嘉兴市科技计划项目(20041023)
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 相关作者：徐水凌漆秋兰严杰毛亚飞蒋晓玲更多>>
- 相关机构：嘉兴学院浙江大学嘉兴市第二医院更多>>
- 发文基金：嘉兴市科技计划项目浙江省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 葡萄球菌肠毒素B基因原核表达系统的构建及其表达产物促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用的研究被引量：1
- 2006年
- 构建葡萄球菌肠毒素B（staphylococcal enterotoxins B，SEB）基因原核表达系统，了解重组表达产物rSEB促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用．采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌FRIS6B株DNA中扩增全长SEB基因片段，T—A克隆后测序，构建SEB基因原核表达系统pET32α-SEB—E．coliBL2IDE3．采用SDS-PAGE检测rSEB表达产量，Ni—NTA亲和层析法提纯rSEB．采用TCID50法测定rSEB对Vero细胞的细胞毒性作用并计算TCID50值．采用MTT比色法分别检测不同浓度rSEB体外对小鼠脾细胞、人外周血单个核细胞（PBMC）的促增殖作用以及对HepG2细胞（人肝腺癌细胞）、HeLa细胞（人宫颈癌上皮细胞）的生长抑制作用．与公布的相关序列比较，所克隆的SEB基因核苷酸序列相似性为100％．rSEB表达量约为细菌总蛋白的40％．rSEB对Vero细胞的TCIC50为3．02μg．5．0～20．0μg／ml的rSEB对小鼠脾细胞和人PBMC均有明显的促增殖作用（P〈0．05）．5．0～20．0μg／ml rSEB作用的人PBMC上清均能有效地抑制HepG2细胞和HeLa细胞生长（P〈0．05）．本研究成功地构建了rSEB高效原核表达系统．rSEB仍然具有生物学活性．所建立的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用的检测方法，为以后减毒rSEB突变体的筛选奠定了基础．
- 毛亚飞徐水凌罗冬娇严杰
- 关键词：葡萄球菌肠毒素B
- 重组葡萄球菌肠毒素A及其突变体蛋白促淋巴细胞增殖作用的研究
- 2010年
- 目的观察重组葡萄球菌肠毒素A(rSEA)及其突变体蛋白对淋巴细胞增殖、活化作用及对淋巴细胞亚群分群的影响。方法分离健康人外周血单个核细胞(PBMC)及小鼠脾淋巴细胞悬液,体外经rSEA及其3种突变体(rSEA/H187A、rSEA/H225A和rSEA/D227A)蛋白刺激后,采用噻唑蓝法(MTT)检测人和小鼠脾淋巴细胞增殖水平,采用流式细胞术检测人外周血中T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+T细胞)及活化CD4+、CD8+T细胞和自然杀伤细胞(NK)的含量。结果 5～20 mg.L-1的rSEA及其3个突变体蛋白对人PBMC和小鼠脾淋巴细胞均有明显促增殖作用(P<0.05);经rSEA、rSEA/H225A刺激后的人PBMC中,CD3+、CD4+、CD8+T细胞的含量明显高于对照组,rSEA/H187A能上调CD3+和CD8+T细胞,而rSEA/D227A只上调CD8+T细胞(P<0.05);rSEA及3种突变体蛋白均能上调活化CD4+和CD8+T细胞,rSEA、rSEA/H187A、rSEA/H225A能上调NK细胞含量(P<0.05)。结论 rSEA及其3种突变体(rSEA/H187A、rSEA/H225A和rSEA/D227A)蛋白对淋巴细胞均有明显促增殖和活化作用,并可不同程度地上调T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+及NK细胞的含量,为筛选出低毒、高效的升白细胞相关药物候选突变体奠定基础。
- 黄越燕徐水凌赵桂珠
- 关键词：葡萄球菌肠毒素A淋巴细胞增殖淋巴细胞亚群
- 重组葡萄球菌肠毒素B突变体蛋白D9N的表达、纯化及生物学活性的研究被引量：2
- 2009年
