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4种商品化试剂盒检测猪瘟病毒抗体的比较分析被引量：7: 2011年; 猪瘟（CSF）是由猪瘟病毒感染引起的猪的急性、热性、高度致死性传染病,是严重影响养猪业发展的主要疫病之一。世界动物卫生组织（OIE）将其列为A类l6种传染病之一,我国亦将其列为一类传染病,是发生最多、危害最大、流行最广的动物传染病之一。; 庞然张小敏周斌何丹妮陈溥言; 关键词：猪瘟病毒抗体试剂盒动物传染病世界动物卫生组织

羊的泰勒虫病免疫胶体金检测试纸条的制备与应用: 本研究利用胶体金标记的TuiP蛋白抗原、TuIP蛋白抗原和抗TuIP多克隆抗体制备了羊的泰勒虫病免疫胶体金检测试纸条.用胶体金标记TuIP抗原并喷涂于结合垫上制成胶体金垫，在硝酸纤维素膜检测线上和质控线上分别包被TuIP...; 卢怡竹李有全罗建勋殷宏刘志杰

猪瘟病毒Core蛋白的原核表达和抗体制备及应用被引量：2: 2015年; 根据猪瘟病毒衣壳蛋白(Core)基因序列设计一对特异性引物,RT-PCR从猪瘟兔化弱毒中扩增出完整的Core基因,经酶切和序列测定后,克隆到携带His标签的原核表达载体p ColdⅠ中,成功构建了重组质粒p Cold-Core,并转化到大肠杆菌Rosseta 2(R2)中;利用IPTG诱导表达目的蛋白并鉴定表达效果。结果表明:经终浓度为0.1 mmol/L IPTG诱导24 h后,Core基因在R2中获得分泌性可溶表达,表达量占菌体蛋白的32.6%,SDS-PAGE显示目的蛋白相对分子质量为20 ku。Western blot结果显示Core蛋白可以分别与His单抗和猪瘟病毒阳性抗血清发生特异性反应,均出现单一反应带。将目的蛋白切胶后免疫Balb/c小鼠,制备特异性抗血清,Western blot结果显示该抗血清与衣壳蛋白反应后有明显的特异性条带,经激光共聚焦鉴定抗血清能够与胞浆中的猪瘟病毒粒子发生反应。结果表明,Core基因表达成功,制备的抗血清具有生物学功能。本研究为深入探讨Core蛋白在猪瘟病毒致病机制上的作用奠定了基础。; 景娇张小敏何丹妮刘珂周斌陈溥言; 关键词：猪瘟病毒原核表达抗血清

热休克蛋白70促进猪瘟病毒囊膜糖蛋白E0的小鼠免疫效果被引量：3: 2015年; 为了初步探索热休克蛋白70(Hsp70)作为分子佐剂增强猪瘟病毒亚单位疫苗的免疫效果,本研究根据猪瘟病毒兔化弱毒株囊膜糖蛋白E0的基因序列,设计一对特异性引物,RT-PCR扩增得到完整的E0基因,将其分别插入到原核表达质粒pColdI和含有副猪嗜血杆菌Hsp70的pColdI-Hsp70中,构建了pColdI-E0和pColdI-E0-Hsp70重组质粒,经IPTG诱导表达后,获得了E0、Hsp70和E0-Hsp70融合蛋白。将以上三种蛋白纯化后分组免疫Balb/c小鼠,通过ELISA和流式细胞术测定了小鼠针对E0蛋白的体液免疫和细胞免疫效果。结果显示:E0-Hsp70融合蛋白和E0+Hsp70混合物免疫后均能显著提高抗E0的抗体效价、CD4+和CD8+T细胞水平,并促进IFN-γ的释放。研究结果表明Hsp70能显著增强猪瘟病毒囊膜糖蛋白E0在小鼠上的免疫效果,为在猪体上的进一步应用奠定了基础。; 徐倩倩张小敏景娇师保浚王世旗周斌陈溥言; 关键词：猪瘟病毒 HSP70

实时荧光定量PCR检测猪源Mx1方法的建立及应用被引量：4: 2013年; 根据GenBank中的猪源抗病毒蛋白Mx1基因(poMx1)序列设计1对特异性引物,从Mx1基因全长片段中扩增和克隆了特异性的115 bp核苷酸片段。测序鉴定正确后将重组质粒进行定量并10倍倍比稀释作为扩增模板,通过SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,建立Mx1的标准曲线及回归方程。结果显示:该标准曲线的回归方程为Y=-2.986 3 lg X+38.239 3(R2=0.998 5),灵敏度为1×102μL-1;应用该方法对猪瘟兔化弱毒苗接种猪肾细胞(PK-15)后产生的poMx1 mRNA进行定量分析,发现病毒感染细胞4 h后,poMx1的表达量最高(P<0.01),然后随着时间的增加而缓慢减少。结论:建立的SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR方法可以检测poMx1 mRNA的表达水平。; 张小敏周斌何丹妮庞然赵津陈溥言; 关键词：实时荧光定量PCR

猪源Mx1基因的原核表达及其抗血清制备被引量：7: 2012年; 利用1对特异性引物,从pT-poMx1中扩增出Mx1基因开放式阅读框(1 992 bp),并将其编码区插入到携带GST标签的原核表达载体pGEX-6p-1中,经酶切和序列测定后,重组质粒pGEX-poMx1转化入大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG诱导表达融合蛋白并分析表达效果。结果表明:经终浓度为0.8 mmol.L-1 IPTG诱导后4 h,猪源Mx1基因(poMx1)在BL21(DE3)中获得高效表达,表达量占菌体蛋白的32.6%,SDS-PAGE显示融合蛋白相对分子质量为99×103。将目的蛋白切胶后免疫Balb/c小鼠,制备了特异性多抗血清,Western blot结果显示该抗血清与融合蛋白孵育反应后有明显的特异性条带。结论:poMx1基因表达成功。; 何丹妮周斌张小敏陈溥言庞然赵津; 关键词：原核表达抗血清

羊的泰勒虫病免疫胶体金检测试纸条的制备与应用: ＜正＞目的与方法本研究利用胶体金标记的TuIP蛋白抗原、TuIP蛋白抗原和抗TuIP多克隆抗体制备了羊的泰勒虫病免疫胶体金检测试纸条。用胶体金标记TuIP抗原并喷涂于结合垫上制成胶体金垫,在硝酸纤维素膜检测线上和质控线上...; 卢怡竹李有全罗建勋殷宏刘志杰; 文献传递

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国家自然科学基金(31001062)