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人钙调素基因表达研究及应用: 2003年; 主要获得以下成果: 1.用基因重组技术在大肠杆菌DH5α中高效表达并纯化重组人钙调素(rhCaM)蛋白.; 李晓军武建国; 关键词：钙调素基因表达基因重组技术纯化细胞增殖

重组人钙调素对精子活动功能的影响被引量：1: 1999年; 目的：探讨重组人钙调素（ｒｈＣａＭ）对精子活动功能的影响。　方法：用基因工程手段制备并纯化ｒｈＣａＭ。取不育男性精液标本，精子经Ｅａｒｌｅｓ液处理后，校正精子密度为（５～５０）×１０９／Ｌ，一式３份，加入不同浓度的ｒｈＣａＭ，观察不同浓度ｒｈＣａＭ、不同孵育时间对精子运动功能的影响。　结果：２５例活动能力差的精子经孵育１ｈ，活率未见显著变化（Ｐ＞０．０５），前向运动速度则显著改变（Ｐ＜０．０１），另８例活动能力良好的精子，孵育１ｈ前向运动速度、活率均无显著性改变（Ｐ＞０．０５）。９例活动能力差的精子经孵育１ｈ、２ｈ后，活率无显著变化（Ｐ＞０．０５），而前向运动速度、摆幅、鞭打频率改变显著。　结论：外源ｒｈＣａＭ对精子的活动功能有显著的促进作用，ｒｈＣａＭ在此过程中可能参与了精子获能前的准备工作。; 吴国荣李晓军徐建平; 关键词：活率精子

钙调素的分子识别研究进展被引量：10: 2003年; 钙调素 (CaM ) ,作为细胞内Ca2 + 信号传导途径中的主要信号转导分子 ,普遍存在于真核细胞中 ,介导调控由Ca2 + 引起的一系列生理生化反应 ,参与并调节细胞的增生、分化、运动等基本代谢过程。对CaM的结构及分子识别机制的研究 ,有助于更好地理解细胞信号传导、蛋白质相互作用的分子机制 ,对新药开发和临床治疗具有重要的指导意义。本文作者就近几年来有关CaM结构及分子识别机制的研究现状作一概述。; 赵慧斌李晓军武建国; 关键词：钙调素分子识别钙调素结合蛋白基序

抗钙调素抗体对细胞增殖抑制作用的研究被引量：4: 2000年; 为探讨兔抗钙调素抗体 (RACaM)对细胞增殖作用的影响 ,将K5 6 2细胞接种于 96孔培养板 ,加入不同浓度兔抗钙调素抗体 (RACaM)、正常兔γ球蛋白 (NR γ)或重组人钙调素 (recombinanthumancalmodulin ,rhCaM)培养 48h后 ,用MTT比色法检测细胞增殖状况。结果表明 ,兔抗CaM抗体可抑制细胞增殖 ,NR γ则无此抑制效应 ,rhCaM可改善兔抗CaM抗体对细胞增殖的抑制作用。; 司峻岭李晓军武建国; 关键词：钙调素细胞增殖自身免疫性疾病

重组人钙调素对细胞增殖作用的研究被引量：2: 2000年; 目的 :探讨外源性重组人钙调素 (recom binant human calmodulin,rh Ca M)对细胞的增殖作用。　方法 :将SP2 /0细胞接种于 2 4孔或 96孔培养板 ,加入不同浓度 rh Ca M、Ca M拮抗剂三氟拉嗪 (TFP)或兔抗 Ca Mγ球蛋白(RACa M)培养 48h后 ,用显微计数法和 MTT比色法检测细胞增殖状况。　结果 :外源性 rh Ca M在一定浓度范围内 (0 .1～ 7.5 μg/ml)与细胞增殖率呈显著正相关 ;Ca M拮抗剂 TFP或兔抗 Ca Mγ球蛋白可抑制细胞增殖。将rh Ca M加入已受 TFP或 RACa M抑制的细胞 ,可恢复正常的细胞增殖功能。　结论 :外源性重组人钙调素可促进细胞增殖。; 司峻岭李晓军武建国; 关键词：钙调素细胞增殖 TFP

重组人钙调素对人脐静脉内皮细胞增殖作用的影响被引量：1: 2002年; 本文探讨外源性重组人钙调素(recombinant human calmodulin,rhCaM)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖作用的影响。采用基因重组技术在大肠杆菌DH5α中高效表达并纯化rhCaM。将HUVEC接种于96孔培养板,加入不同浓度rhCaM,用MTT比色法检测rhCaM对HUEVC细胞增殖作用的影响。结果表明rhCaM在0.04～0.4μg/ml浓度范围内可促进HUEVC的增殖,促增殖作用随细胞培养密度的增加而减弱,也与培养基中新生小牛血清的含量密切相关。故rhCaM对HUEVC增殖具有促进作用。; 朱红李晓军武建国; 关键词：基因重组细胞增殖人脐静脉内皮细胞

