国家自然科学基金(81001439)
- 作品数：17 被引量：48H指数：4
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- 赖氨大黄酸与顺铂联合对人肺癌A549细胞系增殖和凋亡的影响被引量：13
- 2014年
- 目的研究赖氨大黄酸(RHL)、顺铂和两者联合对人肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制,为RHL联合顺铂抗肺癌的临床实验研究提供理论依据。方法肺癌细胞系A549随机分为对照组、顺铂组、RHL组和顺铂联合RHL组,用MTT法和流式细胞术分别检测细胞48 h增殖和凋亡。Western blot法检测细胞48 h后凋亡相关蛋白和MEK/ERK蛋白的表达。结果细胞培养48 h后,顺铂组和RHL组的细胞增殖受到一定的抑制并有细胞凋亡发生,但两药联合后的增殖抑制作用和凋亡诱导作用显著高于单用顺铂和RHL组(P<0.05)。顺铂和RHL均能上调caspase-3、caspase-7和poly ADP-ribose polymerase(PARP)的切割片断蛋白表达,但两药联合后caspase-3、caspase-7和PARP的切割片断蛋白表达进一步增高(P<0.05),并显著下调Bcl-2蛋白的表达水平,上调Bax蛋白的表达水平,同时RHL还能降低顺铂上调的ERK蛋白磷酸化。结论 RHL能够通过抑制顺铂对ERK的激活、上调caspase-3、caspase-7和PARP的切割片断蛋白表达,增强顺铂对肺癌细胞增殖和凋亡诱导作用。
- 纪春梅甄永占范晓禹王志军蒋守芳朱丽华章广玲
- 关键词：顺铂肺癌联合用药
- 重组人p66Shc腺病毒抑制HeLa细胞增殖的机制研究被引量：1
- 2014年
- 目的探讨重组人p66Shc腺病毒(AdenoⅩ-p66Shc)对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用及机制。方法MTT法检测细胞活力,DCFH-DA荧光探针检测活性氧(ROS)生成;ELISA检测8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量;AnnexinⅤ-FITC/PI荧光染色检测细胞凋亡率;Western blot检测相关蛋白表达;免疫共沉淀检测p66Shc与p53之间相互作用。结果重组人p66Shc腺病毒呈剂量依赖性地抑制HeLa细胞增殖(P<0.05),而N-乙酰半胱氨酸能够阻断重组人p66Shc腺病毒的作用。p66Shc能引起细胞ROS水平显著上升(P<0.05),同时伴随8-OHdG含量的升高(P<0.05);p66Shc能引起p53蛋白和CyclinB1蛋白表达及p53磷酸化修饰(p-p53)显著升高(P<0.05),但免疫共沉淀实验结果显示p66Shc与p53并非直接结合,提示p66Shc通过其他信号分子间接调控p53的表达及活性。结论重组人p66Shc腺病毒通过使HeLa细胞ROS水平上升,引起DNA氧化损伤,从而诱导p53表达及其磷酸化修饰升高抑制HeLa细胞增殖。
- 杨晓姗林雅军魏洁胡刚徐蓉许晓东马桂蕾孙洪范
- 关键词：P66SHCHELA细胞活性氧P53
- 赖氨大黄酸和紫杉醇对肺癌细胞增殖的抑制作用和凋亡诱导作用被引量：2
- 2013年
- 目的:研究赖氨大黄酸(RHL)、紫杉醇单独和两者联合对人肺癌H460细胞增殖和凋亡的影响,阐明其作用机制。方法:选取处于对数生长期肺癌细胞株H460,随机分为对照组(不加药物)、紫杉醇组(1μmol.L-1紫杉醇)、RHL组(100μmol.L-1 RHL)和紫杉醇联合RHL组,并设空白组。采用MTT法和流式细胞术分别检测各组处理后48h的细胞增殖率和凋亡率;采用Western blotting方法检测凋亡相关蛋白和MEK/ERK蛋白的表达水平。