浙江省自然科学基金(Y405083) 作品数:5 被引量:28 H指数:4 相关作者: 黄光荣 蒋家新 戴德慧 应铁进 王龙军 更多>> 相关机构: 中国计量学院 浙江科技学院 浙江大学 更多>> 发文基金: 浙江省自然科学基金 更多>> 相关领域: 轻工技术与工程 生物学 化学工程 更多>>
嗜热芽孢杆菌高温蛋白酶HS08活性中心研究 被引量:9 2007年 运用化学修饰方法对一株嗜热芽孢杆菌所产生的耐高温蛋白酶HS08活性中心的结构进行了研究。结果表明,蛋白酶HS08的活性被酶活性中心丝氨酸残基专一性抑制剂PMSF以及金属离子螯合剂EDTA强烈抑制,色氨酸和精氨酸对酶活性有重要作用,但并不位于酶的活性中心。Zn2+可使该酶活性明显提高,Cu2+对该酶活性有抑制作用。因此,该酶属于金属离子激活的丝氨酸族蛋白酶。 黄光荣 戴德慧 活泼 王龙军 蒋家新关键词:高温蛋白酶 活性中心 丝氨酸蛋白酶 嗜热芽孢杆菌高温蛋白酶HS08的化学修饰研究 被引量:1 2006年 分离纯化了嗜热芽孢杆菌产生的耐高温蛋白酶HS08,以SDS-PAGE凝胶电泳和Superdax75预装柱凝胶过滤,测定蛋白酶HS08的分子质量为30.6ku,同时研究了酶专一性抑制剂对酶活性的影响。结果表明,蛋白酶HS08的活性被酶活性中心丝氨酸残基专一性抑制剂PMSF以及金属离子螯合剂EDTA强烈抑制,而NBS、WRK、TNBS、Phenylgloxalhydrate等修饰剂对酶活性无明显抑制作用。K+、Na+、Ca2+、Mg2+、Zn2+等金属离子对酶活性影响实验结果表明,Zn2+可使该酶活性明显提高,Cu2+对该酶活性有抑制作用。因此,该酶属于金属离子激活的丝氨酸族蛋白酶。蛋白酶HS08的酶动力学实验表明,以BSA为底物,PMSF可使蛋白酶HS08最大反应速率Vmax下降50%,而对其米氏常数Km影响不大。 黄光荣 应铁进 戴德慧 活泼 蒋家新关键词:高温蛋白酶 嗜热芽孢杆菌 化学修饰 活性中心 丝氨酸蛋白酶 嗜热芽孢杆菌产耐热蛋白酶稳定性的研究 被引量:5 2009年 实验室成功地分离保存了一株产蛋白酶的耐热芽孢杆菌.该菌所产的蛋白酶最适pH 7.5,在pH4.0-9.0时较稳定.最适温度为70℃,80℃以下时热稳定性较好,在稳定的pH或温度下能保持1 h以上活性不变.通过添加Ca^2+,Li^+,Co^2+,Mg^2+等12种金属离子证实该酶为金属激活蛋白酶,其中Li+提高该酶活性最显著.氧化剂过氧化氢可以提高该酶的活力,表面活性剂如Tween 80和Triton X-100对酶活力影响不大.该蛋白酶对各种常用的商品洗涤剂耐受能力较强,在洗涤工业中具有较好的应用前景. 胡毅恒 何华锋 黄光荣 蒋家新关键词:嗜热芽孢杆菌 稳定性 嗜热芽孢杆菌蛋白酶HS08的分离纯化研究 被引量:10 2007年 从高温土壤中分离得到的一株产耐热中性蛋白酶的嗜热芽孢杆菌,该菌分泌的胞外蛋白酶粗酶液经80%饱和度硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Superdax75凝胶层析分离纯化后,纯化倍数提高4.36倍,得率为5.3%,经SDS-PAGE电泳测得其分子量为30.6kDa。酶的最适温度与pH实验表明,该酶最适温度为65℃、最适pH为7.5,并且该酶在50℃时表现出1h以上的稳定性。该蛋白酶的活性受到丝氨酸族蛋白酶专一性抑制PMSF和金属离子螯合剂EDTA强烈抑制,Zn^(2+)能提高酶活性,因此该蛋白酶为Zn^(2+)激活的丝氨酸族蛋白酶。 黄光荣 应铁进 戴德慧 活泼 蒋家新关键词:中性蛋白酶 纯化 嗜热芽孢杆菌 反胶团萃取嗜热芽孢杆菌HS08发酵液中胞外蛋白酶研究 被引量:4 2007年 讨论了影响AOT/异辛烷反胶团体系萃取嗜热芽孢杆菌HS08发酵液中耐高温中性蛋白酶的因素.实验结果表明,AOT/异辛烷反胶团在很短的时间内能达到萃取平衡,100 mmol.L-1NaCl的离子强度有助于蛋白酶的反胶团萃取.在50 mmol.L-1AOT、pH4.5、100 mmol.L-1NaCl、油水相体积比为1的条件下萃取5 min能达到80%以上的酶活力回收率. 黄光荣 活泼 戴德慧 蒋家新关键词:反胶团 液液萃取