青岛市科技发展计划项目(07-2-3-5-jch)
- 作品数：28 被引量：270H指数：11
- 相关作者：李健刘萍高保全王志亮陈萍更多>>
- 相关机构：中国水产科学研究院黄海水产研究所中国海洋大学中国动物卫生与流行病学中心更多>>
- 发文基金：青岛市科技发展计划项目国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- “黄海1号”中国明对虾形态性状对体质量的影响效果分析被引量：65
- 2008年
- 随机选取第11代“黄海1号”5月龄中国明对虾（Fenneropenaeuschinensis）100尾和6月龄中国明对虾50尾，分别测量全长（X）、头胸甲长％）、第1～6腹节长（X3-X8）、尾节长（X9）、头胸甲宽（X10）、第1腹节宽（X11）、头胸甲高（X12）、第1腹节高（X13）、体长（X14）共14个形态学指标。采用相关分析和通径分析的方法，分别计算了这2种月龄对虾以形态性状为自变量对体质量（Y）的相关系数、通径系数和决定系数，进而对各性状的影响大小进行剖分。结果表明，5月龄和6月龄对虾的各形态性状与体质量的相关性均达到极显著（P〈0.01）或显著水平（P〈0.05）。5月龄对虾的体长、头胸甲长、头胸甲宽和第1腹节长的通径系数达到了显著的水平；决定系数分析结果表明，体长、全长和头胸甲长的决定程度最大。6月龄对虾的头胸甲长、头胸甲宽、头胸甲高、第6腹节长和第4腹节长的通径系数达到显著水平，其中第4腹节长对体质量的直接影响是反向的；决定系数分析结果与通径分析的变化趋势一致。经显著性分析，将偏回归系数显著的变量对体质量建立多元回归方程，5月龄和6月龄对虾形态学指标与体质量的回归方程分别为：Y=37．429＋0．326X2＋0．306X3＋0．669X0＋0．275X4和Y=-38．556＋0．668X2-0．583X6＋0．605X8＋0．785X10＋0．931X12两个方程的回归关系均达到了极显著水平（P〈0.01）。
- 安丽刘萍李健何玉英
- 关键词：中国明对虾形态性状通径分析
- 三疣梭子蟹4个野生群体线粒体16S rRNA和COⅠ基因片段的比较分析被引量：18
- 2010年
- 对分别采自辽东湾、莱州湾、海州湾和舟山的三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)4个野生群体的线粒体16SrRNA和COⅠ基因片段进行了扩增和测序,分别得到长度为524 bp和658 bp的片段。2段序列的碱基组成均显示较高的A+T比例(16S rRNA基因70.8%,COⅠ基因63%),这与果蝇、虾类、蟹类等无脊椎动物的16S rRNA和COⅠ基因片段研究结果相似。通过对三疣梭子蟹16S rRNA和COⅠ基因片段遗传特征的研究,发现种内变异较低,在16个样本中,16S rRNA基因序列中共检测到1个变异位点,2种单倍型;COⅠ基因序列中共检测到4个变异位点,5种单倍型。另外,以中华绒螯蟹为外群探讨了梭子蟹科(Portunidea)几个属种的系统进化关系。用MEGA4.0软件中的NJ法构建了系统进化树,基于16S rRNA和COⅠ2种片段的聚类结果均显示梭子蟹属(Portunus)与美青蟹属(Callinectes)亲缘关系最近,先聚在一起,然后再与蟳属(Charybdis)聚在一起,最后才与外群中华绒螯蟹聚在一起,这一结果与传统分类基本一致。
- 戴艳菊刘萍高保全李健王清印
- 关键词：三疣梭子蟹线粒体梭子蟹科系统进化
- “黄海1号”中国对虾不同世代间的AFLP分析被引量：11
- 2008年
