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教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-06-0641): 作品数：18 被引量：38H指数：4; 相关作者：童强松郑丽端蔡嘉斌蒋国松刘媛更多>>; 相关机构：华中科技大学华中科技大学同济医学院附属协和医院武汉市妇女儿童医疗保健中心更多>>; 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

茉莉酸甲酯诱导人神经母细胞瘤细胞株BE(2)-C凋亡作用机制被引量：2: 2008年; 探讨茉莉酸甲酯对人神经母细胞瘤细胞株BE（2）-C的生长抑制作用及其对凋亡抑制蛋白家族成员XIAP和survivin表达的影响。1-2 mmol·L^-1茉莉酸甲酯处理BE（2）-C细胞6-24 h后，MTT法检测瘤细胞生长活性，克隆形成实验检测细胞增殖能力，PI单染流式细胞术检测细胞周期，AO/EB荧光染色法、Hoechst 33258荧光染色法、Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡，半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（real-time RT-PCR）检测细胞周期素D1（cyclin D1）、X连锁凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor ofapoptosis protein，XIAP）及survivin表达。结果表明，各浓度茉莉酸甲酯作用后，BE（2）-C细胞呈时间、浓度依赖性生长抑制，1，1.5和2 mmol·L^-1茉莉酸甲酯作用24 h后，细胞生长抑制率为20.6%-85.5%（P〈0.01），IC50为1.35 mmol·L^-1；S期细胞比率增高，部分瘤细胞发生典型的凋亡形态学改变，早期凋亡细胞（FITC^＋PI^-）分别占13.51%、17.32%和24.59%（均P〈0.01），细胞死亡率分别为29.36%、54.73%和75.52%（均P〈0.01）；XIAP和survivin表达分别下调18.5%-68.9%和22.4%-48.7%（均P〈0.05），而cyclin D1表达无显著变化（P〉0.05）。可见，茉莉酸甲酯能通过诱导细胞周期阻滞和凋亡抑制人神经母细胞瘤细胞株BE（2）-C的生长活性，下调XIAP和survivin基因表达可能是其作用机制之一。; 蒋国松童强松曾甫清胡波郑丽端蔡嘉斌刘媛; 关键词：茉莉酸甲酯神经母细胞瘤细胞周期阻滞凋亡 X连锁凋亡抑制蛋白 SURVIVIN

人pre-miR-145真核表达载体的构建及其对胃癌细胞游走、侵袭活性的影响被引量：3: 2011年; 目的构建人微小RNAl45（miR-145）前体的真核表达载体，探讨其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法根据人pre-miR-145序列，合成两条互补的寡核苷酸链，退火后连接人pPG-miR-EGFP载体，转化扩增后进行测序鉴定；重组质粒在阳离子脂质体Lipofectamine2000的介导下，瞬时转染人胃癌细胞株SGC-7901，实时定量聚合酶链反应（PCR）检测细胞中miR．145表达水平，黏附实验和Transwell小室实验检测癌细胞游走、侵袭能力。结果所构建的pPG—miRl45-EGFP载体中插入基因片段与设计序列完全匹配；重组质粒转染SGC．7901细胞后，miR-145表达分别上调20．45倍（P〈0．01），细胞黏附能力分别下降51．5％（P〈0．01），细胞侵袭能力分别下降30．4％（P〈0．01）。结论成功构建人pre—miR-145真核表达载体，转染胃癌细胞过表达后，能抑制癌细胞的游走和侵袭能力。; 张桓瑜梁铸林郑丽端童强松董继华; 关键词：胃癌

RELMs家族及其生物学功能研究进展被引量：2: 2008年; The resistin-like molecules(RELMs)are a novel protein family with tissue-specific distribution.Recent evidences suggest their important roles in type II diabetes mellitus,inflammation,immunological reactions and cell proliferation,which provoked many interests for the researchers.This overview summarizes the structure,tissue distribution,biological functions,regulatory pathways,and their relationship with diseases of these family members.; 蔡嘉斌郑丽端童强松; 关键词：抵抗素生物学功能基因表达调控

靶向人肝素酶短发卡状RNA表达载体的构建及其沉默作用: 2010年; 目的构建靶向人肝素酶（HPSE）的短发卡状RNA（shRNA）表达载体，探讨其基因沉默作用。方法根据人肝素酶mRNA序列设计shRNA，合成两条互补的寡核苷酸链，退火后连接人pGenesil-1载体，转化扩增后进行测序鉴定；重组质粒在阳离子脂质体Lipofectamine2000的介导下，瞬时转染人胃癌细胞株SGC-7901、人前列腺癌细胞株PC-3、人膀胱癌细胞株EJ，每种细胞分别设空白对照组、空载体pGenesil-Negative转染组、pGenesil-HPSEshRNA转染组3组，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Westernblot法检测各种细胞中肝素酶基因表达水平，黏附实验和transwell小室实验检测癌细胞游走、侵袭能力。结果所构建的shRNA载体插入基因片段与设计序列完全匹配，载体构建成功；重组质粒转染SGC-7901、PC-3、EJ细胞后，肝素酶mRNA表达分别下调78．6％（P〈0．01）、82．6％（P〈0．01）、81．9％（P〈0．01），肝素酶蛋白表达分别下调76．4％（P〈0．01）、85．9％（P〈0．01）、83．3％（P〈0．01），细胞黏附能力分别下降37．7％（P〈0．01）、44．6％（P〈0．01）、43．8％（P〈0．01），细胞侵袭能力分别下降66．8％（P〈0．01）、76．6％（P〈0．01）、80．5％（P〈0．01）。结论成功构建了靶向人肝素酶的shRNA表达载体，沉默肝素酶基因表达后，能抑制多种癌细胞的游走和侵袭能力。; 蒋国松曾甫清郑丽端童强松董继华侯晓华; 关键词：肝素酶短发卡状RNA 肿瘤基因表达

