国家科技重大专项(2008ZX08012-005)
- 作品数：11 被引量：86H指数：5
- 相关作者：吴希阳马骏陈贞芦春斌汪琳更多>>
- 相关机构：广东出入境检验检疫局暨南大学北京出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 基于多重串联式PCR的基因碟片技术检测转基因作物被引量：2
- 2012年
- 【目的】建立基于多重串联式PCR(multiplexed tandem PCR,MT-PCR)的基因碟片技术,并使之应用于转基因作物的大量、快速和稳定地检测。【方法】以转基因作物研究中常用的调控序列NOS终止子、FMV35S启动子及外源基因NPTⅡ、Cry1Ab、Cry1Ab/Ac、CP4-EPSPS、PAT和玉米内源基因IVR、棉花内源基因sad1、菜籽粕内源基因PEP为检测对象,针对每个基因设计内外2对引物,先进行一次循环数较少(10—20 cycles)的高通量多重PCR,以便在均匀地扩增各基因和调控序列的同时避免引物之间的竞争,然后利用巢式荧光定量PCR检测各个基因和调控序列,最后根据扩增曲线和熔融曲线分析结果。【结果】该方法能够快速(<2 h)、高通量、准确地(>0.000292 ng)检测出棉花、玉米、大米、菜籽粕中的多种转基因成分,可以分辨出3种转基因物种,适合大批量检测。【结论】该方法适合转基因作物的高通量、定量检测,具有较好的应用前景。
- 魏霜陈贞马骏白卫滨吴希阳
- 关键词：转基因
- 核酸试纸条在检测转EPSPS基因作物中的应用被引量：17
- 2011年
- 目的:建立快速、简便和特异的检测转EPSPS基因作物的方法。方法:针对转EPSPS基因作物外源基因cp4-EPSPS的8个区域,设计2对特异性引物和1对环引物,对反应体系中的MgSO4、内引物、环引物、甜菜碱、dNTP浓度和反应温度等条件分别进行优化,并用核酸试纸条对扩增产物进行检测,建立用于检测转EPSPS基因作物的环介导等温扩增方法(LAMP)。结果:用建立的LAMP方法检测转EPSPS基因作物时,在64℃恒温反应30 min,即可根据试纸条显色直接观察结果;该方法具有高度特异性,可检测到10个拷贝的EPSPS DNA。结论:LAMP方法可快速、灵敏、特异、经济地检测转EPSPS基因作物,在基层和实验室都具有良好的应用前景。
- 汪琳罗英周琦赖平安张向东柏亚铎
- 关键词：环介导等温扩增
- 转基因玉米的七重PCR鉴定方法
- 2011年
- 以玉米内源基因IVR、外源抗除草剂基因(BAR、PAT)、抗虫基因Cry1Ab、筛选基因NPTII、CaMV35S启动子和NOS终止子为检测的目的片段,分别设计了7对引物,通过研究较佳引物终浓度配比和退火温度,建立了玉米转基因成分七重PCR检测体系。结果表明,建立的七重PCR体系用于同时检测内源基因和转基因成分是可行的,检测方法效率高、稳定性好。
- 陈贞芦春斌杨梦婕马骏白卫斌吴希阳
- 关键词：玉米转基因成分
- 多重PCR检测转基因水稻的转基因成分被引量：26
- 2012年
- 以水稻内源基因SPS、外源抗虫基因Cry1Ab、外源抗虫基因Cry1Ab/Ac、外源抗虫基因Btc、报告基因GUS、NOS终止子和CaMV35S启动子为检测对象,设计7对引物,通过优化PCR扩增体系中不同引物浓度的配比及退火温度,建立水稻转基因成分的七重PCR检测体系。结果表明:建立的七重PCR体系能有效检测出水稻及其他作物(大豆、玉米、棉花籽、菜籽粕)中的转基因成分,检测过程简便、特异性好。
- 魏霜陈贞芦春斌马骏白卫滨吴希阳
- 关键词：转基因检测水稻
- 不同种植年限转基因抗虫棉对土壤中小型节肢动物的影响被引量：5
- 2011年
