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重组金属硫蛋白2A质粒的构建与表达被引量：2: 2012年; 目的构建重组金属硫蛋白2A(MT-2A)原核表达质粒,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,为进一步研究MT-2A奠定基础。方法从人骨骼肌细胞cDNA文库中PCR扩增MT-2A基因DNA序列,构建重组表达质粒MT2A-pET32a,PCR与DNA测序法鉴定插入序列;重组细菌用IPTG诱导表达,His-bind亲和层析柱纯化MT-2A蛋白,Western blotting鉴定蛋白特性。结果扩增获得的MT-2A基因片段长186bp,DNA测序证实MT2A-pET32a重组质粒构建正确;表达的融合蛋白相对分子质量约为29×103,Western blotting证实为目的蛋白。结论成功构建了重组原核表达质粒MT2A-pET32a,在大肠埃希菌内诱导表达并纯化获得MT-2A。; 刘振杰赵树勇周静骆艳婷郑慧玲陈维春熊兴东徐宁刘新光; 关键词：基因表达大肠埃希菌

衰老相关蛋白prelamin A与MT-2A的相互作用: 2012年; 目的分析衰老相关蛋白prelamin A是否与MT-2A相互作用,以及MT-2A与衰老的关系。方法采用酵母双杂交方法从人骨骼肌文库中筛选prelamin A的相互作用蛋白,酵母一对一回复性杂交和荧光共定位验证MT-2A与prelamin A是否相互作用。RT-PCR分析MT-2A在正常和早老细胞中的表达。结果通过酵母双杂交方法从人骨骼肌文库中筛选到prelamin A的候选相互作用蛋白MT-2A,一对一回复性验证也证明两者能在酵母细胞中相互作用。构建含绿色荧光蛋白的MT-2A融合表达载体转染HEK-293细胞,激光共聚焦显微观察发现MT-2A能与带红色荧光蛋白的prelamin A蛋白在核膜共定位。研究还发现MT-2A的表达在早老细胞中显著下调(P<0.01)。结论 MT-2A作为一个新的prelamin A结合蛋白,可能在细胞早老过程中具有重要的作用。; 熊兴东刘振杰王君文周中军刘新光; 关键词：相互作用酵母双杂交衰老

PCR重叠延伸法结合分段克隆技术构建高GC含量基因突变载体被引量：3: 2012年; 目的:构建人类KAP-1基因定点突变载体,为研究该基因的功能奠定基础。方法:综合运用PCR重叠延伸法和分段定向克隆技术。结果:DNA测序结果表明定点突变载体构建成功。结论:成功构建高GC含量(局部高达80.50%),全长为2 500bp的人类KAP-1基因定点突变载体pCMV6-En-try-KAP-1,为全面深入研究KAP-1基因的功能奠定了基础。; 赵炜崔红晶方炳雄袁源刘玢刘宝华周中军刘新光; 关键词：PCR 高GC含量

MBD4/MED1的结构与功能: 2011年; 含甲基化CpG结合域蛋白质4(methyl-CpG-binding domain protein 4,MBD4)是MBD核蛋白家族中的一员,它包含一个能特异结合甲基化CpG的MBD结构域和一个具有糖苷酶活性的DNA糖苷酶结构域。该蛋白质能特异地结合甲基化CpG岛,并且在DNA错配修复、抑制转录和调节凋亡等过程中发挥重要功能,并与微卫星不稳定性密切相关。MBD4是一个重要的DNA损伤修复蛋白,多方面的报道表明其许多功能都牵涉到细胞衰老。本文就其结构与功能的研究进展作一综述。; 熊卿圆熊兴东刘新光周中军; 关键词：甲基化错配修复凋亡衰老

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东莞市科技计划项目(2008108101045)