国家自然科学基金(30671080)
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- 精胺对Azin1基因敲除小鼠体内Atp8a1基因表达调控的研究
- 2011年
- 目的 研究精胺对Azin1基因敲除小鼠体内Atp8a1基因表达的影响,并对其作用机理进行初步的探讨.方法 利用Real-time PCR检测正常小鼠和Azin1基因敲除小鼠体内Atp8a1基因的在mRNA水平上的差异表达情况;构建Atp8a1基因的启动子虫荧光素酶报告质粒;将启动子重组质粒转染NTH3T3细胞后,在细胞培养液中加入精胺,检测精胺对启动子活性的影响.结果 Atp8a1基因在Azin1基因敲除小鼠体内的表达量明显增加;精胺能够增强Atp8a1的启动子活性.结论 精胺能够通过增强Atp8a1的启动子活性而增强其在Ain1基因敲除小鼠体内转录水平的表达.
- 王李英田园园张磊秦栋栋李凯曲嘉琳汤华
- 关键词：多胺启动子基因敲除
- 鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因在小鼠发育过程中的作用
- 2009年
- 目的探索鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因在小鼠发育过程中的功能。方法用特殊的基因诱捕载体（genetrapping vector）制作了鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因敲除小鼠。用Western印迹、RT-PCR、X-gal染色方法分析该基因在突变小鼠体内的表达。PCR法鉴定小鼠不同发育时期的基因型。结果鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因在纯合型突变小鼠体内被抑制后，纯合型突变小鼠在出生后死亡。结论鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因是致死基因，对小鼠生存有不可缺少的作用。
- 罗蓉黄婷娉黄爱龙汤华
- 关键词：致死基因
- AZI基因被捕获的鉴定实验
- 2010年
- 目的 确立基因捕获细胞中被捕获的基因名称. 方法 Southern印迹确定合适的限制性内切酶,用质粒拯救（plasmid rescue）获得含有细胞染色体DNA的质粒,测序.结果 本次实验中,被捕获载体整合的基因是AZI基因. 结论质粒拯救方法能确立质粒整合细胞染色体上准确的位置.
- 唐任宽田园园张磊王李英汤华
- 精胺对Nup98基因的调控研究
- 2011年
- 利用基因芯片比较鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠和正常小鼠肝组织的表达差异;高效液相色谱法测定鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠和正常小鼠肝组织中的精胺含量;构建Nup98的启动子-虫荧光素酶报告基因质粒;脂质体Lipofectamine 2000TM转染小鼠细胞(NIH3T3),在含有精胺或正常培养条件下,测定虫荧光素酶活性。结果显示,Nup98基因在鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠肝组织表达增强;鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠肝组织中,精胺含量增高;成功构建Nup98的启动子-虫荧光素酶报告基因质粒pGL3-Nup98-P;精胺能在体外培养的条件下,增强虫荧光素酶的活性。这些结果证明精胺能激活Nup98基因的启动子活性,增强其在NIH3T3细胞中的表达。
- 张磊万涛田圆圆王李英李凯秦栋栋曲嘉琳汤华
- 关键词：精胺
- 腐胺对小鼠成纤维细胞中Atp8a1基因表达的影响
- 2011年
- 目的:研究腐胺对小鼠成纤维细胞中Atp8a1基因表达的影响,初步探讨其作用机制。方法:用基因芯片和Real-timePCR检测正常小鼠和Azin1(Antizyme inhibitor 1)基因敲除小鼠肝脏组织中Atp8a1基因的在mRNA水平上的表达;构建Atp8a1基因启动子的虫荧光素酶报告质粒pGL3-Atp8a1-P;将重组质粒转染NTH3T3成纤维细胞中,分别在含有4μg/ml腐胺和不含腐胺的条件下,用双荧光素酶检测系统检测虫荧光素酶活性。结果:在含有腐胺的培养条件下,转染Atp8a1基因启动子虫荧光素酶报告质粒的细胞虫荧光素酶的活性明显改变。结论:腐胺能够抑制Atp8a1基因启动子活性而降低其在NIH3T3成纤维细胞中的表达。
- 万涛李朝幸田园园王李英秦栋栋李凯曲嘉琳汤华
- 关键词：腐胺启动子基因表达
- 鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子小鼠体内的表达分析
- 2010年
- 目的:分析鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子(Ornithine decarboxylase antizyme inhibitor,AZI)在小鼠体内的表达情况。方法:RT-PCR,Northern blot,免疫组化染色。结果:RT-PCR,Northern blot揭示AZT基因(Oazin)的表达是全身性的,即各器官都表达。特别是脑,心,肾脏,肌肉,胸腺,睾丸。免疫组化染色显示AZT蛋白在心瓣膜细胞,肾小管周围的间质细胞以及肝细胞的间质细胞中高表达。结论:用RT-PCR,Northern blot以及免疫组化染色法揭示了AZT在RNA和蛋白水平小鼠体内中的表达情况。
- 王增产张小花万涛王李英刘湘汤华
