国家自然科学基金(39570043)
- 作品数：9 被引量：14H指数：2
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- 相关机构：第二军医大学复旦大学解放军第306医院更多>>
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- 新生隐球菌Cap59缺陷株ura5突变株的筛选方法
- 2004年
- 改进筛选新生隐球菌Cap5 9荚膜缺陷株ura5突变株的方法。采用硫酸二乙酯化学诱导新生隐球菌Cap5 9荚膜缺陷株 ,利用 5 氟乳清酸 (5 FOA)反筛选法筛选ura5尿嘧啶合成基因突变株。用新方法筛选到 2株Cap5 9荚膜缺陷株ura5突变株。
- 郭秀军廖万清任大明王荫榆
- 关键词：新生隐球菌
- 新生隐球菌荚膜基因CAP60与荧光蛋白融合表达系统的构建
- 2002年
- 潘炜华廖万清顾菊林霍克克
- 关键词：荧光蛋白荚膜
- 新生隐球菌荚膜基因CAP60对菌体荚膜形成的影响被引量：3
- 2002年
- 目的 :研究新生隐球菌荚膜相关基因 CAP6 0对菌体荚膜形成的影响。 方法 :用 PCR方法分离 CAP6 0基因并测序鉴定 ,将该基因导入转化载体并转化 cap6 0 ura- 菌株 ,乳胶凝集试剂盒筛选转化分子。 结果 :部分转化子恢复荚膜的表型 ,表明得到的片段具有荚膜基因功能。 结论 :荚膜基因对新生隐球菌的荚膜形成都是必须的 。
- 潘炜华廖万清顾菊林霍克克
- 关键词：新生隐球菌荚膜聚合酶链反应
- 新生隐球菌高效转化方法的研究
- 2002年
- 目的:探索并建立高效的新生隐球菌转化方法.方法:采用化学转化法进行新生隐球菌的转化,利用特定试剂使隐球菌在一定环境中能摄取外源DNA,并与电转化法进行比较;利用酵母质粒稳定性测定鉴定该化学转化方法的实用性.结果:用化学转化的酵母每μg质粒DNA转化效率>1 000个转化子,其转化效率远高于传统所用的电转化方法(每μg质粒DNA 20～30个转化子).结论:在新生隐球菌的转化系统中寻找到一个合适的化学转化条件,为后续研究奠定了实验基础.
- 潘炜华廖万清顾菊林霍克克
- 关键词：新生隐球菌电转化法
- 新生隐球菌CAP64荚膜缺陷株ura5突变株的筛选和鉴定被引量：1
- 2004年
- 目的 :筛选和鉴定新生隐球菌 CAP6 4荚膜缺陷株 ura5突变株。方法 :(1 )用体外基因重组技术将 G4 1 8抗性基因插入到新生隐球菌 1 .2 kb的 ura5基因中 ;(2 )用电转化方法将体外重组片段导入受体菌 ;(3)利用 5 -氟乳清酸 (5 - FOA)反筛选法筛选 ura5突变株 ;(4 )用遗传学鉴定营养缺陷株的方法鉴定突变体。结果 :1株突变株 ura5基因的序列与重组片段相同 ;其Southern杂交显示在 2 0 kb和 7kb处出现 2条杂交条带 ;该突变株能在 SDU、SDU和 YEPD/ G4 1 8平板上生长 ,不能在 SD平板生长 ;其生长曲线显示突变株生长速度依赖于尿嘧啶的提供量。 结论 :获得了 1株新生隐球菌 CAP6 4荚膜缺陷株 ura5突变株 ,建立了新生隐球菌 CAP6 4荚膜缺陷株转化系统 ,为 CAP6
- 郭秀军廖万清任大明王荫榆霍克克
- 关键词：新生隐球菌突变株
- 新生隐球菌cap60荚膜缺陷株转化系统的构建被引量：2
- 1999年
- 目的 构建新生隐球菌荚膜缺陷株cap60的转化系统。方法与结果①在新生隐球菌的荚膜缺陷株cap60中利用 5 -氟乳清酸 ( 5 FOA)反选择法筛选到一个尿嘧啶合成基因突变株 (cap60ura5 ) ;②利用带有以新生隐球菌ura5基因为选择标记的质粒载体 pCntel1 d通过电转化法和化学转化法成功地转化该ura5突变株 ;③经质粒稳定性检验和Southern杂交分析表明质粒载体pCntel1 d在新生隐球菌cap60ura5菌株中能以整合和游离两种状态存在。结论首次建立了新生隐球菌cap60荚膜缺陷株的转化系统 ,这不仅为克隆与荚膜形成有关的新基因提供了基础 ,还为以基因中断、基因替代方法研究基因功能及基因表达等方面的工作创造了条件。
- 王珏霍克克廖万清
- 关键词：隐球菌
- 新型隐球酵母cap70荚膜缺陷株转化系统的建立被引量：6
- 2001年
- 目的 构建新型隐球菌荚膜缺陷株cap70的转化系统。方法 (1)在新型隐球菌的荚膜缺陷株cap70中利用 5 氟乳清酸 (5 FOA)反选择法筛选尿嘧啶合成基因突变株 (cap70ura5 ) ,并用Southern杂交和PCR方法对突变株作进一步验证 ;(2 )利用以ura5及ura3为选择标记的质粒载体pCXJ18及pCXJU ,用电转化法和化学转化法转化ura5突变株。结果 筛选到ura5突变株 ,经验证该突变株尿嘧啶合成功能缺失 ;首次用化学转化法在新型隐球菌的转化中获得高效率转化。结论 首次建立了新型隐球菌cap70荚膜缺陷株的转化系统 ,为克隆与荚膜形成有关的新基因提供了基础 ,并为以基因中断。
- 潘炜华廖万清霍克克
- 关键词：新型隐球菌隐球菌
- 绿色荧光蛋白GFP基因与新生隐球菌荚膜基因的融合表达系统被引量：2
- 2006年
- 目的构建新生隐球菌荚膜基因与绿色荧光蛋白的融合表达系统。方法PCR法扩增CAP60基因片段,测序验证其准确性。将其与多个必需基因共同连入穿梭质粒。结果获得6150bps大小的质粒,该质粒含有荚膜基因启动子、终止子及荧光蛋白的基因。结论将新生隐球菌荚膜基因与荧光蛋白基因融合表达,将会有利于对荚膜的生化合成途径作进一步研究。
- 潘炜华廖万清刘晓刚朱元杰霍克克
- 关键词：新生隐球菌绿色荧光蛋白
- 新生隐球菌稳定载体的构建
- 2002年
- 潘炜华廖万清霍克克李波张佳忆
- 关键词：新生隐球菌质粒分子生物学
