国家自然科学基金(31160033)
- 作品数：14 被引量：44H指数：4
- 相关作者：冯若飞张海霞凡静静王丹李向茸更多>>
- 相关机构：西北民族大学北京生物制品研究所中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金国家民委科研基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 我国不同地区猪脑心肌炎和细小病毒流行病学调查被引量：4
- 2014年
- 猪脑心肌炎病毒（Encephalomyocarditis virus,EMCV）属于小RNA病毒科、心病毒属成员,能引起猪以脑炎、心肌炎或心肌周围炎为主要特征的急性传染病[1-3]。EMCV感染的妊娠母猪则以流产、死胎、弱胎、木乃伊胎等繁殖障碍为主要特征,其他猪多呈隐性感染状态[4-6]。目前,多个国家和地区不时的报道了该病发生和流行[6-8]。猪细小病毒（Porcineparvovirus PPV）是引起猪繁殖障碍的一个非常重要的病原体之一。
- 王丹冯若飞马忠仁谢晶莹张海霞杨妍梅李向茸冯玉萍
- 关键词：猪脑心肌炎猪繁殖障碍猪细小病毒脑心肌炎病毒流行病学调查
- 脑心肌炎病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立及初步应用被引量：2
- 2013年
- 为建立快速检测脑心肌炎病毒(EMCV)的环介导等温扩增方法(LAMP),参照GenBank中EMCV基因组序列(X74312.1),针对EMCV的3D基因保守区域设计并合成了4条引物,对建立的反应体系进行条件优化,并进行特异性、敏感性试验及临床样本的检测。结果显示,成功建立了EMCV LAMP检测方法,且当内、外引物浓度比例为5∶1(即内、外引物浓度分别为50μmol/L、10μmol/L),反应温度为64℃,反应时间为60min时反应体系可达最佳。特异性和敏感性试验表明,该方法能够特异性地检测EMCV,且敏感性比常规RT-PCR法高10倍。分别用建立的LAMP法与ELISA法对临床样本进行检测,结果二者的符合率为97%。表明建立的LAMP方法特异性强、敏感性高,可适用于EMCV临床样本的快速检测。
- 王丹冯若飞张海霞凡静静谢晶莹马忠仁冯玉萍
- 关键词：脑心肌炎病毒环介导等温扩增技术
- 脑心肌炎病毒检测方法研究进展被引量：3
- 2012年
- 脑心肌炎由脑心肌炎病毒(EMCV)引起,主要导致猪脑炎、心肌炎及母猪的繁殖障碍,该病的发生与流行严重影响我国养猪业的发展。论文综述了各种EMCV检测方法及其优缺点,为更有效的EMCV检测方法的建立提供参考。
- 张海霞于国伟冯玉萍
- 关键词：脑心肌炎病毒病原学血清学REAL-TIMEPCR
- 脑心肌炎病毒 TaqMan real-time PCR检测方法的建立及应用被引量：9
- 2013年
- 目的建立脑心肌炎病毒（ EMCV） TaqMan real-time PCR检测方法。方法根据GenBank中公布的EMCV 3D基因保守区段设计并合成1对引物和1条TaqMan 探针，建立EMCV TaqMan real-time PCR检测方法，且对体系进行优化；对该法进行灵敏性、特异性验证；采用建立的方法对98份猪血清样本进行检测，并与ELISA结果进行比较。结果建立的EMCV TaqMan real-time PCR检测方法线性关系较好，以质粒标准品构建的标准曲线相关系数R2为0．995；灵敏性比普通PCR高100倍，且仅能特异性检出 EMCV；对猪血清样本的检测与 ELISA 法检测结果符合率为98．0％。结论已建立了EMCV TaqMan real-time PCR检测方法，该法灵敏性高、特异性好，可用于EMCV的检测及定量分析。
- 张海霞冯若飞王丹凡静静谢晶莹马忠仁冯玉萍
- 关键词：脑心肌炎病毒实时荧光定量PCR
- 脑心肌炎病毒抗体双抗原夹心ELISA检测方法的建立及初步应用被引量：3
- 2012年
- 目的建立脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)抗体双抗原夹心ELISA检测方法,用于EMCV血清学调查及临床检测。方法采用EMCV基因重组蛋白VP1、VP2和2C作为包被抗原,HRP标记EMCV作为酶标抗原,建立EMCV抗体双抗原夹心ELISA检测方法;用内部参考血清对建立的方法进行评价,并与间接ELISA法进行比较;采用所建立的方法对1 475份人血清和1 309份猪血清进行检测。结果建立的双抗原夹心ELISA法的最佳抗原包被浓度为7.5μg/ml,封闭液为10%马血清或2%鱼蛋白胨,酶标抗原稀释度为1∶400。该方法的批内和批间变异系数均小于10%;热稳定性较好;与间接ELISA法检测结果的符合率为93.5%。应用建立的方法检测人血清和猪血清中的EMCV抗体阳性率分别为16.8%和63.4%。结论已建立了EMCV抗体双抗原夹心ELISA检测方法,该方法可靠、稳定、特异、敏感、操作简便,为EMCV抗体的临床检测提供了有效的技术手段。
