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青海牦牛与云南牦牛乳球蛋白基因5′调控区核苷酸序列同源性比较: 2006年; 利用一对PCR引物,寡聚核苷酸序列的上游引物为5-′gCg,AAT,TCA,TCC,CAC,gTg,CCT,gC-3;′下游引物为5-′gAg,AAT,TCC,Tgg,ggA,ggg,ACC,TT-3′。经68℃退火及30轮循环的PCR程序后,分别克隆来自我国青海和云南地区牦牛的乳球蛋白基因的5′调控区1 447 bp的DNA片段。将该片段从琼脂糖凝胶中回收,克隆在pMD18-T Vector后进行序列测定。序列分析结果表明,青海牦牛该序列的核苷酸序列与文献报道的奶牛该基因的同源性为97.65%,云南牦牛该序列的核苷酸序列与奶牛该基因的同源性为96.8%,青海牦牛与云南牦牛该基因片段的核苷酸序列同源性为99.4%。; 刘建忠周丽芳朱艳君田为宇敖敬马季骅; 关键词：牦牛同源性

牦牛乳球蛋白基因5′调控区的分离、克隆及序列分析被引量：3: 2005年; 根据文献设计1对PCR引物,寡聚核苷酸序列上游引物为:5-′gCg,AAT,TCA,TCC,CAC,gTg,CCT,gC-3′,下游引物:5-′gAg,AAT,TCC,Tgg,ggA,ggg,ACC,TT-3′。经68℃退火及30轮循环的PCR程序后扩增出长度为1 447 bp的DNA片段,将该片段从琼脂糖凝胶中回收,克隆到pMD18-T Vector后进行序列测定。序列分析结果表明,牦牛乳球蛋白基因5′调控区与文献报道的奶牛该基因同源性为97.65%,突出的碱基差异为牦牛乳球蛋白基因5′调控区发生了1个位点连续3个碱基的缺失突变和另一位点1个碱基的插入突变。该研究也为开展以牦牛乳球蛋白基因5′调控区为启动子的乳腺生物反应器研究准备了条件。; 刘建忠朱艳君周丽芳马季骅; 关键词：牦牛 PCR扩增

洪山公鸡精液冷冻保存方法及效果的研究被引量：4: 2005年; 研究比较了两种不同类型的冷冻精液在解冻后精子活率、顶体完整率以及受精率方面的差异。实验结果表明,细管型冷冻精液解冻后的活率显著高于颗粒型(n=20,p<0.01)。细管型冷冻精液解冻后的顶体完整率显著高于颗粒型(n=20,p<0.05)。受精实验结果表明,两种类型的冷冻精液的受精率都显著低于以新鲜精液输精的对照组(p<0.01),颗粒型冷冻精液的受精率显著高于细管型冷冻精液(p<0.01)。; 刘建忠朱艳君张一玲; 关键词：冷冻保存受精率

DMA和甘油对公鸡精子冷冻保护作用的比较: 2006年; 比较了6%的DMA和11%的甘油冷冻洪山公鸡精液后精子在存活率、顶体完整率方面的差异。结果表明,用DMA做冷冻保护剂的颗粒型冷冻精液解冻后的精子存活率和顶体完整率分别为0.320±0.041和0.600±0.049,用甘油做冷冻保护剂的颗粒型冷冻精液解冻后的精子存活率和顶体完整率分别为0.313±0.036和0.597±0.040,两者差异不显著。用DMA做冷冻保护剂的细管型冷冻精液解冻后的精子存活率和顶体完整率分别为0.388±0.034和0.652±0.042,用甘油做冷冻保护剂的细管型冷冻精液解冻后的精子存活率和顶体完整率分别为0.433±0.054和0.750±0.048,前者在精子存活率(P<0.05)和顶体完整率(P<0.01)方面都显著低于后者。; 刘建忠; 关键词：N,N-二甲基甲酰胺甘油

公鸭、公鸡精子对在液氮中低温冷冻保存耐受力的比较研究被引量：1: 2006年; 比较公鸭和公鸡精子经低温冷冻保存后存活率、顶体完整率方面的差异。结果表明,公鸭冷冻精液解冻后的精子存活率和顶体完整率都不同程度地高于相同类型的公鸡冷冻精液,但差异均未达到显著水准(P>0.05)。; 刘建忠周丽芳朱艳君张一玲; 关键词：冷冻保存顶体完整率

一种乳腺特异性表达载体的构建: 2005年; 以兔乳清酸性蛋白基因启动子(rWAP,6.3 kb)、兔乳清酸性蛋白基因终止子(200 bp)和人瘦蛋白基因(cDNA,1.0 kb)经过一系列的亚克隆操作,构建了一种通用性的乳腺特异性表达载体,从而为通过转基因小鼠动物模型表达外源基因提供了极大的方便。; 刘建忠周丽芳朱艳君马季骅

基因敲除技术研究进展被引量：9: 2006年; 基因敲除技术是研究功能基因作用的重要方法,是后基因组时代的重要研究内容。从基因敲除的细胞基础、基因敲除载体的构建及发生同源重组干细胞的筛选、基因敲除动物模型的建立、基因敲除与基因拯救、国内基因敲除技术的研究现状等方面概括了基因敲除技术的研究进展和该技术目前存在的主要问题。; 刘建忠敖敬田为宇马季骅; 关键词：基因敲除功能基因动物模型

公鸡精子冷冻保存后活率和顶体破损率的相关关系被引量：4: 2005年; 用BPSE为稀释液,以终浓度为11%(V/V)的甘油作低温保护剂,冷冻洪山公鸡精液。测定了细管型和颗粒型2种类型的冷冻精液解冻后的精子存活率和顶体破损率,并对冻后存活率和顶体破损率进行了相关和回归处理。测定结果表明,细管型冷冻精液解冻后的精子存活率和顶体破损率分别为0.451±0.056和0.392±0.054(n=20)。颗粒型冷冻精液解冻后的精子存活率和顶体破损率分别为0.339±0.040和0.543±0.052(n=20)。前者解冻后的活率极显著高于后者,而顶体破损率则极显著低于后者。相关分析结果表明,细管型冷冻精液解冻后精子存活率与顶体破损率之间的回归方程为y=0.7293-0.7126x,相关系数r为-0.697(P<0.01),而颗粒型冷冻精液解冻后的精子存活率与顶体破损率之间的相关系数为-0.0625(P>0.05),表明两者之间无显著相关。本研究为输入相等数量的活精子时细管型冷冻精液受精率显著高于颗粒型冷冻精液的试验结果提供了一定的理论解释,也为将保存家畜冷冻精液的方法应用于家禽方面作了有益的探索。; 刘建忠郑惠玲张一岭; 关键词：活率冷冻保存

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湖北省教育厅青年基金(2004D016)