江西省自然科学基金(2010GZY0327)
- 作品数：2 被引量：18H指数：2
- 相关作者：朱萱张新华何文华李弼民施凤更多>>
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- 熊果酸对瘦素诱导的肝星状细胞JAK2-STAT3活化及活性氧产生的影响被引量：6
- 2011年
- 目的研究熊果酸对瘦素诱导肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)JAK2-STAT3信号通路活化、活性氧(ROS)产生及基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)、基质金属蛋白酶1(MMP-1)mRNA表达的影响。方法以重组大鼠瘦素作用于HSC-T6细胞,干预组在瘦素作用前分别加入熊果酸、N-乙酰-L半胱氨酸(NAC)、氯化二亚苯基碘嗡(DPI)及JAK抑制剂AG490干预,正常对照组不加任何药物。各组处理不同时间后,采用流式细胞检测细胞内ROS水平;采用免疫细胞化学检测磷酸化JAK2及STAT3蛋白表达;采用RT-PCR检测TIMP-1 mRNA、MMP-1 mRNA的表达。结果①免疫细胞化学检测显示,瘦素刺激HSC-T6细胞2 h后细胞质p-JAK2及细胞核内p-STAT3蛋白表达与正常对照组相比均明显增加(P<0.01),熊果酸干预后p-JAK2及p-STAT3蛋白表达明显低于瘦素刺激组[(85.50±3.78)vs(96.67±3.01),(26.50±3.66)vs(86.67±10.87),P<0.01]。NAC、DPI、AG490干预后p-JAK2及p-STAT3蛋白表达也低于瘦素刺激组(P<0.05或P<0.01)。②流式细胞术检测显示,熊果酸、NAC、DPI和AG490干预后的ROS水平均低于瘦素刺激组[(43.62±5.58)、(55.56±6.43)、(36.54±3.21)、(48.12±6.63)vs(90.86±3.86),P<0.01],而且熊果酸干预组的ROS水平低于NAC干预组(P<0.01)。③熊果酸干预12、24h后与瘦素刺激组相比,TIMP-1 mRNA表达明显下调[(0.28±0.03)vs(0.37±0.01),(0.29±0.04)vs(0.41±0.03),P<0.01],MMP-1 mRNA的表达明显升高[(0.33±0.02)vs(0.26±0.02),(0.37±0.04)vs(0.22±0.04),P<0.01]。结论熊果酸能阻断瘦素在肝星状细胞信号内信号转导,抑制TIMP-1、上调MMP-1的基因表达。
- 刘戈云何文华李弼民李博张新华陈江张焜和朱萱
- 关键词：熊果酸瘦素肝星状细胞活性氧
- 熊果酸对活化型肝星状细胞NADPH氧化酶亚基p47^(Phox)表达及ERK1/2信号通路活化的影响被引量：16
- 2012年
- 目的研究熊果酸(ursolic acid,UA)对瘦素诱导的大鼠肝星状细胞(HSC-T6)NADPH氧化酶(NOX)亚基p47Phox表达及ERK1/2信号通路活化的影响,并观察Ⅰ型胶原合成及细胞增殖情况。方法将培养激活的HSC-T6细胞株分为6组:正常对照组,不加任何药物;瘦素组,给予重组大鼠瘦素(100 ng/ml)刺激细胞;各干预组分别给予UA(50μmol/L)、JAK抑制剂AG490(50μmol/L)、NOX抑制剂DPI(20μmol/L)、ERK抑制剂PD98059(30μmol/L)预处理30 min,再加入瘦素刺激不同时间。采用蛋白质印迹分析检测细胞膜移位的p47Phox蛋白、细胞总p47Phox蛋白和磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达;采用RT-PCR法检测Ⅰ型胶原mRNA的表达;采用MTT法检测细胞增殖。结果瘦素刺激HSC-T6细胞30 min后细胞膜p47Phox蛋白表达较正常对照组增高(P<0.01),细胞内p-ERK1/2蛋白表达也随之增高(P<0.05);UA、AG490、DPI、PD98059干预后抑制了p47Phox蛋白向细胞膜移位以及细胞内ERK1/2蛋白磷酸化。瘦素刺激HSC-T6细胞12 h后Ⅰ型胶原的mRNA表达较正常对照组升高(P<0.01),UA、AG490、DPI及PD98059干预组Ⅰ型胶原mRNA的表达均低于瘦素组(P均<0.01)。瘦素刺激HSC-T6细胞12、24、48 h后细胞增殖率高于正常对照组(P均<0.01);UA、AG490、DPI及PD98059干预不同时间点的细胞增殖率均低于瘦素组(P均<0.01),UA的抑制细胞增殖作用弱于DPI(P<0.01)。结论 UA能抑制瘦素诱导的HSC-T6细胞增殖及Ⅰ型胶原表达,机制可能与抑制NOX亚基p47Phox向细胞膜移位及下游信号通路ERK1/2的激活有关。
- 张新华何文华朱萱李弼民张焜和陈璐施凤
- 关键词：熊果酸肝星状细胞细胞外信号调节激酶类
