国家科技重大专项(2012ZX09301003)
- 作品数：16 被引量：36H指数：3
- 相关作者：刘刚陈惠鹏李玉霞凌焱刘克良更多>>
- 相关机构：军事医学科学院安徽大学吉林大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生理学化学工程更多>>
- 胰高血糖素样肽1或其类似物体外生物活性检测方法的建立被引量：4
- 2015年
- 目的:通过对不同活性检测方法的综合比较,筛选最适的胰高血糖素样肽1(GLP-1)或其类似物的体外活性检测方法,为GLP-1类似物的体外生物活性检测奠定基础。方法:以GLP-1作为阳性药物,用MTT方法检测其对RIN-m-5F、MIN6细胞增殖的影响;用ELISA方法检测其对INS-1、MIN6细胞胰岛素分泌量的影响;用ELISA方法检测其对BHK-GLP-1R细胞cAMP分泌水平的影响。通过对上述方法的综合比较,筛选出最适的活性检测方法。结果:GLP-1对细胞增殖的影响实验结果并不显著,对胰岛素分泌量影响的实验效果明显,对cAMP分泌水平的实验无明显效果。结论:ELISA检测GLP-1或其类似物对MIN6细胞胰岛素分泌量实验可用于GLP-1或其类似物的体外活性检测。
- 邵妤赵威王微曲国龙阚乃鹏凌婧怡谭俊杰刘刚陈惠鹏
- 关键词：2型糖尿病胰高血糖素样肽1类似物活性检测
- 新的α-氨基酰胺衍生物的设计合成及活性评价
- 2020年
- 目的设计合成新的含α-氨基酰胺结构的化合物,为开发治疗神经病理性疼痛药物提供先导化合物。方法以拉芬酰胺(ralfinamide)为先导化合物,将A环部分替换成苯并杂环结构2,3-二氢苯并呋喃或2,3-二氢苯并[b][1,4]二呕恶英,得新化合物5a^5f。通过福尔马林舔足实验和体外模片钳实验,评价各化合物的体内外生物活性。结果在体内福尔马林模型上,化合物5e的镇痛活性优于阳性药拉芬酰胺(P<0.05),活性提高达60%以上;体外模片钳实验结果显示,除5d外,其他化合物对钠离子通道Nav1.7的抑制活性明显低于阳性药拉芬酰胺(P<0.05或P<0.01)。结论通过对拉芬酰胺A环结构进行优化,得到了镇痛活性比拉芬酰胺更好的新化合物。本研究结果可为相关研究提供有益参考。
- 童坤任凤霞程京超于子兴贾红新史卫国
- 关键词：神经病理性疼痛
- 一种高保真单向DNA合成方法初步探索
- 2014年
- 目的建立一种高保真、简单快速的DNA片段合成方法。方法提出一种高保真DNA单向合成方法(high fidelity DNA unidirection synthesis method,HFUS),主要在Phusion DNA聚合酶、BsrDⅠ限制性内切酶和λ外切酶3种酶协同作用下,将一条正向DNA单链和数条反向DNA单链通过逐个顺序扩增的方式,最终合成出目的DNA片段。该方法采用37℃、50℃和72℃3个温度的快速转换实现片段扩增的分步有序化合成。结果通过HFUS法,初步合成出2条长度分别为340 bp、450 bp的DNA随机序列片段。结论该研究探索了一种新的合成DNA片段的方法,初步实现了长达450 bp DNA片段的快速合成,为DNA合成方法提供了新的思路。
- 吴逊李玉霞李北平李炳娟白东梅张昕凌焱周围刘刚陈惠鹏
- 应用改构的炭疽毒素作为靶向肿瘤细胞的药物递送系统及其效果评价被引量：2
- 2013年
- 目的:通过改造炭疽毒素保护性抗原Protective Antigen(PA)及致死因子Lethal Factor(LF),尝试建立更加广谱的新型炭疽毒素靶向给药系统并对其递送效率进行定量评价。方法:采用基因工程手段,分别构建了3种改构的天然炭疽毒素保护性抗原PA及炭疽毒素的LF N端融合海肾荧光素酶(Luciferase)的LFn-linker-Luc的大肠杆菌重组表达体系。利用CCK-8法评价改构PA和LF共同作用肿瘤细胞后的细胞存活率;利用改构PA和LFn-linker-Luc与肿瘤细胞共孵育,通过测定细胞内荧光素酶活性,评价改构PA靶向肿瘤细胞的效果。结果:体外酶解实验证明构建的改构PA蛋白能够被正确地酶解成目的大小的片段;改构PA和LF共同作用肿瘤细胞能够显著降低细胞存活率;利用LFn-linker-Luc能够评价改构PA的靶向效率,PA蛋白的改构方式与其递送效率相关。结论:设计并改构的炭疽毒素药物递送系统,能够实现特异性靶向肿瘤细胞的效果,并具有更广谱的作用效果,为研制新型广谱抗肿瘤药物提供了新的思路和方法。
- 李炳娟李玉霞李北平凌焱周围李伟东林海龙梁龙刘刚张景海陈惠鹏
- 关键词：炭疽毒素保护性抗原肿瘤靶向治疗
- 多硫代二酮哌嗪类化合物C87体外对肿瘤细胞生长的抑制作用及对活性氧产生的影响被引量：1