结果:细胞培养48h后,联合用药组细胞增殖率显著低于对照组、紫杉醇组和RHL组(P<0.05),联合用药组细胞凋亡率显著高于对照组、紫杉醇组和RHL组(P<0.05),联合用药组caspase-3和poly ADP-ribose polymerase(PARP)的切割片段蛋白表达强度明显高于对照组、紫杉醇组和RHL组,联合用药组Bcl-2和NF-κB蛋白表达强度明显低于对照组、紫杉醇组和RHL组,同时RHL组紫杉醇上调的MEK和ERK蛋白磷酸化强度降低。结论:紫杉醇和RHL均可抑制肺癌H460细胞增殖,诱导细胞凋亡;RHL通过降低ERK活性、上调caspase-3和PARP的切割片段蛋白表达,增强紫杉醇抑制肺癌细胞增殖和凋亡诱导作用。
- 甄永占林雅军章广玲林小虎王梅梅李冉魏静波
- 关键词：紫杉醇肺癌细胞凋亡联合用药
- 赖氨大黄酸对快速老化小鼠SAMP 10肾组织COL1A1、COL3A1和COL4A1表达的影响被引量：4
- 2013年
- 目的研究赖氨大黄酸(rhein lysinate,RHL)对快速老化小鼠(senescence accelerated mouse prone 10,SAMP 10)肾组织Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)、Ⅲ型胶原α1链(COL3A1)和Ⅳ型胶原α1链(COL4A1)蛋白表达的影响。方法选取7月龄SAMP 10小鼠18只,并根据随机数字表分为空白对照组、低剂量RHL组(25 mg/kg)和高剂量RHL组(50 mg/kg),每组6只;另选抗快速老化小鼠(senescence accelerated mouse resistance 1,SAMR 1)6只作为青年对照,给药时间6个月。采用HE染色观察肾脏组织病理改变,Masson染色观察肾脏组织纤维化改变,Western blot方法检测肾组织COL1A1、COL3A1、COL4A1和NF-κB蛋白的表达。结果与SAMP 10空白对照组相比,25和50 mg/kg RHL组治疗后SAMP 10小鼠精神状态、活动度、毛色等方面较好;肾脏指数升高。HE染色显示SAMP 10空白对照组小鼠肾组织有节段性肾小球萎缩、硬化和明显的间质纤维化,SAMR 1组和RHL组小鼠则无肾小球萎缩、硬化和明显的间质纤维化。RHL能够抑制SAMP 10小鼠衰老过程中出现的肾组织COL1A1、COL3A1和NF-κB蛋白过度表达(P<0.05)。结论 RHL可通过抑制COL1A1、COL3A1和NF-κB蛋白过度表达,减轻衰老过程中SAMP 10小鼠肾组织纤维化程度,发挥肾脏保护作用。
- 甄永占胡刚章广玲魏静波李冉王梅梅林雅军
- 关键词：肾间质纤维化抗衰老
- 赖氨大黄酸对HeLa细胞周期的影响及其机制
- 2011年
- 目的探讨赖氨大黄酸对HeLa细胞周期的影响及其机制。方法 MTT法检测赖氨大黄酸对HeLa细胞增殖的影响;流式细胞技术检测活性氧水平和细胞周期变化;显微镜下观察HeLa细胞形态变化;Western blot法检测p53和p21蛋白表达。结果赖氨大黄酸剂量依赖性地抑制HeLa细胞增殖,IC50约为83μmol·L-1。随着赖氨大黄酸剂量的增加,HeLa细胞中活性氧水平增加,并出现S期和G2期阻滞,以及细胞空泡样变性。通过Western blot研究发现赖氨大黄酸处理后的p53蛋白磷酸化水平呈剂量依赖性地增加,同时下游周期相关蛋白p21表达水平也随之增加,而p53蛋白表达水平未出现显著地剂量依赖性变化。结论赖氨大黄酸通过增加HeLa细胞中活性氧水平,引起细胞周期相关蛋白p53的磷酸化水平和p21蛋白表达水平增加,引起HeLa细胞出现空泡样变性,并诱导S期和G2期阻滞。
- 林雅军甄永占魏洁胡刚
- 关键词：HELA细胞活性氧细胞周期
- 重组人KNDC1腺病毒表达载体的构建及其促HUVEC衰老作用被引量：5
- 2015年