缺氧诱导丝裂原因子在高氧诱导肺上皮和成纤维细胞凋亡中的作用及意义被引量：1: 2013年; 目的探讨缺氧诱导丝裂原因子（HIMF）在高氧诱导肺上皮和成纤维细胞凋亡中的作用及其意义。方法肺泡Ⅱ型上皮MLE-12细胞和成纤维NIH／3T3细胞分别转染靶向HIMF的小干扰RNA后，置于正常氧（21％O2）、高氧（85％O2）条件下培养3—18h，采用实时定量聚合酶链反应（Real．timePCR）法检测细胞中HIMFmRNA水平，运用吖啶橙-溴化乙锭染色法、Hochest33258染色法及膜联蛋白V（AnnexinV）-碘化丙锭（PI）双染流式细胞术检测细胞凋亡变化。结果与对照组比较，高氧暴露3、6、9、18h后，MLE-12和NIH／3T3细胞中HIMFmRNA水平分别增高2．783—5．023倍（P〈0．05）、2．864～15．162倍（P〈0．05），细胞凋亡率增高1．5～2．3倍（P〈0．05）、1．1～2．1倍（P〈0．05）；沉默HIMF基因后，高氧诱导的MLE．12和NIH／3T3细胞凋亡率分别进一步升高1．5～2．5倍（P〈0．05）、1．3—2．0倍（P〈0．05）。结论HIMF基因可能通过对抗高氧诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞和成纤维细胞凋亡，参与高氧肺损伤的发病机制。; 杨春雷张桓瑜普佳睿郑丽端童强松李爽; 关键词：肺泡上皮细胞成纤维细胞小干扰RNA

TSEG-2基因真核表达载体的构建及其在细胞内的表达被引量：2: 2010年; 目的构建睾丸特异表达基因2（TSEG-2）的真核表达载体，探讨TSEG-2存细胞中的表达及其生物学功能。方法以小鼠睾丸组织cDNA为模版，设计携带HindⅢ和BamHI酶切位点的引物序列，聚合酶链反应（PCR）扩增基因片段，克隆至携带增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的真核表达载体pEGFP—N1；在阳离子聚合物聚乙烯亚胺（PEI）的介导下，重组质粒转染体外培养的精母细胞株GC-2spd48h后，荧光显微镜下观察TSEG-2基因在细胞内的表达定位，噻唑蓝（MTT）比色法测定细胞生长活性，AO／EB荧光染色法、Hoechst33258荧光染色法、AnnexinV—FITC／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡，实时定量PCR测定Fas、bcl-2、bax表达水平。结果成功构建了TSEG-2与EGFP的融合表达载体pEGFP—TSEG2，转染GC-2spd细胞后可见胞质内绿色荧光蛋白表达。转染pEGFP—TSEG248h后，GC-2spd细胞生长抑制39．2％（P〈0．05），出现细胞凋亡形态学改变，凋亡率为28．3％（P〈0．05）；GC-2spd细胞中Fas和bcl-2的表达分别下调17．9％、64．8％（P〈0．05），而bax的表达上调25．1％（P〈0．05）。结论成功构建TSEG-2基因的真核表达载体，能在精母细胞株中表达并促进细胞凋亡。; 胡涛王智宇童强松曾甫清陈晓春顾朝辉郑丽端; 关键词：真核表达载体脱噬作用

茉莉素对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y的生长抑制作用及其机制研究被引量：1: 2008年; 目的探讨茉莉素对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y的生长抑制作用及其机制。方法0．5～2．5mmol·L^-1茉莉酸甲酯、顺式茉莉酮、茉莉酸分别处理SH—SY5Y细胞6～24h后，MTT法检测瘤细胞生长活性；PI单染流式细胞术检测细胞周期；Hoechst33258荧光染色法、AnnexinV-FITC／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡；RT—PCR检测PCNA、eyelinD1、N—myc基因表达。结果各浓度茉莉素作用后，SH-SYSY细胞呈时间、浓度依赖性生长抑制，其中茉莉酸甲酯作用最强；0．5～2．5mmol·L。茉莉酸甲酯作用24h后，细胞生长抑制率为5．75％～88．7％（P〈0．01），IC50为L47mmol·L^-1；2．5mmol·L^-1茉莉酸甲酯、顺式茉莉酮、茉莉酸作用后，G2／M期细胞比率增高，部分瘤细胞发生典型的凋亡形态学改变，细胞凋亡率分别为78．9％（P〈0．01）、37．46％（P〈0．01）、8．32％（P〈0．01）；0．5～2．5mmol·L^-1茉莉酸甲酯作用24h后，PCNA、N-myc基因表达分别下调33．1％～61．8％（P〈0．01）、15．3％～50．6％（P〈0．01），而eyelin D1基因表达无变化（P〉0．05）。结论茉莉素能通过诱导细胞周期阻滞和凋亡抑制人神经母细胞瘤细胞株的生长活性，下调PCNA、N-myc基因表达可能是其作用机制之一。; 蒋国松童强松曾甫清胡波郑丽端蔡嘉斌刘媛顾朝辉王智宇; 关键词：茉莉素神经母细胞瘤细胞周期阻滞凋亡