- 2015年
- 目的研究多硫代二酮哌嗪类化合物C87对肿瘤细胞生长的影响及其可能机制。方法用磺酰罗丹明B法观察C87 0.05~1μmol·L-1与A549,HCT116,He La和SMMC7721作用24,48和72 h对肿瘤细胞存活率的影响,并计算50%生长抑制浓度（GI50）;用流式细胞术检测C87 0.1~2.5μmol·L-1作用HCT116和He La细胞6 h,C87 2.5μmol·L-1作用0~6 h活性氧（ROS）的生成量;用流式细胞术检测C872.5μmol·L-1伴随给予抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）作用HCT116和He La细胞6 h ROS的生成量;用SRB法观察C87 0.05~1μmol·L-1伴随给予NAC作用24和48 h对HCT116细胞存活率的影响。结果C87 0.05~1μmol·L-1作用24,48和72 h,可明显抑制A549,HCT116,He La和SMMC7721细胞存活（P〈0.05）,且具有浓度依赖性（72 h,r2=0.946,0.989,0.973和0.984,P〈0.05）;C87 1μmol·L-1与上述4种肿瘤细胞作用24,48和72 h能时间依赖性地抑制细胞存活（r2=0.983,0.956,0.951和0.873,P〈0.05）。C87 0.25~2.5μmol·L-1与He La细胞和HCT116细胞作用6 h,可诱发细胞内ROS产生,且呈浓度依赖性（r2=0.760,P=0.045;r2=0.987,P=0.001）;C87 2.5μmol·L-1作用0.5~6 h,诱导ROS的产生呈时间依赖性（r2=0.886,P=0.017;r2=0.994,P=0.000）。给予抗氧化剂NAC后能明显抑制C87引起的He La细胞和HCT116细胞ROS生成（P〈0.05）,NAC 5和10 mmol·L-1可明显逆转C87引起的HCT116细胞死亡,GI50值明显增大,作用24 h时GI50为1.446和1.134μmol·L-1（C87处理组为0.513μmol·L-1）;处理48 h时GI50为0.882和1.166μmol·L-1（C87处理组为0.333μmol·L-1）。结论化合物C87对A549,HCT116,He La和SMMC7721肿瘤细胞的生长具有抑制作用,其机制可能与其诱导细胞内氧化应激有关。
- 高艺洋魏晓莉杨晓雯任凤霞郑建全郑志兵苏瑞斌
- 关键词：活性氧
- 二价HIV-1融合抑制剂的设计、合成与活性评价被引量：3
- 2013年
- 针对人免疫缺陷病毒跨膜糖蛋白(HIV-1 gp41)N末端重复序列靶标设计二价融合抑制剂,以C肽为模板,通过共价交联形成类似发夹结构的相互平行的2条肽链,研究了二价C肽分子不同连接位点与不同连接臂对抗HIV融合活性的影响.细胞-细胞融合活性测试表明,与单价分子相比,所设计的基于N末端交联的C34或T20的二价分子在前体共价交联后,活性明显提升.基于C34或T20的N末端与C末端均存在发生协同效应的可能性,在C34的N末端设计中β-丙氨酸为最适连接臂,而在C末端的设计中C34C的融合活性提高最大.单价分子CβAC34经过氧化形成二硫键连接的二价分子BiCβAC34,融合活性从43.7 nmol/L提高到6.4 nmol/L,表明二价抑制剂中2条C肽链间具有良好的协同效应.本文结果表明,针对gp41靶标设计的二价融合抑制剂能够相互协同.
- 凌彦博王昆姜喜凤蔡利锋刘克良
- 关键词：融合抑制剂
- pH和还原性双响应性壳聚糖纳米粒子作为药物传输载体被引量：3
- 2015年
- 用硫辛酸修饰壳聚糖并制备纳米粒子,用催化量的二硫苏糖醇(DTT)处理得到二硫键交联的壳聚糖纳米粒子.二硫键结构的引入不仅使纳米粒子具有还原相应性,而且还引入疏水基团,疏水性的抗癌药阿霉素和荧光探针荧光素通过疏水作用负载于纳米粒子内.二硫交联结构的形成使负载的阿霉素在没有还原剂的环境中(模拟血液的低还原环境)的释放速率大大减慢,而在10 mmol/L DTT(模拟细胞内高浓度谷胱甘肽环境)存在下,交联纳米粒子负载的阿霉素快速释放,这可归因于DTT还原二硫键使交联结构破坏.流式细胞实验表明,当介质的p H值由7.4(血液和正常组织p H值)降低到7.0、6.8和6.5(模拟肿瘤组织的微酸性环境)时,交联纳米粒子进入细胞的倾向逐渐增加,这是由于在中性环境中纳米粒子表面是电中性和亲水性的,而在酸性介质中,氨基的质子化使纳米粒子表面带正电荷,zeta电位数据证实这种推断.细胞毒性实验表明,在p H6.5的环境中负载阿霉素的交联纳米粒子对He La细胞的毒性大于在p H 7.4时的毒性.
