国家自然科学基金(30571186)
- 作品数：8 被引量：54H指数：5
- 相关作者：郭清泉张学文刘峰陈建荣邓晶更多>>
- 相关机构：湖南农业大学长沙学院中国农业科学院更多>>
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- 苎麻生长素结合蛋白ABP1基因cDNA的克隆及表达被引量：12
- 2008年
- 以苎麻[Boehmeria nivea(Linn.)Gaud.]栽培种湘苎3号为材料,通过简并引物RT-PCR结合RACE技术克隆了苎麻生长素结合蛋白ABP1基因的全长cDNA分子,其序列全长为849bp,编码一段189个氨基酸的推导蛋白质。经基因比对及蛋白质结构分析与已报道的几种植物生长素结合蛋白有高同源性,认为是苎麻生长素结合蛋白基因cDNA,命名为BnABP1。半定量RT-PCR分析结果显示ABP1在苎麻三麻成熟期的茎、叶和芽组织中均有表达,其表达量为芽>叶>茎,相对内标分子18S rRNA的表达量依次为0.755、0.632和0.360。但在根中没有检测到表达,说明该基因更多地表达于细胞生长旺盛的幼嫩组织。
- 黄妤刘峰郭清泉张学文
- 关键词：苎麻生长素结合蛋白CDNA克隆
- 苎麻UDPGDH原核表达载体的构建与表达
- 2008年
- 通过RT-PCR获得UDPGDH cDNA序列,经酶切、连接,以pET-32a为原核表达载体,构建成pET-32a-UDPGDH重组表达载体.经酶切、PCR及DNA测序鉴定后,将阳性质粒转化表达受体菌E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导后表达出1个约53 000的蛋白,与推测的UDPGDH编码产物的大小一致.凝胶成像分析表明,最高表达量可占菌体总蛋白的47.1%,表明UDPGDH重组载体在大肠杆菌中获得了稳定的表达.
- 刘峰曹雅琴张学文李良勇邓晶郭清泉
- 关键词：苎麻
- 苎麻纤维素合成酶基因cDNA的克隆及表达分析被引量：22
- 2008年
- 以苎麻[Boehmeria nivea(Linn.)Gaud.]栽培种湘苎3号为材料,通过简并引物RT-PCR结合RACE技术首次成功克隆苎麻纤维素合成酶基因BnCesA15′端450bp序列以外的全部cDNA序列,序列长3276bp,编码一段938个氨基酸的蛋白质。经基因比对及蛋白质结构分析确证是苎麻纤维素合成酶基因。半定量RT-PCR分析显示:BnCesA1在苎麻根、茎、叶和芽组织中均有表达,其表达量为茎>叶>芽>根,相对表达量依次为0.791、0.381、0.319和0.183。从其表达模式可以推测该基因同时参与了苎麻细胞初生和次生细胞壁纤维素的合成。
- 田志坚易蓉陈建荣郭清泉张学文
- 关键词：苎麻纤维素合成酶CDNA克隆
- 苎麻UDPGDH基因的cDNA克隆及表达分析被引量：7
- 2008年
- 【目的】分离苎麻尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶(UDPGDH)基因。【方法】通过简并引物RT-PCR结合RACE技术和半定量RT-PCR。【结果】成功克隆苎麻Boehmeria nivea(Linn.)Gaud.尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶(UDPGDH)基因cDNA序列,序列长1837bp,编码一480个氨基酸的蛋白质(GenBank No.EF178294)。半定量RT-PCR分析显示,UDPGDH在苎麻根、皮、茎和叶组织中均有表达,其表达量为茎>皮>叶>根,相对表达量依次为0.7075,0.3051,0.2651,0.1490。【结论】苎麻UDPGDH与其它植物相应序列具有较高同源性,在苎麻茎中有较高的表达。
- 刘峰黄妤郭清泉张学文李良勇邓晶谢玲玲
- 关键词：苎麻CDNA克隆
- 苎麻叶片高效再生体系的建立被引量：6
- 2009年
- 以湘苎2号、湘苎3号、新宁青麻、四川洪县园麻的叶片为材料,构建4个品种高效、稳定的不定芽再生体系.湘苎2号、湘苎3号、新宁青麻、四川洪县园麻最适诱导愈伤组织及分化不定芽的培养基分别为MS+0.7 mg/L TDZ+0.02 mg/L 2,4-D,MS+0.3 mg/L TDZ+0.01 mg/L 2,4-D,MS+0.3 mg/L TDZ+0.05 mg/L 2,4-D,MS+0.9 mg/L TDZ+0.05 mg/L 2,4-D;不定芽分化率分别为83.3%,81.7%,90.0%,86.7%;4个品种再分化时出现丛生芽,新宁青麻愈伤组织的平均再生不定芽数达2.62个,其他3个品种也都有数量不等的丛生芽产生,不定芽生根培养基为MS+0.05 mg/L NAA;叶块经过添加6%蔗糖培养基培养2周,再转入含3%蔗糖的培养基中培养,其中经6%蔗糖培养能显著提高湘苎2号、新宁青麻、四川洪县园麻不定芽分化率、平均再生不定芽数.