人钙调素在大肠杆菌中的表达、纯化及其活性研究被引量：10: 1999年; 利用基因重组技术,将经PCR扩增获得的人钙调素基因(hCaMcDNA)插入质粒pBV220,构建重组表达载体hCaM/pBV220,用酶切、DNA测序、PCR扩增鉴定阳性克隆.阳性重组子在大肠杆菌DH5α中经温度诱导可高效表达CaM蛋白,经15%SDS-PAGE分析,可观察到一与CaM分子量相符(约17kD)的诱导表达条带,其表达量占菌体蛋白总量20%,并主要以可溶性形式表达.Westernblot结果证实,17kD的表达条带可与标准鼠抗人CaM单克隆抗体起特异反应.用Pheny1-SepharoseCL-4B疏水亲和层析法纯化重组菌超声上清表达产物,每1L菌液可获CaM纯品3～4mg.重组人CaM(rhCaM)与牛脑CaM的氨基酸组成基本一致.生物活性测定结果提示,rhCaM具有激活NAD激酶的活性,其激活程度与标准人脑CaM几乎一致.; 李晓军武建国郭大文徐建平孙海虹; 关键词：钙调素基因表达纯化生物学活性大肠杆菌

淋巴细胞与K562细胞内钙调素mRNA表达的研究被引量：3: 2001年; 目的　探索钙调素与细胞增殖及肿瘤发生发展的关系。方法　从全血分离的淋巴细胞以 5× 10 5/ml接种于含10 %小牛血清的RPMI16 40中 ,加入PHA 2 0mg/L使其活化 ,以不加PHA者为对照 ;K5 6 2细胞以 2× 10 5/ml接种 ,加入CaM拮抗剂TFP 2 0 μmol/L ,以不加TFP组为对照。上述细胞于 37℃、5 %CO2 培养箱中培养 ,离心收集细胞 ,提取总RNA ,以管家基因 β 肌动蛋白 (β actin)为内参照 ,用RT PCR方法检测细胞内CaMmRNA的表达水平。结果　PHA活化的淋巴细胞和K5 6 2细胞CaMmRNA的表达水平分别为1 184± 0 0 2 3和 2 740± 0 132 ,均显著高于静息淋巴细胞(0 5 75± 0 15 3) (P <0 0 1) ,与TFP共育不影响K5 6 2细胞CaMmRNA的表达水平。结论　胞内CaM与细胞增殖有关。; 司峻岭李晓军武建国; 关键词：钙调蛋白 MRNA 细胞分裂淋巴细胞肿瘤细胞

重组人钙调素对白芷细胞增殖及结核杆菌生长的影响被引量：1: 2000年; 目的 :探讨重组人钙调素 ( rh Ca M)对白芷悬浮细胞及结核杆菌增殖作用的影响。　方法 :用基因重组技术获得人钙调素基因 ( h Ca M c DNA)重组表达质粒 h Ca M / p BV2 2 0 ,将其转化大肠杆菌 DH5α。用 Phenyl-Sepharose CL -4 B疏水亲和层析法纯化重组菌超声上清表达产物。将纯化 rh Ca M加入悬浮培养的白芷细胞及结核杆菌培养基中 ,观察 rh Ca M对其增殖作用的影响。　结果 :含 h Ca M / p BV2 2 0的重组菌经温度诱导可高效表达Ca M蛋白 ,经 15 % SDS-PAGE分析 ,可观察到一相对分子质量为 170 0 0的表达条带 ,Western blot结果证实 ,此表达条带可与标准鼠抗 Ca M Mc Ab起特异反应。每 1L菌液经 Phenyl-Sepharose CL -4 B疏水亲和层析法纯化可获Ca M纯品 3～ 4mg。rh Ca M对白芷细胞增殖作用影响的研究结果表明 ,rh Ca M在低细胞密度培养条件下对白芷细胞有促进增殖作用 ,效果高于标准植物 Ca M。本研究同时还发现一定浓度的纯化 rh Ca M( 1、10μg/ ml)可促进牛型结核杆菌的生长。　结论 :rh Ca; 李晓军武建国孙大业邵海枫; 关键词：钙调素基因表达白芷细胞增殖结核杆菌

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江苏省自然科学基金(BK95141307)