睾丸特异表达基因-1在小鼠隐睾模型中的表达及其意义被引量：3: 2010年; 目的探讨睾丸特异表达基因-1（TSEG-1）在小鼠隐睾模型中的定位、定量表达变化及其意义.方法将46只雄性昆明新生小鼠随机分为对照组（n=10）、丙二醇（溶剂）注射组（n=15）、17β-雌二醇注射组（n=21）,应用苏术素-伊红（HE）染色观察睾丸组织形态学改变,原位杂交、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和实时定量PCR检测TSEG-1 mRNA的定位和定量变化.结果 17β-雌二醇注射组发生隐睾,而对照组和丙二醇注射组睾丸位置正常.与对照组比较,17β-雌二醇组睾丸组织80%曲精小管管腔消失,Ⅰ～Ⅳ级生精细胞数目减少,60%精母细胞或精子细胞核皱缩,90%精子发生障碍.在对照组睾丸组织中,TSEG-1 mRNA表达水平是模型组25倍,主要定位于精母细胞和早期精子细胞,而隐睾组TSEG-1 mRNA表达水平显著下调.结论 17β-雌二醇诱导小鼠隐睾模型是制作隐睾模型的有效方法 ,新基因TSEG-1可能参与雌激素诱导隐睾模型的发生过程.; 顾朝辉曾甫清童强松; 关键词：17Β-雌二醇隐睾

肺组织特异性基因HIMF的克隆及其真核表达载体的构建被引量：1: 2008年; 目的克隆小鼠肺组织特异性表达基因缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced mitogenic factor,HIMF),并构建其真核表达载体。方法采用Western blot法检测HIMF基因在小鼠不同脏器中的表达;从小鼠肺组织中提取总RNA,采用RT-PCR法扩增全长HIMF cDNA,克隆至T载体后进行核酸序列分析,并将其正向插入到真核表达载体pcDNA3.1/Zeo(+)的限制性内切酶位点EcoRⅠ;重组子在阳离子脂质体Lipofectamine 2000的介导下瞬时转染胚胎纤维母细胞NIH/3T3、肺Ⅱ型上皮细胞MLE-12、血管内皮细胞SVEC4-10,用Western blot及RT-PCR法检测细胞HIMF表达水平。结果HIMF特异性表达于小鼠肺组织,而其他脏器未见表达。成功克隆了小鼠HIMF全长cDNA(336bp),与GenBank报道的序列一致。真核表达载体pcDNA3.1-HIMF转染细胞后,细胞内HIMF mRNA和蛋白水平均显著增高(P<0.01)。结论从小鼠肺组织中克隆出HIMF这一组织特异性基因,为深入研究HIMF的生物学功能及其在肺部疾病靶向性生物治疗中的作用奠定了基础。; 郑丽端童强松蔡嘉斌蒋国松刘媛董继华; 关键词：组织特异性基因表达

人胃癌组织中肝素酶基因启动子甲基化状态与肿瘤侵袭转移的关系被引量：1: 2010年; 目的探讨人胃癌组织中肝素酶（HPA）基因启动子的甲基化状态及其与HPA表达、肿瘤侵袭转移的关系。方法应用免疫组织化学、逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测48例胃癌组织标本及相应癌旁组织中HPA蛋白和mRNA表达；采用亚硫酸氢钠修饰、甲基化PCR（MSP）、甲基化克隆测序（BSP）法检测胃癌组织和癌旁组织中HPA基因启动子区域CpG岛甲基化状态，并探讨与胃癌临床病理特征的关系。结果胃癌组织中HPAmRNA和蛋白的阳性表达率分别为79．20％（38／48）、93．75％（45／48），显著高于癌旁组织（P〈0．05）。MSP、BSP检测发现13例胃癌组织HPA启动子CpG岛呈低甲基化状态，且其甲基化程度与HPA的表达及胃癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移、远处转移明显相关（P〈0．05）。结论HPA基因启动子区域CpG岛甲基化程度与HPA的表达及胃癌的发生、发展有关，在肿瘤侵袭、转移过程中起重要调节作用。; 吕清王国斌童强松郑丽端; 关键词：胃癌肝素酶启动子甲基化

教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-06-0641)

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