- 采用AFLP技术对中国对虾野生群体和第9、10代选育群体的遗传多样性及遗传分化进行分析,计算了3个群体间的遗传多态度、遗传距离及分化系数。结果显示,5对引物共产生了137条带,其中多态性条带有63条,平均每对引物检测到12.6条多态性条带。3个群体的多态位点比例分别为45.99%、40.57%和41.02%;Shannon多样性指数分别为0.1818,0.1807和0.1774;野生群体与选育群体之间的遗传距离及分化都比较大,但选育群体之间的遗传距离和分化都很小分别为0.0031和0.0206。结果表明,选育群体相较于野生群体多态位点比例和遗传多态度均有所下降,随着选育时间的延长,相邻世代群体间遗传距离和分化也均有所下降,出现趋同现象,显示出"黄海1号"新品种具有遗传上的稳定性。
- 安丽刘萍李健何玉英王清印孔晓瑜
- 关键词：中国对虾选育群体AFLP
- 心水病病原体高度保守基因合成与原核表达
- 2012年
- 通过软件DNAStar分析,设计合成心水病病原体抗原性、保守性比较高的一段基因,长度为564bp,将它插入pUC57载体,再转入pET-32a质粒中进行原核表达并纯化表达产物。结果表明,合成的基因在大肠杆菌中得到高效表达并能简易地提纯,纯化的表达产物有望用于心水病免疫学检测;此合成外来基因还可以作为心水病病原PCR检测的阳性对照。这些工作为我国建立心水病防控技术储备奠定了一些基础,也为防控高度危险性外来传染病提供一种安全和可行的研究新思路。
- 邹艳丽赵永刚王志亮李玉清张永强包静月王君玮李金明
- 关键词：心水病基因合成
- 三疣梭子蟹遗传连锁图谱的初步构建被引量：9
- 2010年
- 利用AFLP和SSR标记技术结合"拟测交"策略,以三疣梭子蟹莱州湾、舟山野生群体杂交(1♂×3♀)产生的F2代家系为作图群体,初步构建了三疣梭子蟹雌、雄性遗传连锁图谱。用经过筛选的60对AFLP引物和3对SSR引物对亲本及108个F2代个体进行遗传分析,共得到母本分离标记214个,其中155个标记(AFLP标记153个,SSR标记2个)符合1∶1孟德尔分离规律;父本分离标记195个,139个标记(AFLP标记138个,SSR标记1个)符合1∶1孟德尔分离规律。雌性图谱包括100个遗传标记,分布在9个连锁群,6个三联体,15个连锁对,图谱总长度为1544cM,标记平均间隔22.0cM,总覆盖率为52.9%。雄性图谱包括71个遗传标记,分布在6个连锁群,6个三联体,11个连锁对,图谱总长度1174.2cM,标记平均间隔24.0cM,总覆盖率为49.5%,图谱中遗传标记分布比较均匀。
- 罗云高保全刘萍李健戴芳钰
- 关键词：三疣梭子蟹AFLPSSR遗传连锁图谱
- 日本蟳线粒体16S rRNA和COI基因序列比较分析被引量：3
- 2010年
- 对采自莱州湾和胶州湾的日本蟳野生群体的线粒体16S rRNA和COI基因片段进行了PCR扩增和测序,分别得到长度为519和658 bp的碱基序列。研究结果显示这2个基因片段在种内的变异都较低,对2个基因同源序列分析表明,在线粒体16SrRNA基因片段中共检测到7个变异位点(包括6个单一变异位点,1个简约信息位点)和7种单倍型;在COI基因中共检测到8个变异位点(包括6个单一变异位点,2个简约信息位点)和7种单倍型。通过统计变异位点、平均核苷酸差异数和核苷酸多样性指数,分析比较了两群体间的序列差异和遗传多样性水平,结果显示2个日本蟳野生群体的遗传多样性比较丰富。用MEGA4.0软件构建了NJ和UPMGA系统树,基于16SrRNA基因片段的系统树显示梭子蟹科的4个属聚为两大支:日本蟳不同的单倍型先聚在一起,然后与青蟹属的3种蟹聚为一支;梭子蟹属的三疣梭子蟹、远海梭子蟹及塞氏梭子蟹聚在一起;再与美青蟹属的美洲蓝蟹、巴西蓝蟹等聚为一支。基于COI基因显示日本蟳不同的单倍型先聚在一起,再与其他3种蟳聚为一支;梭子蟹属的远海梭子蟹和三疣梭子蟹相聚,然后与美青蟹属的2种蟹相聚为一支。该结果与传统分类一致。这些数据为我国日本蟳的种质资源保护和利用提供了基础的分子生物学依据。
- 高俊娜刘萍李健潘鲁青高保全陈萍
- 关键词：日本蟳RRNA基因COI基因
- 三疣梭子蟹莱州湾、舟山野生个体定向交配产生F_2代家系的AFLP分析被引量：3