- 2007-2008年,在分别于1999年、2002年和2006年种植Cry1Ac基因抗虫棉的棉田中,于棉花的苗期、蕾期、花铃期和吐絮期采集土壤样品,采用改良的Tullgren法收集土壤中的中小型节肢动物,以监测长期种植转基因抗虫棉对土壤节肢动物群落的影响。2年8次采样共获得12类中小型节肢动物,隶属于节肢动物门中的7纲10目,其中弹尾目、蜱螨目、蜘蛛目为本地区棉田中的优势类群,综合纲、双翅目、半翅目、双尾目、鞘翅目和同翅目为常见类群。广义线性混合模型分析结果表明,随着转基因抗虫棉种植年限的增加,各转基因抗虫棉田中的土壤主要类群中小型节肢动物的个体密度和多样性指数没有产生显著性差异,但是随着采样时期的不同各棉田土壤主要中小型节肢动物的个体密度和群落多样性指数均呈显著性季节变化。主成分分析表明,弹尾目、蜘蛛目、蜱螨目的得分值较高,可作为本地区未来转基因抗虫棉环境影响监测的重要指标生物。
- 李孝刚刘标曹伟徐文华方志翔孟军郑央萍韩正敏
- 关键词：转基因抗虫棉土壤
- 核酸恒温扩增技术研究进展被引量：18
- 2011年
- 核酸恒温扩增技术在生命科学研究及相关诸多领域已经得到了广泛应用。我们对核酸恒温扩增技术的最新进展作一简要综述,包括环介导恒温扩增、链替代扩增、依赖核酸序列的扩增、滚环扩增、切口酶核酸恒温扩增、依赖解旋酶的恒温扩增、转录依赖的扩增、杂交捕获法、转录介导的扩增等的原理、优缺点及应用。
- 汪琳罗英周琦赖平安柏亚铎
- 关键词：滚环扩增
- 棉花中转基因成分多重PCR检测体系的建立被引量：9
- 2011年
- 以棉花内源基因sad1、报告基因GUS、外源抗虫基因Cry1 Ab/Ac、筛选基因NPTⅡ、NOS终止子和CaMV35 S启动子为检测对象,设计的6对引物能扩增长度合适的基因片段且避免了引物二聚体。通过优化PCR扩增体系中不同引物终浓度的配比以及退火温度对多重PCR检测的影响,建立了棉花转基因成分6重PCR检测体系。结果表明:采用本研究建立的棉籽基因组DNA提取方法,该6重PCR检测体系能够有效地从少至1颗棉籽的少量样品里检测出棉花中的转基因成分。
- 陈贞芦春斌杨梦婕马骏白卫斌吴希阳
- 关键词：棉花转基因检测多重PCR
- 转Bt基因作物毒素蛋白降解特性研究进展被引量：2
- 2011年
- 总结了Bt杀虫蛋白的特性、转Bt基因作物毒素蛋白在土壤中的残留和积累以及对土壤生态系统的影响,阐明了转Bt基因作物毒素蛋白在土壤中的降解与影响因素,并提出应积极开展转Bt基因作物秸秆的降解研究,在降解秸秆的同时降解其中的Bt毒素蛋白。
- 邢福国刘阳乔文静
- 关键词：转BT基因作物毒素蛋白土壤降解
- 转Bt基因作物恒温扩增快速检测技术被引量：1
- 2011年
- [目的]建立一种快速检测转Bt基因作物的方法。[方法]利用Bt的Cry1ab/ac基因序列设计特异性引物,建立LAMP检测方法以及优化反应体系,并进行LAMP的特异性和灵敏度试验。[结果]成功建立转Bt基因作物的LAMP检测方法,得到最优的反应体系。在特异性试验中,转Bt基因作物基因组DNA均呈阳性,而非转基因作物、转Bar基因作物、转CPTI基因作物、转EPSPS基因作物等均为阴性;在灵敏度试验中,转Bt基因作物的最低检测限为10个拷贝。[结论]LAMP方法具有很高的特异性和灵敏度,可用于转Bt基因作物的现场快速检测。
- 汪琳赵胤泽罗英周琦赖平安张向东柏亚铎
- 关键词：转BT基因作物
- 多重PCR检测转基因菜籽粕中的转基因成分被引量：16
- 2011年
- 以油菜内源基因PEP、抗除草剂基因(BAR、PAT)、筛选基因NPTII、常见启动子(CaMV35S、FMV35S)和终止子NOS为检测对象,通过研究不同引物终浓度的配比以及退火温度对转基因菜籽粕多重PCR检测的影响,建立了菜籽粕转基因成分7重PCR检测体系。结果表明,本研究所建立的检测体系能有效检测出菜籽粕以及其他作物(大豆、玉米、大米、棉花籽)中的转基因成分,检测过程简便、准确,值得推广应用。
- 陈贞芦春斌杨梦婕马骏白卫斌吴希阳
- 关键词：转基因成分菜籽粕多重PCR