- 目的表达、纯化重组葡萄球菌肠毒素B突变体蛋白D9N(rSEB-D9N),了解表达产物rSEB-D9N的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和肿瘤生长抑制作用。方法不同浓度IPTG诱导SEB-D9N突变体原核表达系统pET32a-SEB-D9N-E.coliBL21DE3表达rSEB-D9N,经Ni-NTA亲和层析法纯化rSEB-D9N,10%SDS-PAGE和高效液相色谱检测其纯度。以Vero细胞为靶细胞,进行rSEB-D9N的细胞毒性作用,并计算TCID50值。采用MTT法分别检测不同浓度的rSEB-D9N促人淋巴细胞增殖及抑制KB及MCF-7癌细胞株生长的作用。流式细胞术检测rSEB-D9N刺激人淋巴细胞后CD3、CD4、CD8的表达。结果rSEB-D9N表达产量约占细菌总蛋白30%,纯化后获得纯度为90.48%的rSEB-D9N。rSEB和rSEB-D9N对Vero细胞的TCID50值分别为3.12,8.85μg,10.0,20.0mg·L-1的rSEB-D9N具有显著的促PBMC增殖的作用(P<0.05),且主要上调CD3,CD4和CD8的表达。5.0～20.0mg·L-1rSEB-D9N作用的PBMC上清对KB和MCF-7细胞生长均可产生明显抑制作用(P<0.05)。结论获得并纯化了重组葡萄球菌肠毒素B突变体蛋白(rSEB-D9N),其细胞毒性作用有所降低,但促人淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用仍较强,可作为研制升白细胞、抗肿瘤相关药物的候选突变体。
- 徐水凌王兆丰漆秋兰蒋晓玲王云华
- 关键词：葡萄球菌肠毒素B细胞毒性淋巴细胞增殖抑制肿瘤细胞
- 重组葡萄球菌肠毒素B蛋白表达、纯化及生物活性的实验研究
- 2008年
- 目的建立重组葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)表达、纯化方法,了解rSEB细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用。方法采用IPTG(1.0mmol.L-1)诱导SEB原核表达系统pET32a-SEB-E.coliBL21DE3表达rSEB,10%SDS-PAGE检测其产量,Ni-NTA亲和色谱法纯化rSEB。采用Vero细胞测定rSEB的细胞毒性作用,并计算TCIC50值。通过MTT法分别检测不同浓度rSEB体外促淋巴细胞增殖作用,以及对肿瘤细胞株HepG2、HeLa的生长抑制作用。结果所构建的SEB原核表达系统中,rSEB表达量约为细菌总蛋白的40%,主要以包涵体形式存在。纯化的rSEB对Vero细胞的TCIC50为3.02μg。5.0～20.0mg.L-1的rSEB对小鼠脾细胞和人PBMC均有明显的促增殖作用(P<0.05)。5.0～20.0mg.L-1rSEB作用的人PBMC上清均能有效地抑制HepG2细胞和HeLa细胞生长(P<0.05)。结论建立了SEB高效表达、纯化方法,获得rSEB蛋白。所建立的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用的检测方法,为后续进一步分析SEB分子中相关活性位点及其减毒SEB突变体的筛选奠定了基础。
- 徐水凌毛亚飞漆秋兰严杰
- 关键词：葡萄球菌肠毒素B重组蛋白细胞毒性淋巴细胞增殖抑制肿瘤细胞
- 葡萄球菌肠毒素B抗肿瘤作用的实验研究
- 2005年
- 探讨了葡萄球菌肠毒素B(SEB)对动物移植性肿瘤的抑制作用。以小鼠移植性肿瘤肝癌(Heps)、L2网织细胞瘤和肉瘤180(S180)为模型,环磷酰胺为阳性对照组,生理盐水为阴性对照组,观察不同剂量(5、10和20ng·Kg-1·d-1)SEB的抗肿瘤作用。不同剂量的SEB对小鼠肝癌(Heps)有明显抑制作用,抑瘤率分别为44.6%、46.7%和51.8%(P值均<0.05),对小鼠L2网织细胞瘤也有一定的抑制作用,抑瘤率分别为17.4%、44.7%(P<0.05)和44.1%(P<0.05)。SEB对小鼠S180的抑制作用不显著。结论是葡萄球菌肠毒素B(SEB)具有抗肿瘤效应,可作为一种有前途的抗肿瘤制剂进行研究。
- 徐水凌马时荣张梅光
- 关键词：葡萄球菌肠毒素B移植性肿瘤抗瘤作用
