国家自然科学基金(30070348)
- 作品数：5 被引量：24H指数：3
- 相关作者：彭志红司遂海杨建民罗元辉唐波更多>>
- 相关机构：第三军医大学西南医院浙江省人民医院济宁医学院更多>>
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- KAI1基因对肝癌细胞侵袭、转移的影响及其分子机制被引量：5
- 2005年
- 目的研究肿瘤转移抑制基因KAI1对肝癌细胞侵袭、转移的影响及其分子机制,为肝癌的基因治疗提供理论和实验依据。方法用亚克隆技术构建KAI1基因正、反义真核表达质粒,DOTAP脂质体法将其分别转入高转移潜能的人MHCC97-H肝癌细胞,以限制性酶切、PCR、Westernblot及免疫组化鉴定基因重组及转染是否成功。电镜观察细胞超微形态变化,流式细胞仪检测细胞周期分布,细胞生长曲线和平板法集落形成试验观察细胞生长和集落形成能力,BoydenChamber试验观察细胞侵袭能力,微管吸吮技术测定细胞的粘弹性和粘附力。BALBCA4～6周龄雄性裸鼠80只,随机分正义组、反义组、亲本细胞组及空载体组进行皮下(n=40)和原位肝(n=40)种植试验,观察体内的成瘤性、侵袭性及远处转移能力,免疫组化研究癌转移灶AFP和肿瘤组织细胞外基质(ECM)及粘附分子的表达状况。结果(1)成功构建了KAI1正、反义基因真核表达质粒,并将其分别转入MHCC97-H人肝癌细胞;(2)发现转入KAI1基因后可导致肝癌MHCC97-H细胞的一些细胞器数量和形态的变化;(3)KAI1基因对肝癌MHCC97-H细胞的体内外生长、细胞周期及体内成瘤性无明显影响;(4)反义KAI1基因可使MHCC97-H细胞的克隆形成能力增强、对体内外肝癌细胞的侵袭和转移有促进作用;(5)KAI1基因表达上调能使MHCC97-H细胞的体内外侵袭能力降低;(6)KAI1基因抑制肝癌侵袭和转移的机制可能与细胞粘弹性增加、ECM表达上调、粘附分子表达下调及粘附力下降等变化有关。结论KAI1基因在肝癌的侵袭转移过程中发挥着重要作用,上调KAI1基因表达能明显降低肝癌细胞的侵袭和转移能力。
- 杨建民司遂海彭志红叶再元费保莹
- 关键词：肿瘤转移抑制基因肝细胞癌肿瘤转移KAI1基因基因转染
- KAI1基因对肝癌MHCC97-H细胞生长及侵袭能力的影响被引量：4
- 2005年
- KAI1基因是从前列腺癌中克隆的肿瘤转移抑制基因[1].用基因转染技术研究KAI1基因对肝癌细胞生长及侵袭能力的影响.
一、材料与方法
1.pCMV-KAI1质粒全长8.2kb(美国国立卫生研究院Barrett教授和Dong博士惠赠);真核表达质粒载体pCI-neo全长4.7 kb(美国Promega公司产品);转染用脂质体DOTAP为瑞士Roche公司产品;BD BioCoatTM MatrigelTM Invasion Chamber为美国BD公司产品.MHCC97 H是高转移潜能的肝细胞癌细胞株[2],购自上海复旦大学医学院中山医院肝癌研究所.
- 司遂海杨建民彭志红罗元辉周平
- 关键词：KAI1基因肝癌MHCC97-H细胞生长肿瘤基因转染技术
- KAI1基因转染肝癌MHCC97-H细胞及鉴定被引量：2
- 2004年
- 司遂海杨建民彭志红周平罗元辉
- 关键词：肝细胞癌KAI1基因肿瘤转移抑制基因
- KAI1基因对MHCC97-H肝癌细胞生物力学的影响
- 2010年
- 目的探讨KAI1基因对MHCC97-H肝癌细胞生物力学的影响。方法采用微管吸吮技术研究我们前已转染人类KAI1全长正、反义结构基因的人肝癌MHCC97-H细胞粘弹性以及对FN的粘附力等生物力学参数。结果MHCC97-H肝癌细胞的粘弹性系数K1、K2、μ在转染KAI1正义基因后明显增加(P<0.05),在转染KAI1反义基因后明显降低(P<0.01),而转染空载体后则无明显变化(P>0.1)。在FN裱衬表面,各组肝癌细胞的粘附力分别为MHCC97-H-S组685.4±113.6,MHCC97-H-AS组1124.6±123.5,MHCC97-H-pCI组849.0±126.3及MHCC97-H亲本细胞组824.7±134.1(单位为10-10N,细胞数为25)。与亲本细胞组比较,MHCC97-H细胞对FN的粘附力在转染KAI1正义基因后显著下降(P<0.01),转染KAI1反义基因后显著增加(P<0.01),而转染空载体后无明显变化(P>0.1)。结论从细胞生物力学角度,KAI1基因可能增加肝癌细胞的粘弹性及降低细胞对细胞外基质FN的粘附力,从而抑制转移的初始步骤,进而抑制MHCC97-H肝癌细胞的侵袭和转移。
- 彭志红唐波司遂海杨建民陈文生房殿春
- 关键词：肝癌细胞生物力学
- KAI1基因对MHCC97-H肝癌细胞粘附力的影响被引量：16
- 2005年
- 目的探讨KAI1基因对MHCC97-H肝癌细胞粘附力的影响,从而推测KAI1基因影响MHCC97-H肝癌细胞侵袭转移的机制。方法采用微管吸吮技术研究我们前已转染人类KAI1全长正、反义结构基因的人肝癌MHCC97-H细胞粘附力。结果在纤维连接蛋白(fibronectin,FN)裱衬表面,利用微管吸吮系统测得的各组肝癌细胞的粘附力分别为MHCC97-H-S组(678·4±101·8),MHCC97-H-AS组(1083·6±113·8),MHCC97-H-pCI组(853·0±105·4)及MHCC97-H亲本细胞组(834·6±130·5)(单位为10-10N,细胞数为25)。与MHCC97-H亲本细胞组比较,MHCC97-H-S组细胞对FN的粘附力显著下降(P<0·01),MHCC97-H-AS组细胞对FN的粘附力显著增加(P<0·01),而MHCC97-H-pCI组细胞对FN的粘附力无明显变化(P>0·05)。结论KAI1基因可能降低肝癌细胞对细胞外基质FN的粘附力,从而抑制转移的初始步骤,进而抑制MHCC97-H肝癌细胞的侵袭和转移。
- 彭志红唐波杨建民司遂海陈文生房殿春罗元辉
- 关键词：肝癌细胞粘附力KAIL基因MHCC97-H
