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家蝇幼虫防御素基因MddⅠ的克隆与原核表达被引量：3: 2013年; 以猪肺炎支原体诱导家蝇幼虫的cDNA为模板,通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)对MddⅠ基因进行扩增,对扩增产物测序和分析。构建重组表达质粒pET-32a-MddⅠ,在大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG对其诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析。结果,MddⅠ基因全长475bp,其开放阅读框(ORF)276bp,编码91个氨基酸,编码蛋白的理论分子质量9.7ku,理论等电点(pI值)8.89,存在信号肽的剪切位点,亲水性较强且无明显跨膜区,α螺旋和不规则盘绕为其主要结构元件,β折叠散布在整个蛋白质中。具有Defensin-2家族保守区域,与GenBank中登录号为AY260152同源性最高,达78%。构建的重组表达质粒pET-32a-MddⅠ在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出分子质量约为25ku的蛋白质,与预期大小一致。结果表明,MddⅠ基因具有完整的开放阅读框,为新的家蝇防御素基因;MddⅠ基因在原核表达系统中的表达为进一步研究表达产物的生物学活性和免疫学活性奠定了基础。; 万玲傅小蒙唐艳孙小宁裴志花刘树明马红霞; 关键词：家蝇防御素原核表达

蜜蜂螨病及残翼病毒病混合感染的诊治: 2016年; 蜜蜂螨病是由大蜂螨和小蜂螨引起的一种蜂的常见寄生虫疾病。大、小蜂螨对蜂群危害很大,常给养蜂生产造成严重的经济损失,甚至可能引起蜂群崩溃综合征[1-2]。西方蜜蜂和部分杂交蜂对蜂螨的易感性远高于东方蜜蜂（中华蜜蜂）。同时蜂螨在蜜蜂个体和蜂群间的传播和对蜜蜂几丁质外壳的侵蚀,可导致多种病原的入侵使蜜蜂染病,造成蜂群大面积感，; 朱世馨勾长龙王家祯马红霞高云航; 关键词：小蜂螨螨病流蜜期囊状幼虫病瓦螨

鸭肝炎病毒PCR-ELISA检测方法的建立被引量：6: 2016年; 为建立检测鸭肝炎病毒(DHV)的PCR-ELISA方法,根据DHV VP1基因序列设计1对分别标记生物素和地高辛的引物,采用固相杂交法,将生物素标记的探针固定在酶标板上,再与地高辛标记的产物进行杂交,并通过反复优化确定了10 mg/m L链霉亲和素包被液、10 g/L BSA封闭液、0.5 pmol/L探针、1∶4 000稀释的酶标二抗及最适杂交时间等最佳反应条件,建立了DHV PCR-ELISA检测方法。该方法与鸭肠炎病毒、鸭细小病毒和鸭疫里氏杆菌等无交叉反应,说明该方法特异性强;敏感性试验结果表明,PCR-ELISA最低能检出0.37 pg/L的DHV RNA,其敏感度比常规PCR高100倍。用该方法对50份雏鸭肝提取的RNA样本进行检测,阳性检出率为82%,较RT-PCR检出率高46%。结果表明,该PCR-ELISA方法具有特异、敏感、安全的特点,从而为鸭病毒性肝炎流行病学研究及临床诊断提供了新的途径。; 耿昕颖刘艳萍张福君王巍毕彦晖马红霞高云航; 关键词：鸭肝炎病毒 VP1基因 PCR-ELISA

绵羊溶血性曼氏杆菌的分离鉴定被引量：13: 2016年; 本研究对疑似患有溶血性曼氏杆菌的病羊肺组织进行病原分离,并对分离菌株进行生化反应、动物致病性试验、PCR鉴定和药敏试验。结果表示,分离菌株为革兰阴性短杆菌且具有较强的致病性,经生化试验和PCR鉴定为溶血性曼氏杆菌,该分离菌株对大部分抗菌药物敏感,对红霉素和庆大霉素、磺胺间甲氧嘧啶耐药。本研究为溶血性曼氏杆菌病选择合理、正确的抗菌药物提供了一定的科学依据,并为进一步研究其耐药机制奠定了基础。; 王羽董文龙汪艳王巍马红霞高云航钱爱东; 关键词：耐药

利用CODEHOP克隆意蜂Hsp90基因及生物信息分析被引量：1: 2016年; Hsp90(heat shock protein 90)是热休克蛋白家族中重要成员,在蜜蜂多种生理调控、应激及免疫反应中起到重要作用。本研究利用CODEHOP(consensus-degenerate hybrid oligonucleotide primers)法通过特定氨基酸序列设计简并引物首次克隆纯系意大利蜜蜂(Apis mellifera Ligustica Spin)Hsp90基因序列,对其进行生物信息学分析并构建系统进化树。结果表明蜜蜂Hsp90基因在进化中比较保守,经过比对意蜂与西方蜜蜂DNA序列同源性为99%;与大蜜蜂、小蜜蜂和熊蜂同源性分别为97%、97%和90%,该DNA片段编码一个由320个氨基酸组成的肽段,种属间氨基酸差异率为30%,氨基酸替代率在0.01到3.28之间。利用该方法设计简并引物,简并度低,特异性强,为蜜蜂未知功能基因克隆提供了便捷有效途径,开展Hsp90基因功能研究在遗传变异及种质资源保护中具有重要的意义。; 朱世馨耿昕颖王家祯董文龙贾小营马红霞高云航; 关键词：意大利蜜蜂热休克蛋白90

牛多杀性巴氏杆菌诱导家蝇幼虫抑制性消减文库的构建: 2013年; 采用牛多杀性巴氏杆菌针刺法诱导3日龄家蝇幼虫,提取诱导后的家蝇幼虫总RNA并分离纯化得到高质量的mRNA。运用抑制性消减杂交(Suppression subtractive hybridization,SSH)技术构建家蝇幼虫差异表达的cD-NA消减文库,并利用反向Northern杂交技术筛选差异表达基因。结果表明,随机挑取的阳性克隆片段大小均在200～750bp,通过反向Northern杂交共筛选出183个差异表达基因,经BLAST比对分析后鉴定出大量与家蝇免疫防御功能相关的基因和一部分无同源性基因。; 王莹高云航马红霞裴志花唐艳; 关键词：家蝇幼虫抑制性消减杂交 BLOT

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吉林省科技发展计划基金(20111820)