国家自然科学基金(81060214)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：莫曾南杨小丽吕文鑫张悦宁林志弟更多>>
- 相关机构：广西医科大学广西医科大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金广西壮族自治区自然科学基金更多>>
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- 高表达重组人组织激肽释放酶7基因的前列腺癌单克隆细胞株的构建
- 2014年
- 目的建立稳定高表达重组人组织激肽释放酶7基因(KLK7)的前列腺癌细胞株DU145,为前列腺癌发生机制的研究奠定基础。方法 PCR法扩增KLK7 cDNA,并克隆到真核表达载体pcDNA3.1上;经过限制性内切酶酶切、DNA测序验证正确后,以脂质体法转染人前列腺癌DU145细胞;通过G418筛选,每个单克隆细胞扩大培养,建立稳定转染KLK7的DU145单克隆细胞株。采用Western blot法检测DU145细胞株KLK7表达。结果酶切鉴定及DNA测序分析显示pcDNA3.1-KLK7真核表达载体成功构建;转染后,成功获得稳定高表达KLK7的DU145单克隆细胞株。Western blot结果显示,pcDNA3.1-KLK7转染的DU145细胞KLK7表达量明显高于转染空载体组细胞(P<0.01)。结论 pcDNA3.1-KLK7真核表达载体的建立及稳定高表达KLK7的前列腺癌单克隆细胞株的建立,为研究KLK7在前列腺癌发生发展中的作用提供了条件。
- 林志弟莫林键张成东宣强张悦宁莫曾南滕若冰杨小丽
- 关键词：前列腺癌真核表达载体
- 组织激肽释放酶7高表达前列腺癌PC-3单克隆细胞株的构建及其侵袭性研究被引量：2
- 2020年
- 目的:构建重组人组织激肽释放酶7(KLK7)表达载体,建立稳定过表达KLK7的前列腺癌细胞株PC-3,并研究其细胞侵袭性。方法:将扩增后的KLK7cDNA克隆到表达载体pcDNA3.1上;使用限制性内切酶酶切后,DNA测序验证。然后,通过脂质体法转染人前列腺癌细胞株PC-3;选用G418进行筛选,并扩大培养每个单克隆细胞,进而建立稳定转染后的KLK7单克隆细胞株PC-3;Western blot检测目的蛋白的表达。通过细胞侵袭性试验了解其细胞侵袭性。结果:①通过酶切鉴定、DNA测序分析并证明,成功构建pcDNA3.1-KLK7表达载体;②成功获得稳定过表达KLK7的前列腺癌单克隆细胞株PC-3;③Western blot结果显示:经过pcDNA3.1-KLK7转染后的细胞与未转染的细胞表达量比较有统计学差异(P<0.01);④细胞侵袭性试验结果显示:转染后的细胞侵袭性高于未转染的细胞。结论:成功的建立pcDNA3.1-KLK7表达载体及稳定过表达KLK7的前列腺癌PC-3单克隆细胞株,同时证明其细胞侵袭性,为研究KLK7在前列腺癌发生、发展中的作用奠定了基础。
- 吕文鑫莫曾南杨小丽
- 关键词：前列腺癌细胞侵袭性
