福建省农科院青年科技人才创新基金(2005J074)
- 作品数：8 被引量：6H指数：2
- 相关作者：林山王冰王烈王瑜更多>>
- 相关机构：南京军区福州总医院莆田学院附属医院更多>>
- 发文基金：福建省农科院青年科技人才创新基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3基因对肝癌细胞SK-Hep-1黏附和侵袭的影响被引量：3
- 2008年
- 目的:肝细胞癌中高表达磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3基因(glypican-3,GPC3),而在非肿瘤肝组织、肝细胞腺瘤、胆管癌、肝内胆管细胞癌、胆囊癌等细胞中低表达甚至不表达;本研究利用携带GPC3重组真核表达载体,探讨GPC3基因对SK-Hep-1肝癌细胞增殖、黏附和侵袭能力的影响。方法:将pEGFP-N2-GPC3通过脂质体方法转染人肝癌细胞SK-Hep-1。RT-PCR检测GPC3-SK-Hep-1细胞中GPC3mRNA的表达;MTT法检测SK-Hep-1细胞的增殖并计算黏附率;Transwell小室实验检测SK-Hep-1肝癌细胞的迁移能力和侵袭能力。结果:pEGFP-N2-GPC3成功转染SK-Hep-1细胞,转染后GPC3-Hep-1细胞明显表达GPC3mRNA。GPC3转染能显著抑制肝癌细胞SK-Hep-1的增殖(P<0.01);GPC3转染细胞的黏附能力较对照细胞显著下降[(10.21±0.62)%vs(15.51±0.95)%,P<0.01];GPC3转染细胞的迁徙和侵袭能力较对照细胞明显增强[(131.7±7.44)vs(69.6±5.25),P<0.01;(220±12.8)vs(130±8.2),P<0.01]。结论:GPC3基因显著抑制肝癌细胞的增殖和黏附能力,但显著增强后者的迁移和侵袭能力。
- 王冰林山王烈
- 关键词：磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3增殖
- GPC3基因对肝癌细胞SK-Hep-1体外迁移、侵袭能力的影响被引量：3
- 2008年
- 目的利用构建好的GPC3真核表达载体，观察GPC3基因对SK-Hep-1肝癌细胞增殖、黏附、侵袭能力的影响。方法将pEGFP-N2-GPC3增强型绿色荧光蛋白表达载体通过脂质体方法转入SK-Hep-1人肝癌细胞，确定GPC3已经成功转入细胞后，观察肝癌细胞转染前后增殖、黏附、迁移及侵袭能力的改变。结果GPC3抑制SK-Hep-1的增殖，降低对Matrigel胶的黏附能力，迁移实验中，200倍目镜下实验组细胞的穿膜细胞数为131．70±7．44。空质粒对照组细胞的穿膜细胞数为71．60±4．76。侵袭实验中，200倍目镜下实验组细胞的穿膜细胞数为220．00±12．80。空质粒对照组细胞的穿膜细胞数为138．00±10．50。两组细胞比较，迁移、侵袭能力均显著增强（P〈0．01）。结论GPC3真核表达载体抑制肝癌细胞SK-Hep-1的增殖，降低其对Matrigel胶的黏附能力，增加其迁移及侵袭能力，GPC3可能通过抑制FGF2信号途径抑制肝癌细胞的增殖。
- 王冰林山王烈王瑜
- 关键词：磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3增殖
- 重组质粒pEGFP-N2-GPC3的构建及GPC3对生长因子FGF2、IGF2促进细胞增殖的影响
- 2010年
- 目的:构建GPC3基因真核表达重组质粒,研究GPC3对生长因子FGF2、IGF2促进肝癌细胞增殖的影响。方法:自行设计引物,应用PCR法从GPC3原核扩增重组质粒pDNR-LIB-GPC3中获得编码GPC3的基因片段。应用基因重组技术,将GPC3基因片段克隆到真核表达载体pEGFP-N2中,然后经脂质体介导转染SK-Hep-1,并通过G418(600ug/ml)筛选出抗性克隆,应用荧光显微镜及RT-PCR法对转染细胞内pEGFP-GPC3的表达进行鉴定,采用MTT法研究GPC3对生长因子FGF2、IGF2促细胞增殖效应的影响。结果:限制性内切酶酶切分析、重组质粒测序鉴定表明为正确重组子,荧光显微镜下可见转染的SK-Hep-1胞膜区发出强绿色荧光,RT-PCR表明GPC3在SK-Hep-1中成功表达,生长因子实验中,GPC3明显抑制FGF2促细胞增殖效应,与空质粒转染组相比有显著性意义(P<0.05),IGF2实验组与空质粒转染组相比无显著性意义(P>0.05)。结论:测序表明,编码的氨基酸序列与人GPC3完全一致;构建完成真核表达重组质粒pEGFP-N2-GPC3;GPC3基因在SK-Hep-1中成功表达;GPC3在FGF2信号通路中可能发挥负性调控因子的作用。
- 王冰林山王烈
- 关键词：真核表达载体绿色荧光蛋白
- GPC3基因对肝癌细胞SK-Hep-1增殖、侵袭能力的影响
- 2010年
- 目的:利用构建好的GPC3真核表达载体,探讨GPC3基因对SK-Hep-1肝癌细胞增殖、黏附、侵袭能力的影响。方法:将pEGFP-N2-GPC3增强型绿色荧光蛋白表达载体通过脂质体方法转入SK-Hep-1人肝癌细胞,确定GPC3已经成功转入细胞后,观察肝癌细胞转染前后增殖、黏附、迁移及侵袭能力的改变。结果:GPC3抑制SK-Hep-1的增殖,降低对Matrigel胶的黏附能力,迁移实验中,200倍目镜下基因转染组细胞的穿膜细胞数为131.7±7.44。空质粒转染组细胞的穿膜细胞数为71.6±4.76。侵袭实验中,200倍目镜下基因转染组细胞的穿膜细胞数为220±12.8。空质粒转染组细胞的穿膜细胞数为138±10.5。两组细胞比较,迁移、侵袭能力均显著增强(P<0.001)。结论:GPC3真核表达载体抑制肝癌细胞SK-Hep-1的增殖,降低其对Matrigel胶的黏附能力,增加其迁移及侵袭能力,GPC3可能通过抑制FGF2信号途径抑制肝癌细胞的增殖。
