国家自然科学基金(30972187)
- 作品数：19 被引量：38H指数：4
- 相关作者：王川庆陈陆杨霞赵军常洪涛更多>>
- 相关机构：河南农业大学郑州牧业工程高等专科学校阿克苏职业技术学院更多>>
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- 河南及山西省21株鸡杆菌分离株16S rRNA基因序列分析被引量：3
- 2011年
- 对21株分离自河南及山西地区的鸡杆菌的16SrRNA基因序列进行研究,以此分析分离株的进化关系并确定其在鸡杆菌属中所属的具体种。采用PCR方法扩增其16SrRNA基因序列,然后克隆测序。用DNAStar软件对21个菌株的序列及GenBank中已公布的鸡杆菌属相关菌株序列进行同源性比较,结果发现21株分离株之间的核苷酸序列同源性为96.0%～100%,同鸭源鸡杆菌F279(Gallibacterium anatis F279)(AF228002)的同源性为95.3%～99.3%,同输卵管炎鸡杆菌F150(Gallibacterium salpingitidis F150)(EU424000)的同源性为88.3%～91.5%,同虎皮鹦鹉鸡杆菌F450(Gallibacterium melopsittaci F450)(EU339196)的同源性为90.3%～93.3%,同海藻糖发酵鸡杆菌52-S3-90(Gallibacterium trehalosifermentans 52-S3-90)(EU339199)的同源性为88.2%～91.4%,同多杀性巴氏杆菌CCUG 179(P.multocida CCUG 17977)(AF294411)的同源性为85.5%～88.8%,对21株细菌的序列同以上菌株的16SrRNA基因序列进行遗传进化树分析,显示21株细菌同鸭源鸡杆菌F279(AF228002)构成一个单独的大分支。结果表明,所有分离株均属于鸭源鸡杆菌,首次大量报道了来源于河南、山西省不同地区的鸡杆菌的16SrRNA基因序列,为鸡杆菌分类的研究提供了参考。
- 高冬生刘红英杨霞赵军陈陆王新卫常洪涛姚慧霞迪丽拜尔.阿木提王川庆
- 关键词：鸭源鸡杆菌克隆测序同源性比较系统进化分析
- 鸡杆菌河南分离株的分子进化分析被引量：6
- 2011年
- 【目的】确定鸡杆菌河南分离株的具体种属和进化地位。【方法】以9株鸡杆菌河南分离株为研究对象,根据GenBank上登录的相关序列,针对鸡杆菌3个管家基因rpoB、infB和atpD设计引物,并进行PCR扩增、克隆和序列测定分析;将9株鸡杆菌的3个管家基因部分核苷酸序列,与已知的鸡杆菌属和巴氏杆菌科其他属相关参考株的相应基因序列进行比较分析并构建进化树。【结果】扩增出rpoBi、nfB和atpD3个管家基因部分序列,长度分别为566,531和1 441 bp,将测序结果登陆到GenBank。鸡杆菌分离株间的同源性分别为98.3%~100%（rpoB）、90.5%~100%（infB）和98.3%~100%（atpD）;分离株与国外鸭源鸡杆菌分离株间的同源性分别为97.1%~98.5%（rpoB）8、5.2%~93.2%（infB）和98.3%~98.8%（atpD）;分离株与国外鸡杆菌属其他种的同源性分别为84.3%~86.8%（rpoB）,83.1%~86.7%（infB）;鸡杆菌分离株与巴氏杆菌科其他代表属的同源性分别为77.4%~79.3%（rpoB）、78.2%~79.7%（infB）和83.5%~84.1%（atpD）。遗传进化分析显示,9株鸡杆菌河南分离株与鸭源鸡杆菌处于同一大分支之中。【结论】9株鸡杆菌河南分离株均为鸭源鸡杆菌。
- 张金来杨猛陈陆付仁一杨霞赵军王川庆王泽霖
- 关键词：管家基因进化分析进化树
- 雏鸡肠组织β1基因的鉴定及时空表达特性
- 2014年
