北京市自然科学基金(7042057)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：孙敬芬陈良安刘又宁范保星田庆更多>>
- 相关机构：中国人民解放军总医院军事医学科学院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肺鳞癌内存在亚型的分子迹象被引量：2
- 2004年
- 范保星孙敬芬田庆谢立新陈良安刘又宁王升启吴德昌
- 关键词：肺肿瘤鳞状细胞癌基因表达癌组织
- 内皮抑制素相互作用蛋白HT036基因的全长克隆及其促血管上皮细胞凋亡的分子机制
- 2006年
- 目的:克隆与内皮抑制素(endostatin)相互作用蛋白HT036基因的全长,进一步验证其与内皮抑制素的相互作用,初步阐明其促血管上皮细胞凋亡的分子机制。方法:实验于2004-10/2006-03在解放军总医院呼吸科实验室、军事医学科学院放射医学和生物工程研究所实验室完成。①根据已知HT036的EST序列设计引物,应用RACE技术,从人胎肝cDNA文库获取该基因全长。②采用免疫共沉淀和WesternBlot验证HT036蛋白与内皮抑制素在真核细胞内存在相互作用。③利用真核瞬时表达载体pCDNA3.1(+)在EVC304细胞中瞬时表达HT036蛋白,转染了HT036基因的EVC304细胞为试验组(重复两次);没有转染HT036基因的细胞为对照组,用流式细胞仪检测HT036基因对细胞凋亡和细胞周期的影响。结果:①HT036基因全长克隆及生物信息学分析结果:利用RACE技术成功获得HT036基因的全长,并在GENEBANK进行了注册,注册号AY775560。②免疫共沉淀和Western-blot的验证结果:证实HT036蛋白能与内皮抑制素在真核细胞中相互作用。③HT036基因对细胞凋亡和细胞周期的影响:成功构建了表达HT036基因的真核表达载体,两次试验转染ECV304细胞后24h的凋亡率平均为23.63%,而对照组仅为0.10%。结论:获得了一与内皮抑制素相互作用的新的蛋白HT036基因的全长,初步表明HT036参与了内皮抑制素调节的血管生成过程,并对血管上皮细胞具有促进凋亡的作用。
- 范保星张宝林孙敬芬曹璐陈良安刘又宁
- 关键词：抑制素类细胞凋亡克隆内皮抑制素
