辽宁省博士科研启动基金(20061050)
- 作品数：2 被引量：10H指数：2
- 相关作者：刘欣王继红李庆伟张丕桥褚丹更多>>
- 相关机构：辽宁师范大学大连医科大学更多>>
- 发文基金：辽宁省高校创新团队支持计划辽宁省博士科研启动基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 日本七鳃鳗Lj-RGD3缺失突变体Lj-113人工合成序列的基因克隆与蛋白表达被引量：3
- 2011年
- 目的获得突变体Lj-113的基因重组蛋白,为其与野生型活性比较打下物质基础。方法对日本七鳃鳗RGD缺失突变体Lj-113进行基因全序列人工合成,并以NdeI与HindIII为酶切位点构建于pET23b载体上,获得阳性基因重组质粒pET23b-Lj113。CaC l2法将重组质粒转化入大肠杆菌BL21表达菌中,对其进行终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导表达,并对表达蛋白进行组氨酸亲和层析纯化蛋白。结果成功获得七鳃鳗RGD缺失突变体的基因重组蛋白的可溶性表达。结论人工合成基因序列可通过分子克隆方法获得其蛋白的表达。
- 张亚前李庆伟吕莉刘欣王继红
- 关键词：七鳃鳗缺失突变体基因克隆蛋白表达
- 重组七鳃鳗细胞毒素蛋白rLj-RGD3表达及对Hela细胞活性的影响被引量：8
- 2009年
- 为研究重组七鳃鳗细胞毒素蛋白rLj-RGD3的抗肿瘤活性,确定其生物学地位及意义,本研究提取成体七鳃鳗(Lampetra japonica)口腔腺组织总RNA,经RT-PCR获得cDNA序列长度为357bp的目的基因片段,将其克隆于pET23b载体,获得带有组氨酸标签的分子量为15kD的基因重组蛋白rLj-RGD3的高效可溶性表达,通过组氨酸亲和层析纯化蛋白。采用MTT法检测不同浓度rLj-RGD3对bFGF诱导下的Hela细胞增殖的抑制作用,结果表明rLj-RGD3能显著抑制Hela细胞的增殖,IC50为2.6μmol/L。rLj-RGD3作用后的Hela细胞经Hoechst染色及DNAladder检测结果显示,细胞均发生凋亡。rLj-RGD3对Hela细胞黏附玻连蛋白(VN)作用的实验结果为有效抑制。采用Transwell细胞培养板对bFGF诱导下的Hela细胞迁移实验表明,rLj-RGD3能够抑制Hela细胞的迁移,且抑制率达60%。采用人工基质膜基质Matrigel及Transwell模仿体内环境研究rLj-RGD3对Hela细胞浸润行为实验显示,以bFGF为趋化剂的Hela细胞穿透Matrigel的浸润行为明显受到抑制。以上研究表明,rLj-RGD3具有典型的RGD毒素蛋白的功能,有望应用于抗肿瘤基因工程药物开发,具有重要的生物学意义。
- 张丕桥王继红刘欣褚丹李庆伟
- 关键词：七鳃鳗RGD模体整合素