- 设计1对引物，建立RT—PCR方法对β1基因mRNA进行鉴定；以GAPDH基因为内参，建立检测鸡β1基因表达水平的sYBRGreenI实时荧光定量PCR方法，并用此方法测定1～20日龄雏鸡不同肠段组织81基因表达水平。结果显示，从鸡肠组织成功鉴定出β1基因mRNA；检测内参基因GAPDH和目的基因β1的实时荧光定量PCR方法扩增效率一致（扩增曲线斜率差〈0．1），满足使用比较Ct值法对B1基因mRNA进行相对定量分析的前提；扩增曲线、熔解曲线及凝胶电泳结果提示该方法特异性好。实时荧光定量PCR检测结果表明，1日龄雏鸡十二指肠和盲肠、10日龄雏鸡空肠和直肠、5日龄雏鸡回肠组织中β1基因相对表达量最高。结果表明，鸡肠组织中存在β1基因表达，并在不同日龄不同肠段表达水平存在差异。
- 师润吕文强陈陆杨霞刘红英余秋颖明星王川庆
- 关键词：雏鸡Β1基因实时荧光定量PCR
- SPF蛋鸡人工感染鸡杆菌的病理形态学观察被引量：4
- 2010年
- 采用鸡杆菌自然病例分离纯化的鸡杆菌人工感染开产前(105日龄)和开产后(163日龄)的SPF蛋鸡,运用组织学的方法对鸡杆菌自然病例和试验病例进行比较病理学观察。结果表明,自然病例和试验病例均可引起蛋鸡产蛋高峰推迟,产蛋量下降,且多产畸形蛋;病变主要在呼吸道和生殖道,主要表现为呼吸道和生殖道黏膜层严重充血、水肿、浆液性及炎性渗出等反应。但是试验病例未出现自然病例中常见的腹膜炎和输卵管炎症状。输卵管的病变主要在膨大部和子宫部,这种特征性病变可作为该病病理诊断的重要指征之一。这表明鸡杆菌单因子感染可引起SPF开产蛋鸡生产性能明显降低以及呼吸道和生殖道的病理变化。
- 刘慧敏陈陆杨霞常洪涛郑鹿平王永生高冬生王珊王川庆
- 关键词：病理学输卵管
- 鸡IBDV在微载体微型反应器DF-1细胞系上繁殖特性研究被引量：5
- 2013年
- 对IBDV在微型生物反应器转管DF-1细胞系上繁殖特性进行了较为系统的研究，转管中接种DF-1细胞3×10’个左右，培养6d细胞增至2．4～2．5×10^8个，确定培养6d为最佳接毒时间；病毒的最佳接种剂量为0．78TCID50／细胞（即0．78MOI），最佳收毒时间为接毒后的28h；上清和全悬液毒价呈平行关系，但后者更高，可达10^9.5TClD5.0／mL以上。细胞数增长与糖耗间呈明显平行关系，在细胞生长期内（6d）平均每个细胞耗糖量为6．5×10μg／24h，可根据糖耗量的多少推测细胞生长状态和数量；接毒后糖耗速率的高峰要先于病毒滴度高峰，在糖耗高峰出现后下降至趋于零的瞬间收获，可获得较高毒价的病毒液。在毒价高峰时收获1／2毒液后9h，收获1／3毒液后18h可再次获得最高毒价的毒液，这可能与高密度培养中及时补充新的培养液有关。本试验为IBDVHQ株在生物反应器上大规模培养提供了参考依据。
- 杨霞周欣陈陆王永生赵军王川庆王泽霖
- 关键词：传染性法氏囊病毒
- 鸡鲍氏3型志贺菌脂多糖及O抗原多糖的提纯与鉴定
- 2014年
- 为获得高纯度的鸡鲍氏3型志贺菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)及其亚单位O抗原多糖(O-polysaccharide,OPS),采用改良热酚水法提取鸡鲍氏3型志贺菌的LPS,并联合使用葡聚糖凝胶层析得到高纯度的LPS;采用酸水解法联合葡聚糖凝胶层析获得高纯度的O-PS。生化方法检测结果显示所提纯LPS和O-PS纯度高,兔回肠襻试验结果显示所提纯的LPS活性好。本试验结果表明提取的LPS和O-PS可进行特异性研究及制备有效的候选疫苗。
- 魏亚鹏郭会娟张美玲常洪涛刘红英王川庆王新卫杨霞陈陆赵军
- 关键词：LPS提纯
- 鸡肠上皮原代细胞体外分离培养与鉴定被引量：2
- 2013年
- 为了探讨鸡肠上皮原代细胞分离培养方法,进一步研究人源志贺菌对鸡的致病性和为相关侵袭特性提供体外模型,分别取不同日龄鸡胚,用0.1 g/mLⅠ型中性蛋白酶和300 U/mLⅪ型胶原酶联合分离纯化鸡肠上皮原代细胞,筛选其最佳培养方法,并对培养细胞进行鉴定;然后采用0.125%胰酶和0.01%EDTA联合消化进行鸡肠上皮原代细胞传代。结果显示,应用Ⅰ型中性蛋白酶和Ⅺ型胶原酶消化15日龄鸡胚肠组织可获得满意的肠上皮细胞分离效果,细胞贴壁性良好。培养出圆形或多角形单层生长呈"铺路石样"的细胞,培养的细胞在12 h内贴壁,24～48 h明显增殖,72 h后细胞增殖速度减慢,生长状况不良。经透射电镜观察鉴定为肠上皮细胞。且传代后细胞贴壁生长良好。建立的鸡肠上皮原代细胞分离培养方法可获得纯度较高的鸡肠上皮原代细胞,制备的细胞可以连续传代3次。