- 曹雅琴刘峰陈建荣郭清泉
- 关键词：苎麻愈伤组织不定芽
- 苎麻CCoAOMT基因cDNA反义转化模式烟草‘WS38’被引量：1
- 2007年
- 苎麻咖啡酰辅酶A氧甲基转移酶(CCoAOMT)是其木质素合成过程的一种关键酶,运用克隆的该酶基因cDNA及植物表达载体pBI121、pWM101,分别构建了35S启动子控制的苎麻CCoAOMT基因反义cDNA基因质粒(pBI121-antiBnCCoAOMT)和cDNA全长表达质粒(pWM101-BnCCoAOMT),并通过根癌农杆菌介导法将其转化至模式烟草WS38,获得了转基因烟草.对转基因植株进行分子分析和组织学初步研究表明,转反义RNA基因植株叶柄木质素含量较野生烟草或转正义基因烟草叶柄木质素含量降低.说明运用反义RNA技术对CCoAOMT基因的表达进行基因工程调控,一定程度上可以对木质素的合成产生干扰,为获得低木质素或木质素组分改良的苎麻基因工程奠定基础.
- 陈婕邓晶陈建荣徐磊张学文
- 关键词：CCOAOMTCDNA
- 苎麻CCoAOMT基因干扰表达载体构建及对烟草的转化被引量：6
- 2008年
- 根据已克隆的苎麻CCoAOMT(咖啡酰辅酶-A-氧甲基转移酶)基因cDNA序列,以其编码纤维素合成酶底物结合和催化合成结构域的cDNA序列为目标,采用PCR扩增方法引入克隆的酶切位点,分别将其正、反方向克隆到植物RNA干扰表达质粒PFGC5941T-DNA上CHSA内含子两侧,构建了植物表达苎麻CCoAOMT基因的干扰重组Ti载体.将该载体转入根癌农杆菌LBA4404后,采用农杆菌介导法对木质素研究的模式烟草WS38进行了遗传转化,抗性筛选和分子检测表明,成功获得了转基因植株.转基因植株生长延缓,表明可能存在基因表达干扰现象.
- 邓晶刘峰郭清泉陈建荣张学文
- 关键词：苎麻
- 苎麻纤维素合成酶基因cDNA的功能分析被引量：4
- 2009年
- 运用克隆的苎麻纤维素合成酶(BnCesA1)基因cDNA及植物表达载体pWM101,构建了35S启动子控制的苎麻BnCesA1基因核心区段反义融合表达载体(pWM-BnCesA),并通过根癌农杆菌介导法将其转化至模式烟草WS38,获得了转基因烟草.对转基因烟草植株进行的分子检测和初步组织学研究表明,转反义BnCesA1基因核心区段对纤维素的合成产生干扰,植株叶柄切片初生组织细胞较野生烟草松散,其基本组织细胞涨大,间隙也相应增大,证实BnCesA1基因的纤维素合成功能,表明BnCesA1基因在植物初生组织和次生组织的细胞壁合成中都发挥作用.
- 易蓉田志坚黄丽华刘峰郭清泉张学文
- 关键词：苎麻功能分析
