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上海市科学技术委员会科研基金(074119519)
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张立旻
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中介体复合物亚基19基因沉默对人膀胱癌细胞增殖和成瘤影响的实验研究
2012年
目的研究中介体复合物亚基19(midiatocomplexsubunit19,Medl9)基因沉默对人膀胱癌T24细胞株增殖和成瘤作用的影响。方法应用shRNA慢病毒载体感染T24人膀胱癌细胞沉默Medl9基因,应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹方法检测未感染组、阴性对照感染组以及shMedl9感染组细胞的Medl9基因表达情况;流式细胞仪分析各组细胞周期的变化;噻唑蓝(MTT)实验、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入实验、克隆形成实验评估肿瘤细胞增殖和生长能力;将T24细胞接种于裸鼠,进行小鼠成瘤实验,检测肿瘤细胞的致瘤能力。结果Medl9-shRNA慢病毒感染T24细胞后,感染组Medl9mRNA表达相对含量为0.35±0.03,与未感染组0.75±0.07和阴性对照组1.00±0.07比较差异有统计学意义(P〈0.05);感染组Medl9蛋白表达量与未感染组和阴性对照组比较有明显差异;感染组G0/G1期细胞比例为(77.50±0.29)%,与未感染组(69.81±0.81)%和阴性对照组(67.53±0.67)%比较差异有统计学意义(P〈0.05);MTT和BrdU实验表明感染组细胞存活数量和DNA合成较未感染组和阴性对照组显著降低(P〈0.05);克隆形成实验中感染组克隆数量为(91.33±6.11)个,较未感染组(179.00±18.36)和阴性对照组(191.00±19.16)显著减少(P〈0.05);小鼠成瘤实验中,24d时感染组肿瘤体积为(596.64±485.36)mm3,质量为(0.57±0.44)g,与未感染组(2611.40±396.68)mm3和(1.94±0.60)g,阴性对照组(2463.21±1451.66)mm3和(2.17±1.75)g,组间比较差异有统计学意义(P〈0.05)。结论Medl9基因沉默后人膀胱癌T24细胞的生长、增殖和成瘤能力均受到显著抑制,提示Medl9基因在膀胱癌形成过程中具有重要作用。使用shRNA技术抑制Medl9基因表达有望成为膀胱癌新的治疗手段之一。
汪伟
姜昊文
张琥
龚健
张立旻
陈忠清
丁强
关键词:
膀胱肿瘤
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