- 目的构建人KNDC1腺病毒表达载体,观察其在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的表达及功能。方法扩增KNDC1基因并与腺病毒骨架载体进行体外重组连接,经筛选、测序确认后转染进HEK293A细胞进行包装;按p Adeno X试剂盒的步骤纯化重组腺病毒,通过终点稀释法测定病毒滴度;用p AdenoⅩ-KNDC1感染HUVEC,48 h后用Western blot检测KNDC1蛋白表达水平;用SA-β-gal染色检测细胞衰老情况。结果经测序确认目的基因KNDC1成功克隆入腺病毒载体中。转染HEK293A细胞后观察到细胞变圆、部分细胞漂浮的特征性病变效应,病毒滴度达到1×1011PFU。感染了p AdenoⅩ-KNDC1的HUVEC中KNDC1蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。随着p AdenoⅩ-KNDC1剂量的增加,衰老HUVEC数量增多。结论人KNDC1腺病毒表达载体构建成功并能促进HUVEC衰老。
- 李开济郝晓方章广玲魏静波魏洁林雅军甄永占
- 关键词：腺病毒同源重组脐静脉内皮细胞
- 赖氨藤黄酸对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制被引量：1
- 2015年
- 目的:研究赖氨藤黄酸(GAL)对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响并探讨其作用机制,为GAL抗乳腺癌的临床研究和应用提供理论依据。方法:选取处于对数生长期的MCF-7细胞,并随机分为空白对照组、不同剂量(0.25、0.50、1.00、2.00、4.00和8.00μmol·L-1)GAL组和不同剂量(0.25、0.50、1.00、2.00、4.00和8.00μmol·L-1)藤黄酸组,采用MTT法检测各组MCF-7细胞48h增殖活性。选取对数生长期的MCF-7细胞,2μmol·L-1 GAL作用MCF-7细胞不同时间(0、6、12、24、36、48和60h),采用MTT法检测作用不同时间后各组MCF-7细胞增殖活性。流式细胞术和Hoechst 33258染色检测各组MCF-7细胞24h时凋亡情况,采用Western blotting法检测各组MCF-7细胞24h时凋亡相关蛋白的表达水平。结果:细胞培养24h后,不同剂量GAL组MCF-7细胞存活率低于空白对照组(P<0.05),随剂量增加和作用时间延长细胞存活率下降(P<0.05)。流式细胞术和Hoechst 33258染色,与空白对照组比较,不同剂量GAL组MCF-7细胞凋亡率明显升高(P<0.05),且呈剂量依赖性。Western blotting检测,与空白对照组比较,不同剂量GAL组细胞沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而caspase-3切割片段蛋白的表达水平明显高于对照组(P<0.05)。结论:GAL通过抑制SIRT1蛋白表达水平和上调caspase-3切割片段蛋白的表达水平诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡。
- 魏洁李开济魏静波赵毓芳闫丰吕翠平甄永占
- 关键词：乳腺肿瘤细胞凋亡
- 赖氨大黄酸通过升高miRNA-451抑制肺癌A549细胞迁移被引量：6
- 2014年
- 目的研究赖氨大黄酸(rhein lysinate,RHL)对肺癌细胞株(A549)迁移的影响及miRNA-451在其中的作用。方法选取处于对数生长期的A549细胞株,并分为对照组、不同剂量(0、10、20、40、80、160μmol/L)的RHL组。采用MTT法检测各组细胞48 h增殖情况;细胞划痕实验和Transwell实验检测各组细胞48 h迁移情况;Real-time PCR检测各组细胞48 h miRNA-451和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)的转录水平;Western blot检测各组细胞48 h MMP-9蛋白水平变化。结果细胞培养48 h后,RHL处理组A549细胞增殖活性呈现明显剂量依赖性抑制。细胞划痕实验和Transwell实验均发现80μmol/L RHL能够抑制A549细胞迁移。同时80μmol/L以上剂量的RHL能够显著升高miR-451水平,降低MMP-9的转录水平(P<0.05)。Western blot检测结果也证实了80μmol/L以上剂量的RHL能够显著抑制MMP-9蛋白表达水平(P<0.05)。结论 RHL通过诱导miR-451的表达、抑制MMP-9的表达,从而抑制A549细胞迁移。
