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国家自然科学基金(30801353): 作品数：15 被引量：20H指数：3; 相关作者：王跃嗣张小华许婷婷张海萍王娟更多>>; 相关机构：滨州医学院潍坊护理职业学院滨州医学院附属医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金烟台市科学技术发展计划项目山东省高等学校科技计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学轻工技术与工程生物学更多>>

家族性肌萎缩硬化症酵母研究模型的探索: 2009年; 目的构建铜-锌超氧化物歧化酶(SOD1)基因缺失的酿酒酵母菌株,为进一步以酵母为模型开展家族性肌萎缩硬化症发病机制及防治研究奠定基础。方法运用LFH-PCR构建了带有遗传霉素抗性基因(KanMX4)的SOD1基因中断框,转化酿酒酵母BY5677,以添加G418的平板筛选出SOD1基因缺失菌株,并经PCR鉴定。结果PCR扩增证实SOD1基因已被成功敲除;与野生菌株相比,SOD1基因缺失菌株生长缓慢。结论成功构建了SOD1基因缺失的酿酒酵母菌株。; 张小华王跃嗣牛新华; 关键词：酿酒酵母 SOD1

协同刺激分子OX40/OX40L在哮喘免疫学发病中的作用: 2011年; 支气管哮喘是由嗜酸性粒细胞、肥大细胞和T细胞等多种炎性细胞参与的气道慢性炎症性疾病,并伴有气道高反应性、可逆性气流受限及黏液高分泌,其发病机制极为复杂,许多机制目前尚不很清楚。近来研究发现OX40/OX40L是哮喘免疫学发病机制中的一个重要环节,它在哮喘发病中的作用正逐渐被人们重视,现就OX40/OX40的生物学功能及调节作用以及其在哮喘治疗中的价值做一综述。; 崔晴晴冯学斌; 关键词：OX40/OX40L T细胞哮喘免疫学发病机制

BMP和WNT对胚胎干细胞造血分化的影响: 2011年; 胚胎干细胞（ESCs）是从囊胚期内细胞团（innercell mass,ICM）和早期胚胎的原始生殖细胞（primordial germ cells,PGCs）中分离出的,它具有分化形成各种成熟细胞类型的潜能。胚胎干细胞在体外造血分化可以模拟并重现体内胚胎造血过程,因此具有广阔的基础研究及潜在应用的前景。而ESCs需要定向分化为特定组织的祖细胞才能发挥作用,但由于定向诱导分化过程中尚存在许多技术难题,故该方面的研究进展较慢,; 张海萍王跃嗣许婷婷; 关键词：胚胎干细胞造血干细胞骨形态发生蛋白

Sod1p缺失对酿酒酵母氟康唑、两性霉素B耐药性的影响: 2013年; 目的研究酿酒酵母铜/锌超氧化物歧化酶基因SOD1对抗真菌药物氟康唑(FLC)、两性霉素B(AmB)耐药性的影响。方法采用平板滴定生长试验,检测酿酒酵母铜/锌超氧化物歧化酶缺失菌株(sod1Δ)对FLC和AmB的药物敏感性;以及外源添加抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)和谷胱甘肽(GSH)对sod1Δ药物敏感性的影响。结果与野生菌株相比,sod1Δ菌株对FLC和AmB均表现出敏感性表型;外源添加NAC和GSH可恢复sod1Δ对FLC和AmB的耐药性。结论 SOD1基因和抗氧化能力在调控酿酒酵母FLC和AmB耐药性中发挥重要作用。; 张小华王晓芝王群林李岩; 关键词：酿酒酵母两性霉素B 耐药性