- 徐闯王筱菊王晨宏阎虎生刘克良
- 关键词：壳聚糖二硫键阿霉素
- 利用Bio-BglBrick方法表达紫杉醇生物合成酶被引量：1
- 2014年
- 目的:进行紫杉醇药物生物合成前五步催化酶二磷酸盐合酶(GGPPS)、紫杉二烯合酶(TS)、紫杉二烯5α羟化酶(THY5α)、紫杉二烯5α-O-乙酰转移酶(TAT)和紫杉烷10β羟化酶(TDH)基因在大肠杆菌异源生物合成途径的组建及串联,实现单个表达及串联表达,并试图通过连续生物催化获得紫杉醇中间体紫衫二烯。方法:依据合成生物学中Brick基因组装方法,通过对载体pET30a的酶切位点进行定向改造,设计独特的BglⅡ/BamHⅠ和XbaⅠ/SpeⅠ串联表达盒,在大肠杆菌BM Rosetta(DE3)中表达产物。结果:设计多基因表达盒,实现紫杉醇药物生物合成前五步催化酶的单个表达,GGPPS和TS以及THY5α、TAT和TDH的串联表达。结论:利用BglBrick/BioBrick基因组装方法,可以实现紫杉醇生物合成催化酶的快速组装及后续表达。
- 金晶王微邵妤陈章凌焱李玉霞宋永波刘刚陈惠鹏
- 关键词：紫杉醇生物合成异源表达
- μ/δ阿片受体双重激动剂研究进展
- 2021年
- 阿片类镇痛药对于中度至重度剧烈疼痛的治疗仍不可替代,但由于其产生的成瘾性等不良反应,使用受到限制,临床急需新一代高效安全的阿片类镇痛药。目前有关μ与δ阿片受体间的相互调节作用的研究被大量报道,μ/δ二聚体的存在也为受体的相互作用提供了分子基础,设计具有μ/δ双重激动效应的分子是新一代具有强镇痛作用同时减少不良反应阿片类药物的发展方向。本文按照μ/δ双重激动分子设计策略分类,综述了近年来μ/δ双重激动剂的研究进展。
- 李京任凤霞史卫国
- 补骨脂素和异补骨脂素对体外细胞色素P450酶活性的抑制和诱导作用被引量：18
- 2012年
- 目的探讨补骨脂素(PSO)和异补骨脂素(IPSO)对细胞色素P450(CYP)活性的抑制和诱导作用。方法将人肝微粒体或鼠肝微粒体与PSO或IPSO以及CYP特异性探针底物共孵育30 min,分别以非那西丁O-脱乙基、甲苯磺丁脲4-羟基化、美芬妥因-4-羟基化、右美沙芬O-脱甲基化和咪达唑仑1'-羟基化为同工酶CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6(大鼠2D2)和CYP3A4(大鼠3A1/2)代谢活性的标志,用HPLC-MS/MS法检测相应代谢产物的生成量并计算相应的IC50值,评价PSO和IPSO对5种CYP同工酶的潜在抑制作用。将PSO和IPSO或阳性诱导剂与"三明治"培养大鼠肝原代细胞共孵育72 h后,再加入CYP探针底物孵育1 h,检测相应代谢产物的生成量,与阳性诱导剂组比较,评价二者对CYP1A和CYP3A的诱导作用。结果 PSO和IPSO对人肝微粒体和鼠肝微粒体的CYP1A2均有较强的抑制作用,在人肝微粒体中的IC50值分别为0.17和0.13μmol·L-1;在鼠肝微粒体中的IC50值分别为0.47和0.36μmol·L-1。二者对人肝微粒体的CYP2D6也有中等强度的抑制作用,IC50值分别为3.59和9.51μmol·L-1。PSO和IPSO 100μmol·L-1可分别将大鼠肝细胞的CYP3A活性提高1.18和0.96倍,有一定的诱导作用。结论 PSO和IPSO能显著抑制CYP1A2酶活性,对CYP3A有一定的诱导作用。
- 钟玉环沈国林原梅刘万卉李桦
- 关键词：异补骨脂素药物相互作用微粒体
