甘肃省自然科学基金(1107RJZA219)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 慢性粒细胞白血病ssDNA适配子PCR扩增条件的优化
- 2013年
- 目的优化慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia,CML)ssDNA适配子的PCR扩增条件。方法以合成的核苷酸适配子为模板并设计引物,根据引物解链温度(Tm值)设置不同的退火温度(38.0、39.2、41.2、44.2、48.3、51.5、53.6、55.0℃)、循环次数(12、16、20、24、28、30、35、38、40)及非限制性与限制性引物比例(1∶1、30∶1、50∶1、70∶1、80∶1、100∶1),进行PCR扩增,优化CML ssDNA适配子对称PCR及间接不对称PCR扩增条件,并验证优化的PCR条件的重复性。结果对称PCR扩增的最佳退火温度为44.2℃,最佳循环次数为30次;间接不对称PCR的最佳循环次数为38次,非限制性引物与限制性引物浓度比例为50∶1时,可获得理想的ssDNA和较少的dsDNA;优化的PCR条件重复性较好。结论优化了CML ssDNA适配子的PCR扩增条件,为筛选到特异性的ssDNA适配子提供了参考,也为后续试验奠定了基础。
- 习静郭鹏韩跃武刘文伟张雪燕
- 关键词：慢性粒细胞白血病聚合酶链反应
- 慢性粒细胞白血病ssDNA适配子检测方法的评价
- 2013年
- 目的评价慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)ssDNA适配子检测方法的临床诊断应用价值。方法基于前期构建的方法,用ssDNA适配子与K562细胞及临床CML标本结合进行检测,在优化的检测条件下,以美国临床实验室标准化组织(Clinical and Laboratory Standard Institude,CLSL)的相关标准为依据,对该方法进行方法学评价,并对方法进行临床诊断性能的评价。结果建立的方法回归方程为:y=1 476.4+495.31 x,r2=0.976 6,拟合度较高;该方法敏感性较高,特异性较强,检测高、中、低浓度的K562细胞的批内变异系数均小于5%,日间变异系数均大于5%;该方法测得的不同浓度CML标本的总平均回收率为78.7%;测得的溶血、黄疸及血脂标本的平均干扰率均>10.0%;ROC曲线下面积为0.867,ssDNA适配子检测CML组、非慢粒类型白血病组、健康对照组标本的敏感度为75%,特异度为77%,阳性似然比为3.26,阴性似然比为0.32,漏诊率为25%,可靠度为0.306,可用度为0.52。结论 CML ssDNA适配子检测方法本身灵敏度高,检测阈值低,特异性强;在临床诊断性能研究中,该方法特异性高,但敏感性较低,具有一定的临床诊断价值。但该方法抗干扰能力弱,重复性较差,且可靠度<0.5,其临床应用还有一定的局限性。
- 习静徐攀郭鹏韩跃武陈雪丽张萍王瑞玲袁琳陈丹马驰
- 关键词：慢性粒细胞白血病
- K562细胞ssDNA适配子检测方法对慢性粒细胞白血病诊断价值的研究被引量：2
- 2014年
- 目的评价K562细胞ssDNA适配子检测方法(简称适配子检测法)对慢性粒细胞白血病(CML)的临床诊断价值。方法采集18例CML患者、22例其他白血病患者、20名健康体检者(正常对照组)的血液标本各5 mL,分离粒细胞,用建立的适配子检测法检测荧光强度,绘制受试者工作特征(ROC)曲线。结果 CML组荧光强度为492.26±41.67,与其它白血病组(466.86±33.23)及正常对照组(469.33±37.13)比较,差异无统计学意义(P值分别为0.078、0.243);其它白血病组和正常对照组比较,差异亦无统计学意义(P=0.835)。适配子检测法诊断CML的ROC曲线下面积为0.702,最佳阳性临界值为475.13,灵敏度为83.33%、特异性为54.76%、阳性预测值为44.11%、阴性预测值为88.46%。结论适配子检测法对CML的诊断具有较低的准确性,实际应用还有一定的局限性。
- 查成喜邢福军张雪燕郭鹏习静韩跃武
- 关键词：慢性粒细胞白血病