寿光黑鸡成纤维细胞的体外培养与冷冻保存(英文)被引量：7: 2008年; [Objective] The aim of this study was to establish the in vitro culture system of chicken fibroblasts.[Method] Tissue explant method and enzymatic digestion method were used to separate and culture chicken skin fibroblasts respectively.The rate of cell growth,cryopreservation and recovery were compared.[Result] The primary chicken fibroblasts prepared by enzymatic digestion grew faster and converged together to form monolayer on 5 d post preparation;the passage cells prepared by these 2 methods grew at similar speed and formed monolayer within 2-3 d;homogeneous fibroblasts could be obtained by trypsin digestion and repeated attachment for 3-4 passages;there were 75%-80% of cells survived after cryopreservation and recovery;the growth curves of embryonic fibroblasts and skin fibroblasts were all normal and the two kind of cells still retained the normal number of chromosomes even at the twelfth passage.[Conclusion] The feeder layer cells needed for establishing ES cell lines could be obtained by culturing chicken fibroblasts through both tissue explant method and enzymatic digestion method.This study provided a basis for the successful establishment of ES cell lines.; 王娟于媛王跃嗣马云焦飞; 关键词：SKIN EMBRYONIC FIBROBLASTS VITRO CRYOPRESERVATION

碱性成纤维细胞生长因子对胚胎干细胞来源集落形成细胞的作用被引量：2: 2010年; 背景：有研究表明,在卵黄囊造血、胎肝造血和在胚胎干细胞向造血干细胞分化过程中,碱性成纤维细胞生长因子可强烈表达。目的：在拟胚体培养阶段施加碱性成纤维细胞生长因子,验证碱性成纤维细胞生长因子对集落形成细胞产生的调控作用。方法：购买小鼠胚胎干细胞D3细胞系,取第3~5代小鼠原代胚胎成纤维细胞,加入新配制含丝裂霉素C的DMEM生长培养基孵育2.5h,使饲养层细胞失去增殖能力;加入胰酶消化适度,离心后制成单细胞悬液,以10×104个/cm2的密度种至用明胶包被的培养瓶中,放入孵箱内培养24h之后使用。复苏胚胎干细胞D3细胞并将其接种于饲养层细胞之上。在拟胚体培养阶段按培养基成分不同分为2组：对照组（标准培养基＋血管内皮生长因子＋干细胞因子组）、实验组（标准培养基＋血管内皮生长因子＋干细胞因子＋碱性成纤维细胞生长因子组）。各组于培养3,6d时分别计数克隆形成数,通过免疫荧光法检测Flk-1＋细胞表达情况,并用IMAGE-PROPLUS图像分析系统统计阳性细胞数及平均吸光度值。结果与结论：与对照组比较,在拟胚体培养阶段加入碱性成纤维细胞生长因子可显著增加集落形成细胞的数量（P〈0.01）,Flk-1阳性细胞数及平均吸光度值也显著增加（P〈0.01）。证明碱性成纤维细胞生长因子能够有效地促进胚胎体的扩增以及成血管血液干细胞的产生与增殖。; 李娜石增立王跃嗣; 关键词：拟胚体集落形成细胞碱性成纤维细胞生长因子小鼠胚胎干细胞造血干细胞

酸性成纤维细胞生长因子与胚胎干细胞的造血分化: 2013年; 背景:有研究表明,在卵黄囊造血、胎肝造血和胚胎干细胞向造血干细胞分化过程中,酸性成纤维细胞生长因子可强烈表达。目的:探讨酸性成纤维细胞生长因子对小鼠胚胎干细胞造血分化的作用,在拟胚体培养阶段施加酸性成纤维细胞生长因子,验证酸性成纤维细胞生长因子对造血形成细胞产生的调控作用。方法:培养小鼠胚胎干细胞,将饲养层上生长状态良好的小鼠胚胎干细胞用胰酶消化成单个细胞后,利用悬滴法制备拟胚体,拟胚体继续悬浮培养,以1,2和5μg/L酸性成纤维细胞生长因子分别培养3,5,7,9d,通过免疫荧光法检测胚胎干细胞与拟胚体中酸性成纤维细胞生长因子的表达,流式细胞术检测Flk-1+与CD133+阳性细胞率。结果与结论:酸性成纤维细胞生长因子在拟胚体中呈阳性表达。在5μg/L酸性成纤维细胞生长因子作用下,Flk-1+细胞随时间增加表达增加,CD133+细胞表达模式与Flk-1+细胞类似。在1μg/L时,Flk-1+细胞在7d时表达达到高峰,随后下降。CD133+细胞表达结果类似。而在2μg/L时,5d时Flk-1+细胞表达升高,随后下降,在9d时表达又增高。而CD133+细胞则总体呈现升高趋势。酸性成纤维细胞生长因子可促进Flk-1+与CD133+细胞的产生,证明酸性成纤维细胞生长因子能够有效促进拟胚体的扩增以及成血管血液干细胞的产生与增殖。; 许婷婷张海萍王跃嗣; 关键词：干细胞小鼠胚胎干细胞拟胚体酸性成纤维细胞生长因子 FLK-1