- 樊得英冯若飞李向茸张海霞凡静静沈心亮马忠仁
- 关键词：脑心肌炎病毒抗体酶联免疫吸附测定
- 病毒受体研究进展被引量：6
- 2015年
- 病毒受体是由宿主细胞自主编码、调控和表达的一类特殊的蛋白质,是宿主细胞膜的重要组成部分之一,它能够介导病毒与靶细胞特异性结合,并促进病毒侵入或感染宿主细胞。病毒受体不仅有着其正常的生理功能,还是病毒致病性的关键因素之一,与病毒的入侵途径、扩散方式及发病特点等有着密切的关系。由于病毒受体研究起步较晚,许多病毒感染宿主细胞的机制至今仍不明确,所以,病毒受体的研究已成为相当活跃的研究领域。近年来,随着人们对各种病毒研究的不断深入,其受体的发现越来越多,但其种类繁多,分类复杂,为相关的研究工作带来了许多不便,在此,通过对近年来发现的受体进行系统的阐述,以方便更多的人更好地了解病毒受体。
- 徐雷冯若飞马忠仁
- 关键词：病毒细胞膜受体
- 静置培养MDCK细胞的生长及代谢动力学研究被引量：1
- 2015年
- 为研究MDCK细胞的生长及代谢动力学特征,试验采用低密度静置培养,每天测定细胞生长密度和活力,并利用多参数生化分析仪测定培养液中Gluc、Lac、Gln和NH4+的含量,计算细胞指数生长期的比代谢速率。结果表明:MDCK细胞生长曲线呈"S"型,最大增殖密度为53.8×104 upf·mL-1,倍增时间为24.2h;对数生长期Gluc和Gln的比代谢(消耗速率为-2.20 mg·(106cells·d)-1和-3.85μmol·(106cells·d)-1,Lac和NH4+的比生成)速率为2.25mg·(106cells·d)-1和2.22μmol·(106cells·d)-1。
- 暴艳敏王家敏马祺令世鑫马卫国马忠仁乔自林
- 关键词：MDCK细胞代谢动力学
- 脑心肌炎病毒的体外细胞增殖培养及其冻干保存试验被引量：3
- 2012年
- 为了解脑心肌炎病毒在Vero细胞不同培养方式下的增殖效果和用不同冻干保护剂的冻干效果,分别采用方瓶、转瓶来培养Vero细胞并接种脑心肌炎病毒,测定收获病毒毒液的效价,比较病毒的增殖效果;配制了10组冻干保护剂,分别与病毒混合后真空冻干,通过测定冻干前后的病毒效价,以期筛选最佳的保护剂配方。结果显示,脑心肌炎病毒在Vero细胞转瓶培养中增殖效果较好,第Ⅷ组保护剂对脑心肌炎病毒的冻干保护效果最好,冻干后效价下降低于1.5(lg)TCID50/mL。表明Vero细胞转瓶培养方式可用于脑心肌炎病毒的体外大规模培养;含有50g/L蔗糖、2.2g/L牛血清白蛋白、5.0g/L明胶和6.0g/L谷氨酰胺的保护剂对脑心肌炎病毒冻干具有较好的保护作用。
- 张海霞冯若飞王丹凡静静李向茸杨妍梅马忠仁冯玉萍
- 关键词：脑心肌炎病毒增殖培养效价冻干保护剂
- 脑心肌炎病毒及其蛋白结构和功能研究进展被引量：10
- 2012年
- 脑心肌炎病毒(EMCV)是一种重要的人畜共患病病原,高危感染动物是猪,自然宿主是啮齿动物,人也可以感染这种病毒。也有研究报道,病毒可分解为前体蛋白P1、P2、P 3和L蛋白,最终切割成11个蛋白终产物,其中VP1蛋白存在主要抗原表位,具有良好的中和作用。目前尚不能阐明病毒感染后的发病机制,宿主感染病毒的影响因素等。因此,对病毒特性进行的研究有助于对该病的预防及控制,对病毒基因组及它所编码蛋白的结构与功能的研究对新型疫苗及动物机体的抗感染免疫机制的研究有重要的生物学作用。论文综述了脑心肌炎病毒基因组结构及其编码蛋白的结构和功能。
- 凡静静冯若飞马忠仁
- 关键词：脑心肌炎病毒蛋白
- 脑心肌炎病毒单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2014年
- 为了制备脑心肌炎病毒(EMCV)的单克隆抗体,并对其进行鉴定。应用杂交瘤细胞技术,将灭活EMCV免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,HAT选择培养、间接ELISA法筛选和多次克隆化,筛选出稳定分泌抗猪EMCV的杂交瘤细胞株,并对其分泌的单克隆抗体进行了亚型、效价、特异性和细胞株染色体核型的分析。结果获得了1株能分泌抗EMCV单克隆抗体的细胞株,命名为EMCV Y1G9,其分泌的抗体亚型为Ig G2b类;腹水效价可达3.2×104;细胞株的染色体核型分析结果是染色体众数为92±2,单抗的特异性也较好。制备出了具有良好特异性和敏感性的抗EMCV的Mc Ab,为建立EMCV的特异性检测方法及该病的防制奠定了基础。
- 李向茸冯若飞樊得英马忠仁
- 关键词：脑心肌炎病毒单克隆抗体