- 师润杨霞陈陆余秋颖王川庆
- 关键词：体外培养传代
- 与鸡传染性支气管炎病毒混合感染状况下鸭源鸡杆菌在鸡体内的分布被引量：2
- 2012年
- 为研究鸭源鸡杆菌(Gallibacterium anatis)在鸡体内的动态分布及鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)对其的影响,将鸭源鸡杆菌和鸡传染性支气管炎病毒分别或同时人工接种SPF蛋鸡,分别于接种后12、24、48、72、96h对鸡进行剖检,无菌采集鸡的10种组织样品(上腭裂、气管、肺脏、心脏、脾脏、卵巢、肾脏、肝脏、十二指肠和输卵管),利用SYBR Green I定量PCR(Quantitative PCR,qPCR)方法检测鸭源鸡杆菌组、混合感染组在不同时间点、不同器官中的鸭源鸡杆菌DNA含量。结果显示:鸭源鸡杆菌单独感染时,12h时即可侵袭到气管、心脏、脾脏、卵巢和肾脏,24h时便可感染肝脏、十二指肠和输卵管,48h时可传播到肺脏,72h时感染上腭裂。混合感染组结果表明,鸭源鸡杆菌12h到达卵巢,24h时即可出现在所有器官。混合感染组各器官的总体qPCR检出率为37.1%,显著高于鸭源鸡杆菌组的25.3%。鸭源鸡杆菌组和混合感染组qPCR检测结果均显示,鸭源鸡杆菌DNA在气管中的检出率最高,在卵巢中达到最高含量。鸭源鸡杆菌能够造成试验鸡的全身感染,该菌主要对鸡的呼吸系统和生殖系统有致病性,气管和卵巢是其主要的致病器官;2种病原同时接种加重了全身感染,IBV促进了鸭源鸡杆菌在鸡体内的传播,尤其促进了其在十二指肠中的增殖,增强了鸭源鸡杆菌对消化系统的致病性,导致鸡腹泻的发生。
- 皇甫和平赵军杨霞李乔晶王川庆陈陆常洪涛王新卫刘红英姚慧霞
- 关键词：鸭源鸡杆菌传染性支气管炎病毒定量PCR
- 猪链球菌血清2型环介导等温扩增快速检测方法的建立被引量：4
- 2012年
- 为了建立快速、灵敏的猪链球菌血清2型(SS2)LAMP检测方法,根据GenBank登录的SS2特异的荚膜多糖(cps2 H)基因序列作为检测靶标,在其序列的保守区域设计LAMP引物,利用参考菌株S735基因组DNA为模板进行扩增,优化了LAMP的反应条件和反应体系,并进行了敏感性、特异性和重复性试验。结果,利用建立的LAMP方法对SS2进行扩增,扩增产物显色呈现阳性反应,电泳出现阶梯状条带,最低检测量为0.186fg/μL模板DNA,比常规PCR高1 000倍;且与其他常见的细菌无交叉反应。结果表明,建立的LAMP方法具有灵敏、特异、快速和重复性强等优点,适用于猪链球菌病的实验室快速检测。
- 张九州李欢杨霞赵军陈陆常洪涛程海卫郑逢梅王川庆迪丽拜尔.阿木提
- 关键词：环介导等温扩增技术
- 人源福氏志贺菌对鸡肠上皮原代细胞侵袭特性研究被引量：3
- 2013年
- 为研究人源福氏志贺菌对鸡肠上皮原代细胞侵袭力和侵袭特性,进一步验证人源志贺菌对鸡的致病性并建立体外研究模型,采用Hela细胞庆大霉素保护试验和免疫组织化学染色检测分离的人源福氏志贺菌ZD02株的毒力。然后采用细胞免疫组织化学染色研究ZD02株对鸡肠上皮细胞的侵袭力和相关侵袭特性。人源福氏志贺菌ZD02株能够侵入Hela细胞,庆大霉素保护试验结果显示,感染后30、60、90、120min时ZD02株侵袭率分别为1.43%、2.43%、2.56%、2.62%,证明ZD02株具有毒力。ZD02株侵袭鸡肠上皮原代细胞免疫组织化学检测结果显示,ZD02株能侵入鸡肠上皮细胞,感染后1、2、3、4h时ZD02株侵袭率分别为1.7%、6.2%、8.0%、11.2%。鸡肠上皮原代细胞经EGTA处理后,ZD02株侵袭率显著提高。人源福氏志贺菌ZD02株对鸡肠上皮细胞具有侵袭力,且从肠上皮细胞基底侧部侵袭。本研究进一步验证了志贺菌人禽互传的可能性,鸡肠上皮原代细胞可作为研究志贺菌致病机理的体外模型。
- 师润刘红英陈陆杨霞吕文强余秋颖赵军王川庆
