国防科技工业技术基础科研项目(K01021061501)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 相关作者：单云波缪竞诚杨吉成谢宇锋胡志清更多>>
- 相关机构：连云港市第一人民医院苏州大学更多>>
- 发文基金：国防科技工业技术基础科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 逆转录病毒载体介导的hLIF基因真核稳定表达体系的建立
- 2008年
- 目的构建逆转录病毒载体介导的人白血病抑制因子(human leukemia inhibitory factor,hLIF)基因真核稳定表达细胞株。方法采用DNA重组技术,构建并鉴定重组逆转录病毒载体pEGZ/MCS-HA-hLIF;以脂质体转染法,将重组逆转录病毒载体与辅助质粒HIT456、HIT60共转染入包装细胞系293T包装逆转录病毒,感染人胚肾成纤维细胞系,经zeocin筛选获得真核稳定表达细胞株;采用RT-PCR法和ELISA法鉴定hLIF基因的转录和翻译,并检测表达上清中hLIF因子对人白血病细胞HL-60的生物学活性。结果PCR产物电泳后于609 bp处见特异性条带。双酶切出现两条带,其中位于609 bp处可见相应条带。核酸测序结果与GenBank中所报道的hLIF基因的CDS序列完全一致。RT-PCR结果显示表达细胞中存在hLIF基因转录,ELISA结果测定表达上清中hLIF的浓度为110.134 pg/ml。结论携带hLIF基因的重组逆转录病毒载体pEGZ/MCS-HA-hLIF构建成功,并且获得了稳定表达hLIF基因的人胚肾成纤维细胞株,这为此基因的临床应用和实验研究打下了基础。
- 苗莉郁心谢宇锋盛伟华杨吉成刘铁连单云波井莹莹胡志清缪竞诚
- 关键词：逆转录病毒载体基因重组真核表达
