设假手术组为对照组(Sham组)。AKI组分别于设定时间处死动物,采集血及肾脏标本,检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),行HE染色观察肾脏病理改变,观察肾小管损伤和修复。免疫荧光染色及激光共聚焦显微镜观察ARPC标记蛋白CD24+CD133+在肾组织的表达。结果 AKI组术后短时间内Scr、BUN即迅速升高[Scr:(124.74±6.93)μmol/L;BUN:(18.27±2.38)mmol/L],第3天达高峰[Scr:(228.32±24.76)μmol/L;BUN:(26.32±3.93)mmol/L],随后缓慢降低,Sham组保持在正常水平。第7天后逐渐下降至正常,第14天肾功能基本恢复正常。光镜下可见AKI早期(第1天)肾小管上皮细胞呈灶性坏死、小管浊肿,管腔面微绒毛消失,部分刷状缘脱落,肾间质水肿使小管间隙扩大;第3~7天病变范围扩大,程度加重,部分小管空泡变性,脱落、坏死,形成蛋白管型,部分基底膜裸露。1周后在肾小管损伤部位出现再生的上皮细胞,细胞呈扁平样,细胞核大小不等,排列紊乱。免疫荧光结果显示,AKI早期仅见少许CD24+CD133+细胞,3~5 d后损伤肾小管处出现较多CD24+CD133+细胞[(7.5±2.1)个/视野,(8.3±1.7)个/视野],持续至第14天仍可见较多阳性细胞[(2.2±1.3)个/视野],与Sham组(d0)比较,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论肾缺血-再灌注可引起急性肾小管坏死损伤,但肾小管上皮细胞可通过再生而迅速修复,肾脏结构和功能再建;此过程中ARPC激活并持续表达,可能参与肾小管再生。; 王会玲李芮刘楠梅胡伟锋李燕徐凯; 关键词：急性肾功能不全

血红素氧化酶1过表达对急性损伤肾脏中骨髓间充质干细胞的影响被引量：3: 2015年; 目的:构建可高效表达血红素氧化酶1(HO-1)的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),观察HO-1过表达对移植BMSCs在缺血再灌注(I/R)诱导的急性肾损伤(AKI)肾脏中存活的影响,并探讨其机制。方法:基因转染技术获得HO-1-BMSCs和e GFP-BMSCs(空载体对照)。构建I/R诱导的AKI大鼠模型(I/R-AKI)并分别行BMSCs、e GFP-BMSCs和HO-1-BMSCs移植,移植3d后处死,检测大鼠肾功能及移植细胞在肾组织的分布。制作AKI的肾脏匀浆上清(AKI-KHS),体外干预培养的BMSCs、e GFP-BMSCs和HO-1-BMSCs,检测培养BMSCs的细胞凋亡、HO-1蛋白水平、氧化应激相关酶的活力及核因子κB(NF-κB)p65水平。结果:HO-1-BMSCs移植后,AKI大鼠肾脏中DAPI+细胞(BMSCs)比例最高,肾功能改善显著。经AKI-KHS干预后,培养BMSCs的TUNEL+细胞比例增加,HO-1过表达可显著逆转这一现象。AKI-KHS可诱导BMSCs细胞的HO-1表达增加,以HO-1-BMSCs/AKIKHS组升高最为显著,伴随着该组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)水平显著升高,丙二醛(MDA)和黄嘌呤氧化酶(XOD)活力降低,细胞内NF-κB p65核移位细胞比例也显著降低。结论:HO-1过表达可增强BMSCs在AKI肾脏微环境中的存活,HO-1的抗氧化作用及其下游NF-κB活化抑制为其可能的机制,期待可以解决移植干细胞在损伤靶器官中存活率低下的问题。; 刘楠梅王会玲韩国锋于秀峙田军胡伟锋张金元; 关键词：血红素氧化酶1 骨髓间充质干细胞急性肾损伤核因子ΚB

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国家自然科学基金(81300568)

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