国家高技术研究发展计划(2012AA020601)
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
- 相关作者：潘登科刘忠华卢晟盛李妍黄天晴更多>>
- 相关机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所广西大学东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 猪VHL基因克隆及敲低克隆胚胎的构建被引量：1
- 2013年
- 通过在细胞和胚胎水平对猪Von Hippel-Lindau(VHL)基因进行了基因敲低研究,以便为建立VHL疾病模型猪奠定基础。研究首先通过3 RACE和5 RACE克隆得到猪VHL基因cDNA全长序列(2 725 bp),Real-time PCR结果表明VHL基因广泛表达于猪的各种组织器官,其中在肾上腺、肝脏、胰腺、心脏和睾丸等组织器官高量表达。进一步在猪iPS细胞中对5条干扰片段进行筛选,获得2条高效的干扰片段,干扰效率分别达到72%(P=0.0012)和64%(P<0.01)。以稳定干扰VHL基因的猪胎儿成纤维细胞为核供体,构建克隆胚胎,结果表明,克隆胚胎的发育能力与对照组相比没有明显差异,而且在克隆囊胚中VHL基因的干扰效率达到71%(P<0.01)。综上所述,文中获得了猪VHL基因全长序列并获得该基因稳定敲低的猪细胞和胚胎,从而为VHL疾病模型猪的构建奠定了良好的基础。
- 金红红王健宇王芳马婧牟彦双刘忠华
- 关键词：VHL基因RNA干扰
- 胰岛素受体底物1和2敲低对猪肝脏细胞糖脂代谢的影响被引量：3
- 2014年
- 目的:通过shRNA干扰高效敲低猪肝脏细胞中IRS1和IRS2基因的表达,进而验证其对于糖脂代谢相关基因表达的影响,为构建2型糖尿病模型猪奠定基础。方法:首先通过重叠PCR方法克隆了猪IRS1基因全部的mRNA序列(4 814bp)以及通过3'RACE方法克隆了猪IRS2基因的部分3'非编码区(3-untranslated region,3'UTR)。然后,通过Real-time PCR筛选获得了能显著敲低这两个基因的shRNA片段,并在同时敲低IRS1和IRS2的猪肝脏细胞中,检测糖脂代谢相关基因的表达。结果:猪肝脏细胞中IRS1和IRS2的表达被显著敲低,分别下降了78%和64%。另外,糖异生作用酶磷酸烯醇丙酮酸激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)和果糖-1,6-二磷酸酶(fructose-1,6-bisphosphatase,F-1,6-BP)基因表达显著上升,并导致催化肝脏中糖酵解反应的葡糖激酶(glucokinase,Gck)基因表达的显著下降。同时,胆固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element-binding proteins,SREBP-1)基因的表达也显著上升以及胆固醇调节基因Abcg8,CYP7a1表达明显上调。结论:猪肝脏细胞中IRS1和IRS2基因的敲低可激活糖异生作用,并抑制糖酵解反应,从而导致糖代谢的异常,同时也能引起脂类代谢的异常。
- 黄天晴孔庆然李妍于淼刘忠华
- 关键词：RNA干扰糖脂代谢
- 体细胞核移植后表观遗传重编程的异常及其修复被引量：5
- 2014年
- 体细胞核移植(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)是指将高度分化的体细胞移入到去核的卵母细胞中发育并最终产生后代的技术。然而,体细胞克隆的总体效率仍然处于一个较低的水平,主要原因之一是由于体细胞供体核不完全的表观遗传重编程,包括DNA甲基化、组蛋白乙酰化、基因组印记、X染色体失活和端粒长度等修饰出现的异常。使用一些小分子化合物以及Xist基因的敲除或敲低等方法能修复表观遗传修饰错误,辅助供体核的重编程,从而提高体细胞克隆效率,使其更好地应用于基础研究和生产实践。文章对体细胞核移植后胚胎发育过程中出现的异常表观遗传修饰进行了综述,并着重论述了近年来有关修复表观遗传错误的研究进展。
- 纪慧丽卢晟盛潘登科
- 关键词：体细胞核移植重编程小分子化合物
- 绿色荧光蛋白在α-1,3半乳糖基转移酶敲除猪组织器官的表达分析被引量：1
- 2015年
- 猪是人类异种器官移植的理想供体,然而猪-人的异种器官移植会产生剧烈的排斥反应。虽然已制备的α-1,3半乳糖基转移酶基因敲除(Galactosyltransferase gene knockout,GTKO)猪可有效缓解猪-人异种器官移植引起的超急性免疫排斥,但缺少报告基因直观示踪移植后的细胞迁移及器官排斥状态。本文将CAG启动子驱动增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的表达载体导入GTKO猪耳成纤维细胞,通过体细胞核移植技术制备了EGFP猪。利用双荧光蛋白观测镜、荧光显微镜及定量PCR扩增观察、检测和分析克隆猪各组织器官中EGFP蛋白和转录本的表达状况。结果显示,EGFP蛋白及转录本在克隆猪各组织器官中均有表达,但在肝脏和中枢神经系统中表达较弱。本文成功获得了各组织器官表达EGFP的GTKO猪,为EGFP示踪异种细胞组织移植奠定了基础。
- 李智方冯冲纪慧丽石宁宁宋小凤赵勤丽龙川潘登科杨小淦
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白异种移植
