国家教育部博士点基金(20060183010)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
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- 金黄色葡萄球菌FnBP配体结合区基因的克隆及其原核表达被引量：1
- 2009年
- [目的]克隆金黄色葡萄球菌FnBP配体结合区基因,并构建原核表达载体,进行原核表达。[方法]设计引物,采用PCR方法扩增FnBP配体结合区基因,T-A克隆后,构建了克隆质粒pMD18-FnBP。用BamH I和EcoR I双酶切pMD18-FnBP和pET28a(+),将纯化的基因FnBP亚克隆至pET28a(+),构建重组表达质粒pET28a-FnBP,并将其转化至大肠杆菌感受态BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,并对表达产物进行分析。[结果]PCR扩增出1条约370 bp的目的片段,表达产物经SDS-PAGE分析,在30 kDa处出现了与目的蛋白一致的外源蛋白带,Western blot分析表明该蛋白具有金黄色葡萄球菌的抗原性。[结论]已成功构建了FnBP配体结合区基因,并在原核细胞中表达。
- 尹荣兰杨正涛张艳晶刘辉刘珊杨琦曹永国张乃生
- 关键词：金黄色葡萄球菌基因克隆原核表达
- 金黄色葡萄球菌FnBA活性基因的克隆及其原核表达
- 2009年
- 根据GenBank中纤连蛋白结合蛋白A基因(FnBA)序列设计了1对特异性引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板,进行PCR扩增;结果获得了1 735 bp的DNA片段。将PCR产物克隆至pMD18-T载体中,成功地构建了克隆质粒pMD18-T-FnBA。以HindⅢ和BamHⅠ双酶切pMD18-T-FnBA和pET28a(+),将纯化的基因FnBA亚克隆至pET28a(+)中,构建了原核表达质粒pET28a-FnBA,并将其转化至E.coliBL21感受态细胞中,经1 mmol/L IPTG诱导和SDS-PAGE分析,在约85 000处出现了与预期目的蛋白一致的外源蛋白带。又经West-ern-blotting分析表明,该蛋白具有金黄色葡萄球菌的抗原性。
- 张艳晶尹荣兰杨正涛张乃生周晓菲
- 关键词：金黄色葡萄球菌克隆原核表达
- 金黄色葡萄球菌ClfA基因的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：3
- 2009年
- 根据GenBank中ClfA基因序列设计特异性引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板,进行PCR扩增,获得了约2 300 bp的DNA片段。将PCR产物克隆至pMD18-T载体中,构建了克隆质粒pMD18-ClfA。用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pMD18-ClfA和pET28a(+),将纯化的基因ClfA亚克隆至pET28a(+),构建重组质粒pET28a-ClfA,并将其转化至大肠杆菌感受态BL21(DE3)中,经1 mmol/L IPTG诱导和SDS-PAGE分析,在87 000处出现了与目的蛋白一致的外源蛋白带,Western-blotting分析表明,该蛋白具有金黄色葡萄球菌的抗原性。
- 尹荣兰杨正涛张艳晶刘辉杨琦刘珊张乃生
- 关键词：金黄色葡萄球菌克隆原核表达