- 纪春梅甄永占骆广玲赵毓芳朱丽华
- 关键词：肺肿瘤细胞迁移基质金属蛋白酶-9
- 赖氨大黄酸对D-半乳糖致衰老模型小鼠的肾脏保护作用及其作用机制被引量：4
- 2015年
- 目的:研究赖氨大黄酸(RHL)对D-半乳糖衰老模型小鼠的抗衰老和肾脏保护作用,阐明其作用机制,为RHL预防衰老的研究提供依据。方法:通过腹腔注射D-半乳糖建立小鼠衰老模型,将小鼠随机分为对照组、衰老模型组和低、高剂量RHL组。除对照组外,其余各组小鼠每天腹部皮下注射D-半乳糖100mg·kg-1,持续8周,对照组小鼠每天皮下注射等量生理盐水,低和高剂量RHL组小鼠分别每天1次灌胃25和50mg·kg-1的RHL。观察各组小鼠一般状况,计算肾脏指数;检测血清和肾脏组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性;HE染色行肾脏组织病理学检查;Western blotting法检测肾脏衰老相关蛋白表达水平。结果:与对照组比较,衰老模型组小鼠肾脏指数降低(P<0.05),血清和肾脏组织中SOD和GSH-Px活性降低(P<0.05),MDA含量升高(P<0.05);与模型组比较,RHL组小鼠肾脏指数升高(P<0.05),血清和肾脏组织中SOD和GSH-Px活性升高(P<0.05),MDA含量下降(P<0.05)。肾脏病理组织学检查,与衰老模型组小鼠比较,低和高剂量RHL组小鼠肾脏组织中肾小管上皮细胞水肿减轻,且存在剂量依赖性。Western blotting法检测,与对照组比较,衰老模型组小鼠肾脏组织中沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白表达水平降低(P<0.05),P16和P21蛋白表达水平升高(P<0.05);与衰老模型组比较,低和高剂量RHL组小鼠肾脏组织中SIRT1蛋白表达水平升高(P<0.05),P16和P21蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:RHL通过抑制氧化应激、肾小管上皮细胞水肿和调控衰老相关基因的表达来发挥对衰老小鼠肾脏的保护作用。
- 魏洁李开济赵毓芳骆广玲魏静波闫丰吕翠平甄永占
- 关键词：衰老模型D-半乳糖
- 赖氨大黄酸减轻百草枯中毒小鼠心脏损伤被引量：2
- 2015年
- 目的观察赖氨大黄酸(RHL)对百草枯中毒小鼠心脏损伤的保护作用及其机制。方法小鼠随机分为对照组、百草枯模型组(腹腔注射百草枯建立活性氧自由基引起心脏损伤的小鼠模型)及RHL治疗组(造模前1周给予RHL(50 mg/kg)。用硫代巴比妥酸法检测心脏组织MDA含量,用联苯三酚自氧化法检测SOD活性,用NADPH偶联法检测GSH-Px活性。HE染色及DCFH-DA染色分别观察心脏病理改变及活性氧水平;Western blot检测心肌衰老相关基因的表达。结果与对照组相比,百草枯模型组小鼠心脏组织SOD和GSH-Px活性下降(P<0.05),MDA水平升高(P<0.05),RHL能减轻百草枯的作用(P<0.05);百草枯引起心肌结构破坏,心肌组织活性氧水平升高,RHL减轻上述变化(P<0.05)。百草枯能够降低SIRT1的表达,增加P53的乙酰化及P53和P66的表达。RHL减轻上述变化(P<0.05)。结论 RHL可以减轻百草枯中毒后所致的小鼠心脏损伤。
- 李开济郝晓方章广玲魏洁林雅军魏静波甄永占
- 关键词：百草枯心脏损伤活性氧自由基
