国家自然科学基金(31001052)
- 作品数:4 被引量:9H指数:2
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- 相关机构:扬州大学更多>>
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- 相关领域:医药卫生农业科学生物学更多>>
- 巨噬细胞特异的人工miRNA表达载体的构建与鉴定被引量:1
- 2015年
- 根据小RNA(microRNA,miRNA)前体分子结构特点而设计并合成的人工miRNA(artificial miRNA,amiRNA)也可以在体内通过与内源miRNA相同或相似的途径发挥RNA干扰(RNA interference,RNAi)作用,目前amiRNA技术在调控基因表达、抗病毒领域得到了广泛应用[1-4]。
- 宋红芹姜翠翠张鑫宇夏晓莉孙怀昌
- 关键词:巨噬细胞
- 猪Toll样受体7基因人工miRNA表达质粒的构建与筛选被引量:3
- 2013年
- 目的构建猪Toll样受体7(TLR7)基因的人工miRNA(amiRNA)特异性表达载体,筛选有效amiRNA。方法 RT-PCR扩增猪TLR7基因的1984~2648 bp序列,构建融合表达载体pTLR7-EGFP。设计针对猪TLR7的5对amiRNA,构建重组干扰质粒pcDNA5-miRTLR7。将pcDNA5-miRTLR7和pTLR7-EGFP共转染NIH-3T3细胞,通过RT-PCR检测amiTLR7的表达,以荧光显微镜观察和流式细胞术分析干扰效率。结果 5个amiTLR7都成功表达,且均能沉默NIH-3T3细胞中TLR7基因的表达,抑制效率为36.99%到97.28%,其中amiTLR7-3效果最佳。结论成功构建了针对猪TLR7基因的amiRNA表达质粒,筛选出了沉默猪TLR7基因的最佳干扰序列。
- 宋红芹姜翠翠孙怀昌
- 关键词:RNA干扰
- 非洲猪瘟病毒NP419L基因shRNA表达质粒的构建与筛选被引量:5
- 2013年
- 为构建非洲猪瘟病毒(ASFV)shRNA表达质粒,以PCR扩增出非洲猪瘟病毒NP419L基因,并插入真核表达载体pEGFP-N1中,构建重组真核表达质粒pNP419L-GFP,将其转染NIH-3T3细胞,NP419L-GFP融合基因在细胞中获得表达。针对NP419L基因设计并合成5对干扰序列,将其连接到RNAi表达载体pSuper中,构建干扰质粒pSuper-shNP419L-A,B,C,D,E,将质粒pNP419L-GFP和pSu-per-shNP419L-A,B,C,D,E分别共转染NIH-3T3细胞,通过荧光显微镜观察和流式细胞仪分析干扰效率。结果显示,5个干扰质粒均能抑制NIH-3T3细胞中NP419L-GFP融合基因的表达,其中pSuper-shNP419L-A,B的抑制效果较好,在87%以上,与pSuper-shNP419L-C,D,E之间均存在显著性差异(P<0.05)。表明,本试验成功构建出针对ASFV NP419L基因的RNA干扰质粒,并筛选出了有效沉默NP419L基因的干扰序列,为进一步体内试验研究奠定了基础。
- 宋红芹姜翠翠张鑫宇夏晓莉孙怀昌
- 关键词:非洲猪瘟病毒RNA干扰
- 巨噬细胞特异性真核表达载体的构建与鉴定被引量:1
- 2012年
- 目的:克隆人清道夫受体A(SR-A)启动子,构建巨噬细胞特异性的真核表达载体。方法:从人外周血中提取基因组DNA,采用PCR技术分别扩增人SR-A的启动子及第一内含子和增强子序列,并插入带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的真核表达载体pcDNA-GFP中,构建巨噬细胞特异性表达载体pSRA-GFP。将pSRA-GFP转染巨噬细胞和非巨噬细胞,通过荧光显微镜观察和流式细胞术比较GFP在不同细胞中的表达水平。结果:成功克隆SR-A启动子,其在巨噬细胞RAW264.7中的表达活性显著高于NRK、LLC、Hepa1-6等非巨噬细胞株(P<0.05)。结论:构建的表达载体pSRA-GFP具有良好的组织细胞特异性,可用于巨噬细胞特异性miRNA表达载体的构建。
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