江苏省高技术研究计划项目(BG2002318)
- 作品数：2 被引量：9H指数：2
- 相关作者：廖建民张新元沈子龙孙石静孙雄华更多>>
- 相关机构：中国药科大学更多>>
- 发文基金：江苏省高技术研究计划项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 瑞替普酶(reteplase)在海带中表达的鉴定分析被引量：4
- 2006年
- 为验证本实验室构建的瑞替普酶(reteplase,r-PA)基因是否成功转入海带,本文通过FAPA、PCR、Southern blotting和Western blotting等方法分别从体外纤溶活性、DNA的整合以及目的蛋白的表达等三个方面进行鉴定,并运用固定化金属离子亲和层析对表达的蛋白进行了初步分离纯化。FAPA结果表明转基因海带蛋白具有溶栓活性,PCR和Southern Blotting显示在1 100 bp处有特异性条带,Western blotting在39 ku处有蛋白条带,证明r-PA基因已成功转入海带而且获得稳定表达,海带中表达的r-PA不需复性就具有溶栓活性,同时说明在r-PA N端设计的(His)6有助于我们利用亲和层析分离纯化目的蛋白。
- 孙雄华廖建民孙石静张新元徐寒梅沈子龙
- 关键词：海带瑞替普酶
- 瑞替普酶融合蛋白在大肠杆菌中表达条件的优化及其复性被引量：5
- 2005年
- 目的:为优化瑞替普酶(reteplase,r-PA)在大肠杆菌中的高效融合表达的条件,并提高其复性率。方法:通过改变诱导时间和温度、诱导剂浓度、培养基pH值及氨苄青霉素(Amp)浓度等条件,利用SDS-PAGE分析以上条件的改变对表达产物产量的影响。运用金属螯合层析对融合蛋白进行纯化和复性。结果与结论:LB培养基pH值为6,Amp浓度为100μg/mL,乳糖浓度为5 mmol/L的条件下39℃诱导4 h可获得高效表达的r-PA融合蛋白,其表达量占全菌蛋白的70%,其产物主要以包涵体形式存在。融合蛋白运用金属螯合层析一步纯化复性,其复性率可达10%,比活为55.7 U/μL。
- 孙石静张新元孙雄华廖建民沈子龙
- 关键词：瑞替普酶融合蛋白复性
