广东省医学科学技术研究基金(A2003034)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- PRL-2真核表达载体的构建及其致侵袭和粘附的研究
- 2007年
- 目的构建PRL-2真核表达载体并观察其致侵袭和粘附的能力。方法用RT-PCR法从肝癌细胞系HepG2总RNA中扩增编码PRL-2基因全长阅读开放框DNA,构建真核表达载体。以脂质体转染法将重组质粒稳定转染至正常永生化肝细胞系CL1中,筛选阳性克隆。分别应用RT-PCR、Westernblotting免疫印迹和免疫组化法分析PRL-2在阳性细胞中mRNA、蛋白表达及其定位。MTT法观察转染20min和120min后与底物粘附的细胞数,评价PRL-2对CL1肝细胞粘附能力的促进作用,观察6h后细胞穿透多聚碳膜上层粘蛋白的细胞数,分析PRL-2对肝细胞浸润迁移的影响。结果经RT-PCR扩增出大小为504bp的基因片断,序列测定正确并经亚克隆酶切鉴定。经过8周G418筛选后,获得稳定表达PRL-2的细胞亚系PRL-2-CL1,经RT-PCR、Western blotting印迹和免疫组化证实,PRL-2-CL1细胞系表达PRL-2mRNA及蛋白。PRL-2使CL-1细胞在20min和120min时对纤连蛋白的粘附率明显升高(P<0.05),PRL-2使CL-1细胞穿透迁移小室多聚碳膜的细胞数由(10.0±3.7)个显著升高至(44.8±2.6)个(P<0.05)。结论成功构建重组PRL-2真核表达载体并可在永生化肝细胞中稳定表达,PRL-2具有致肝癌细胞侵袭和转移的能力。
- 叶海燕郭爱林张萌吕国丽文剑明
- 关键词：真核表达载体肝细胞