- 王冰林山王烈
- 关键词：磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3增殖
- GPC3增强型绿色荧光蛋白真核表达载体的构建及其对生长因子促细胞增殖效应的影响
- 2008年
- 目的:通过构建GPC3增强型绿色荧光蛋白真核表达载体,研究磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(Glypican-3,GPC3)对成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor-2,FGF2)、胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor-2,IGF2)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、骨形态发生蛋白-4(bone morphogenetic protein-4,BMP4)促细胞增殖效应的影响。方法:应用基因重组技术及限制性内切酶酶切构建并鉴定pEGFP-N2-GPC3增强型绿色荧光蛋白真核表达载体,经脂质体LipofectamineTM2000介导转染SK-Hep-1后,通过G418(600μg/ml)筛选出抗性克隆,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测GPC3mRNA在真核细胞中的表达,Western印迹法检测GPC3蛋白在真核细胞中的表达,并在荧光显微镜下观察目的蛋白在真核细胞内的表达情况,采用MTT法研究GPC3对生长因子FGF2、IGF2、TGF-β1、BMP4促细胞增殖效应的影响。结果:限制性内切酶酶切分析、重组质粒测序鉴定表明为正确重组子,荧光显微镜下可见转染的真核细胞胞膜区发出强绿色荧光,RT-PCR及Western印迹法表明GPC3在真核细胞中成功表达,GPC3抑制了FGF2对SK-Hep-1细胞的增殖效应,而不抑制IGF2、TGF-β1、BMP4的促增殖作用。结论:编码的氨基酸序列与人GPC3完全一致;构建完成真核表达重组质粒pEGFP-N2-GPC3;GPC3基因在SK-Hep-1中成功表达;GPC3在FGF2信号通路中可能发挥负性调控因子的作用。
- 王冰林山王烈
- 关键词：真核表达载体绿色荧光蛋白
- GPC3基因对人肝癌细胞SK-Hep-1生物学行为的影响
- 2010年
- 目的:利用构建好的GPC3真核表达载体,研究其对肝癌细胞生物学行为的影响。方法:将pEGFP-N2-GPC3增强型绿色荧光蛋白表达载体通过脂质体方法转入SK-Hep-1人肝癌细胞,确定GPC3已经成功转入细胞后,观察转染前后肝癌细胞增殖、黏附、运动及体外侵袭能力的改变,并观察四种生长因子FGF2、IGF2、BMP4、TGFβ1对GPC3抑制细胞增殖的影响。结果:GPC3抑制SK-Hep-1的增殖,降低对Matrigel胶的黏附能力,增加SK-Hep-1的迁移及侵袭能力,GPC3抑制FGF2对SK-Hep-1细胞的增殖效应,而对其他三种生长因子IGF2、BMP4、TGFβ1无此作用。结论:GPC3真核表达载体可抑制肝癌细胞SK-Hep-1的增殖,但可降低其对Matrigel胶的黏附能力,增加其迁移及侵袭能力,GPC3可能通过抑制FGF2信号途径来抑制肝癌细胞细胞的增殖。
- 王冰林山王烈
- GPC3增强型绿色荧光蛋白真核表达载体的构建及其对生长因子促细胞增殖效应的影响
- 2010年
- 王冰林山王烈
- 关键词：真核表达载体增强型绿色荧光蛋白GPC3增殖效应蛋白质前体
- 重组质粒pEGFP-N2-GPC3的构建及GPC3对生长因子FGF2、IGF2促进细胞增殖的影响
- 2008年
- 目的构建GPC3基因真核表达重组质粒，观察GPC3对生长因子FGF2、IGF2促进肝癌细胞增殖的影响。方法自行设计引物从GPC3原核扩增重组质粒pDNR．LIB．GPC3中获得编码GPC3的基因片段。应用基因重组技术，将GPC3基因片段克隆到真核表达载体pEGFP-N2中，然后经脂质体介导转染SK-Hep-1，并通过G418（600mg／L）筛选出抗性克隆，应用荧光显微镜及逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）法对转染细胞内pEGFP-GPC3的表达进行鉴定，采用噻唑蓝（MTT）比色法研究GPC3对生长因子FGF2、IGF2促细胞增殖效应的影响。结果限制性内切酶酶切分析、重组质粒测序鉴定表明为正确重组子，荧光显微镜下可见转染的SK-Hep-1胞膜区发出强绿色荧光，RT-PCR表明GPC3在SK-Hep-1中成功表达，生长因子实验中，GPC3明显抑制FGF2促细胞增殖效应，与空质粒转染组比较差异有统计学意义（P〈0．05），IGF2实验组与空质粒转染组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论测序表明，编码的氨基酸序列与人GPC3完全一致；构建完成真核表达重组质粒pEGFP-N2-GPC3；GPC3基因在SK-Hep-1中成功表达；GPC3在FGF2信号通路中可能发挥负性调控因子的作用。
- 王冰林山王烈
- 关键词：真核表达载体绿色荧光蛋白