- 2009年
- 以三疣梭子蟹莱州湾、舟山野生群体杂交(莱州湾♀×舟山♂)产生F2代家系63个个体及F1代亲本为实验群体,采用AFLP分子标记对其进行遗传分析。35对选择性引物共扩增出1742个位点,其中分离位点为417个,不分离位点为1325个,多态位点比例为23.9%。在分离位点中,符合1∶1孟德尔分离比例的位点为226个,占总分离位点数的54.2%;偏离1∶1孟德尔分离比例的位点为31个,占总分离位点数7.4%。符合3∶1孟德尔分离比例的位点为128个,占总分离位点数的30.7%;偏离3∶1孟德尔分离比例的位点为32个,占总分离位点数的7.7%。家系内基因多样性指数为0.130,Shannon指数为0.193。遗传距离分析显示,子代个体与母本Nei’s遗传距离介于0.064～0.111之间,与父本Nei’s遗传距离介于0.065～0.107之间。其中,63号个体与48号个体分别与父、母本亲缘关系最远。本实验中,偏分离位点比例属正常范围,杂交F2代家系遗传多样性偏低。本研究结果为三疣梭子蟹野生群体及家系遗传多样性分析,遗传连锁图谱构建等方面提供一定的技术支持。
- 罗云高保全刘萍李健戴芳钰
- 关键词：三疣梭子蟹AFLP分析
- 日本蟳微卫星富集文库的建立与多态性标记的筛选被引量：15
- 2011年
- 采用磁珠富集法筛选日本蟳微卫星分子标记。日本蟳基因组DNA经Sau3 AⅠ酶切后,收集400～1 200 bp大小的片段并纯化,利用生物素标记的寡核苷酸探针(AC)15从中筛选出含有微卫星序列的DNA片段,连接到pMD18-T载体中,构建富集微卫星序列的基因组文库,经PCR检测筛选出阳性克隆进行测序。从随机挑选的970个菌落中筛选出369个阳性克隆进行测序,结果86.99%(321个)含有微卫星序列,其中完美型占80.54%,非完美型占15.95%,混合型占4.28%。除使用的探针AC重复外,还得到GA、CT等重复序列。共设计出102对微卫星引物,其中65对能扩增出清晰条带,27对具有多态性。同时筛选出的微卫星标记可为今后研究日本蟳的分子遗传育种提供有效的遗传标记。
- 宋春妮李健刘萍陈萍高保全
- 关键词：日本蟳微卫星磁珠富集法
- 体外转录法制备西尼罗河热病毒RNA片段
- 2011年
- 目的通过体外转录获得西尼罗河热病毒保守区基因的RNA片段,为核酸快速检测方法的建立和改进提供阳性定量标准品。方法设计西尼罗河热病毒基因保守区克隆引物,PCR从合成的基因DNA获得相应片段,连接至质粒PGEM-T-easy上并筛选阳性重组质粒,测序鉴定后酶切线性化,用T7RNA聚合酶进行体外转录,得到固定长度的RNA片段,DNase酶处理后测定浓度,梯度稀释后用RT-PCR验证。结果获得含西尼罗河热病毒靶基因序列的准确定量拷贝数的RNA片段,质量浓度分别为352.6ng/μL,RT-PCR验证均扩增出相应目的条带。结论获得的RNA片段可作为西尼罗河热病毒核酸快速检测方法的阳性定量标准品。
- 邹艳丽赵永刚张永强包静月孙成友王君玮李金明王志亮
- 关键词：T7启动子体外转录
- 青岛石老人海域石花菜遗传多样性分析被引量：3
- 2010年
- 石花菜（Gelidiumamansii）是1种重要的大型经济海藻,本研究采用AFLP技术对青岛石老人海域石花菜的遗传结构进行了分析,7对引物组合共扩增出346个位点,多态性比例为47.8%。不同个体间的遗传距离分布范围在0.0290.390之间。群体内Na（观测等位基因数）为1.504 3,Ne（有效等位基因数）为1.298 5,Nei＇s基因多样性指数为0.175 5,Shannon信息指数达到0.263 3。UPGMA聚类分析将30个个体分为2个大的类群,在一定程度上反映了石老人海域石花菜群体遗传多样性不高的现状。
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- 关键词：石花菜种质资源
