河北省科技支撑计划项目(13272607D)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 相关作者：郑智慧任晓路新华赵宝华张振亮更多>>
- 相关机构：河北师范大学国家工程研究中心华北制药集团新药研究开发有限责任公司更多>>
- 发文基金：河北省科技支撑计划项目国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 黄酮类化合物F01WB1695B对肝细胞脂肪变性的抑制作用及分子机制研究被引量：1
- 2014年
- 目的：研究黄酮类化合物F01WB1695B对脂肪变性人胚肝细胞L-02中脂质合成的抑制作用及其分子作用机制。方法：通过体外油酸诱导L-02细胞发生脂肪化,建立肝细胞脂肪变性细胞模型,再利用不同剂量的F01WB1695B干预脂肪化L-02细胞24 h后,通过油红O染色观察细胞内脂滴量变化,并通过定量检测细胞内甘油三酯（triglyceride,TG）和总胆固醇（total cholesterol,TC）的含量,确定F01WB1695B干预肝细胞脂肪变性的效果。利用报告基因细胞检测方法评价F01WB1695B对代谢性核受体过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferator-activated receptors,PPARs）的转录激动作用。利用实时荧光定量PCR方法检测F01WB1695B对脂代谢相关基因硬脂酰辅酶A去饱和酶1（stearoyl-Co A desaturase 1,SCD1）、酰基辅酶A氧化酶1（acyl-Co A oxidase 1,ACOX1）和脂肪酸合成酶（fatty acid synthase,FASN）mRNA水平的影响。结果：与正常组相比,20 mg/L油酸诱导L-02细胞48h后,油红O染色观察细胞内脂滴量明显增加,模型组TG和TC的含量显著升高,差异有统计学意义（P〈0.01）;F01WB1695B在20 mg/L浓度及以下时对脂肪化肝细胞无细胞毒作用,F01WB1695B干预脂肪化L-02细胞24 h后,与模型组相比,在0.2-2 mg/L浓度下细胞内脂滴量明显减少,胞内TG和TC值显著降低（P〈0.05）。瞬时转染的细胞报告基因的转录激活效应研究结果显示,F01WB1695B对核受体PPAR有较高的转录激活效应,其EC50值为0.5-2.1 mg/L。实时荧光定量PCR结果显示,F01WB1695B可下调脂肪酸合成相关基因SCD1和FASN mRNA的表达,上调脂肪分解代谢相关基因ACOX1 mRNA的表达。结论：黄酮类化合物F01WB1695B可明显降低脂肪变性肝细胞中TG及TC含量,抑制肝细胞脂肪变性,而该作用机制可能是通过激活PPAR通路,下调SCD1和FASN mRNA的表达,上调ACOX1mRNA的表达,进而降低细胞内甘油三脂水平。
- 朱京童郑智慧任晓路新华段宝玲孟雅娟
- 关键词：黄酮类非酒精性脂肪肝病过氧化物酶体增殖物激活受体
- 细胞周期调控因子CDC25A、B抑制剂F09ZB-860H的研究被引量：1
- 2014年
- 目的从真菌的代谢产物中筛选出对细胞周期调控因子CDC25A、CDC25B具有抑制活性的化合物,为研发新抗癌药物提供了先导化合物。方法利用基于重组表达的CDC25A和CDC25B建立的高通量筛选模型进行体外酶抑制活性测定,筛选获得活性菌株;筛选得到的阳性菌株,其发酵液溶剂提取物经硅胶柱层析及HPLC制备分离,得到活性化合物并通过综合波谱解析确定了活性化合物结构;利用肿瘤细胞株进行活性化合物体外抗肿瘤细胞增殖活性评价。结果从真菌F09ZB-860的代谢产物中分离得到活性化合物F09ZB-860H,其结构与脱氢弯孢菌素相同。该化合物对CDC25A和CDC25B的IC50值分别为4.0和14.9μg/mL。抗癌细胞增殖结果表明该化合物具有强肿瘤细胞增殖抑制活性,对人宫颈癌细胞株HeLa和人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的IC50值分别为0.7和2.8μg/mL。结论 F09ZB-860H是一个新的CDC25A和CDC25B双抑制剂,并具有强抗癌细胞增殖活性。
- 吴晓燕任晓郑海洲李业英范玉玲郑智慧张振亮路新华赵宝华
- 关键词：CDC25ACDC25B抑制剂
- 糖皮质激素受体α调节剂高通量筛选模型的建立及应用
- 2014年
- 目的建立不同分子作用机制的糖皮质激素受体α（GRα）调节剂高通量筛选模型，筛选新型糖皮质激素受体调节剂。方法克隆 GRα的配体结合域 LBD 和全长基因，构建哺乳动物细胞表达载体 pBIND-GAL4-GRα LBD、pTARGET-GRα，分别与已构建的含 GAL4响应元件5× UAS 的荧光素酶报告质粒 p5× UAS-luc 和含有4× GRE 的报告质粒pGRE-luc 共转染 HeLa 细胞，建立两种不同机制的报告基因细胞筛选方法，通过报告基因的表达检测化合物对 GRα受体转录调控功能的调节剂作用；利用实时定量 PCR 方法进一步验证化合物对糖皮质激素受体靶基因 mRNA 水平的调控作用。 结果经过分别共转染表达质粒和报告质粒，GRα激动剂地塞米松可剂量依赖地诱导5× UAS-luc 和4× GRE-luc两个模型的荧光素酶的表达，在5× UAS-luc 模型中，最大上调倍数可达（9.0±0.2）倍，EC50值为（0.28±0.07）mmol/L， Z＇因子为0.52。在4× GRE-luc 模型中，最大上调倍数可达（3.2±0.3）倍，EC50值为（1.81±0.13）mmol/L，Z＇因子为0.49。利用模型 pBIND-GAL4-GRαLBD/p5× UAS-luc从2000多个微生物和植物来源的天然以及合成化合物中筛选得到1个微生物来源的天然产物黑麦酮酸 D，黑麦酮酸 D 对 GRα具有2-3倍的激动活性。进一步的定量PCR 的结果说明黑麦酮酸 D 能有效上调多个 GRα调控的靶基因的表达。 结论两种报告基因筛选方法灵敏、稳定，可以用于 GRα调节剂的高通量筛选。
- 孙彩霞张振亮郑海洲路新华郑智慧赵宝华段宝玲
- 关键词：糖皮质激素受体Α生物应答调节剂降血糖药高通量筛选