microRNA参与体细胞重编程诱导分化为神经细胞的研究进展: 2016年; 神经退行性疾病是临床上常见的疾病,目前其治疗只停留在药物治疗及手术治疗阶段。由于神经细胞是难以再生的一种细胞类型,寻找替代神经细胞对神经退行性疾病移植治疗具有重要意义。现有研究表明,MSC(mesenchymal stem cell)、ESC(embryonic stem cell)或i PSC(induced pluripotent stem cell)能在体外分化为神经细胞,干细胞治疗神经退行性疾病具有良好的临床前景,但目前受到神经分化效率低、免疫排斥等因素的限制。研究显示,micro RNA具有参与神经发育和分化等作用,且具有重编程神经干细胞并治疗神经退行性疾病的能力。因此,该文就micro RNA参与体细胞的重编程诱导分化为神经细胞机制与作用等作一简要综述,探讨micro RNA对体细胞重编程调控作用和临床应用前景。; 李媛媛王跃嗣; 关键词：神经退行性疾病 MICRORNA 神经干细胞重编程

氯化锂对人子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖及Shh表达的影响被引量：1: 2012年; 目的:研究Wnt、Shh在人子宫内膜癌细胞HEC-1A中的表达,应用不同浓度糖原合成酶激酶-3的抑制剂氯化锂(LiCl)处理,观察对人子宫内膜癌细胞HEC-1A体外增殖和Shh表达的影响。方法:体外培养人子宫内膜癌细胞HEC-1A,不同浓度LiCl处理细胞6～48 h,利用免疫细胞化学法测定HEC-1A细胞上Wnt、Shh表达;MTT比色法检测HEC-1A细胞增殖活性;RT-PCR检测核转录因子Gli-1的表达水平。结果:Wnt、Shh在HEC-1A细胞上有表达;不同浓度LiCl处理后,Shh阳性细胞先出现增殖,24 h时细胞量达到高峰,随着时间延长,Shh细胞量减少,高浓度LiCl组在48h时细胞减少最显著(P<0.05);MTT检测细胞增殖结果显示LiCl对HEC-1A细胞的生长有抑制作用,且呈浓度、时间依赖性。RT-PCR检测结果显示Gli-1基因的表达在24 h组水平最高,与Shh的阳性细胞变化情况相符合。结论:Wnt信号可以调控Shh的表达,LiCl能抑制HEC-1A细胞的增殖,并具有浓度、时间依赖趋势。; 张海萍谭玉军许婷婷王跃嗣; 关键词：氯化锂 WNT信号通路子宫内膜癌增殖

人酸性成纤维细胞生长因子真核表达载体的构建及鉴定: 2011年; 目的构建人酸性成纤维细胞生长因子真核表达载体pEGFP-N1-haFGF。方法 PCR扩增人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)基因,BglⅡ和HindⅢ双酶切后克隆入真核表达载体pEGFP-N1,构建haFGF真核表达载体pEGFP-N1-haFGF,并经限制性酶谱分析和DNA测序对重组表达载体的正确性进行鉴定。结果重组真核基因表达载体pEGFP-N1-haFGF经限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ酶切,DNA电泳显示465 bp的haFGF目的片段和4 700 bp的pEGFP-N1载体片段,重组载体经DNA测序显示所克隆的haFGF基因核苷酸顺序与Genbank中记载的haFGF序列一致。结论本实验成功构建人酸性成纤维细胞生长因子真核表达载体,为进一步研究haFGF的功能奠定基础。; 张小华刘向勇王跃嗣牛新华; 关键词：人酸性成纤维细胞生长因子真核表达载体

国家自然科学基金(30801353)

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