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脐带来源间充质干细胞的制备及其质量检定被引量：7: 2013年; 目的研究脐带来源间充质干细胞(UC-MSCs)的扩增工艺及质量检验方法,提出质量控制标准,为临床研究提供合格的干细胞产品。方法新鲜脐带去羊膜及血管,剪碎,组织块放入无菌培养皿,在培养箱进行脐带间充质干细胞培养、扩增。细胞培养至P3代,按照《干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则》(征求意见稿)进行干细胞质量的全面检定。检定内容包括无菌检测,支原体检测,人源特定病毒及猪源病毒检测,内毒素检测,细胞形态、细胞数及细胞活率检测,染色体核型分析,干细胞免疫表型检测,STR图谱分析,免疫抑制活性检测及分化能力检测。结果按照标准化流程对18根脐带进行了UC-MSCs的分离、纯化及培养,获得一致性较好的干细胞。通过对干细胞进行质量检定,很好地控制了干细胞的质量。干细胞活性在冻存前≥90%,冻存复苏后≥80%;该工艺生产的脐带MSC产品无细菌、人源特定病毒及猪细小病毒、支原体等微生物污染,内毒素检测阴性;干细胞免疫表型检测CD90、CD105呈阳性,阳性率不低于95%;CD31、CD34、HLA-DR呈阴性,阳性率不高于2%;染色体核型分析为46XX或46XY,无缺失及插入突变;STR图谱分析证实干细胞为单一人来源;UC-MSCs具有成脂及成骨分化潜能;UC-MSCs能抑制异源淋巴细胞增殖。结论按本工艺及标准制备的UC-MSCs符合《干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则》的质量控制标准,为同类干细胞制备及检定过程标准化提供了实验依据。; 孙瑞婷陈瑶瑶王华靳继德汪劲松刘冬梅王立生吴祖泽; 关键词：间质干细胞细胞表型分化能力染色体核型分析 STR

靶向鞘氨醇激酶信号通路:一种治疗血液肿瘤的新策略（英文）被引量：2: 2015年; 1-磷酸鞘氨醇(S1P)是重要的磷脂代谢产物并介导广泛的生物学效应,包括细胞增殖、存活和迁移等。S1P在细胞内由鞘氨醇激酶(SphK)使鞘氨醇磷酸化而形成。S1P代谢的异常调节已经成为血液肿瘤发生发展的重要环节。利用抑制剂、激动剂及抗体等靶向SphK-S1P信号通路(包括S1P受体及参与合成和降解的关键酶)已经成为血液肿瘤的新治疗策略。本文综述了SphK-S1P的重要生理作用,重点阐述了其异常调节机制及其靶向治疗在血液肿瘤中病理生理过程中的重要性。首先对磷脂代谢和信号调控进行了概述,然后总结了S1P的合成、代谢、病理和生理作用、异常调节机制以及在血液肿瘤中靶向策略。另外,还讨论了靶向SphK信号通路在新药研发中的前景和重要性。; 王立生王华; 关键词：鞘氨醇激酶 1-磷酸鞘氨醇血液肿瘤靶向治疗

携带免疫基因的前列腺癌特异性溶瘤腺病毒制备及功能验证: 2014年; 目的制备前列腺癌特异性免疫溶瘤双功能腺病毒Ad-PL-PPT-E1A,评价其体外溶瘤和免疫激活功能。方法以LNCaP细胞和Jurkat细胞的cDNA为模板,采用普通PCR和巢式PCR分别扩增获得前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)基因、CD40L-N基因和CD40L-C基因;并采用重叠PCR方法将PSA、Linker、CD40L-N和CD40L-C基因依次连接并扩增获得融合蛋白基因PSA-IZ-CD40L(PL)。采用以Adeasy系统为基础的溶瘤腺病毒构建体系,构建并制备携带PL的溶瘤重组腺病毒Ad-PL-PPT-E1A。以不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)的溶瘤腺病毒Ad-PL-PPT-E1A感染PC3M细胞后不同时间点,流式细胞术检测细胞凋亡情况;50 MOI的Ad-PL-PPTE1A感染PC3M细胞,于48 h收集其裂解液,并将其作用于正常人外周血单个核细胞,CCK8检测细胞增殖能力。结果 PCR成功扩增并连接获得融合蛋白基因PL,构建并制备了携带PL基因的溶瘤腺病毒Ad-PL-PPT-E1A。RTPCR和Western印迹检测结果显示,Ad-PL-PPT-E1A可在PC3M细胞中高效表达E1A和PL蛋白。将Ad-PL-PPTE1A感染PC3M细胞后,可见明显的细胞病变;同时,流式细胞检测结果显示,当感染滴度达到200 MOI时,48 h的凋亡率达到70.67%±2.98%。CCK8结果显示,Ad-PL-PPT-E1A感染后,可恢复PC3M细胞裂解液对人外周血单个核细胞的抑制作用。结论成功制备和鉴定了前列腺癌特异性免疫溶瘤双功能腺病毒Ad-PL-PPT-E1A,并在体外证实了其具有溶瘤和免疫的双重功能。; 薛淑雅杨月峰王华肖凤君孙慧燕张群伟王秀冬王立生; 关键词：前列腺癌溶瘤腺病毒免疫基因

Ad-HGF基因修饰的胎盘间充质干细胞治疗兔肢体缺血的实验研究被引量：1: 2016年; 目的研究重组腺病毒介导肝细胞生长因子(adenoviral vector mediated human hepatocyte growth factor,AdHGF)修饰的胎盘源间充质干细胞(placenta-derived mesenchymal stem cells,PMSC)在兔肢体缺血模型中促新生血管生成的作用。方法无菌取足月产妇胎盘胎儿面中心区域胎盘组织,胶原酶消化法分离干细胞,体外培养传代,感染Ad-HGF 48 h后收集细胞用于治疗兔肢体缺血实验。左侧治疗组后肢缺血肌肉组织内多点注射总细胞数5×106/ml Ad-HGF修饰的PMSC,右侧对照组后肢缺血肌肉组织内注射生理盐水。结果治疗后第14天腹主动脉穿刺行数字减影血管造影(digital subtraction angiography,DSA)检查,可见左侧肢体缺血治疗后微血管生成数明显多于未治疗右侧肢体,血管形成能力明显增强。苏木精伊红染色法(HE)后置光镜下观察显示,治疗组毛细血管密度明显大于未治疗组(P<0.05)。实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,q PCR)检测后肢肌肉组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)、HGF的表达明显升高(P<0.05)。结论经Ad-HGF基因修饰的PMSC能明显促进血管新生,加快局部缺血组织血流循环的重建,是治疗肢体慢性缺血的有效手段。; 肖凤君黄晓东王少霞王华杨月峰李沛雨王立生; 关键词：间充质干细胞 AD-HGF 肢体缺血成纤维细胞生长因子肝细胞生长因子

间充质干细胞治疗放射性肠损伤研究进展被引量：6: 2013年; 放射性肠损伤是急性放射病的重要组织损伤类型,也是腹部肿瘤放疗引起的重要并发症之一。目前,对于放射性肠损伤尚无有效治疗措施。研发新的防治策略,对于改善肿瘤患者预后和生活质量具有重要意义。间充质干细胞是一种成体多能干细胞,实验药理学研究表明,间充质干细胞能够有效治疗放射性肠损伤,特别是基因修饰的间充质干细胞因具有干细胞治疗和细胞生长因子治疗的双重优势,并具有协同作用,这为急性放射性肠损伤的救治提供了新的途径和手段。本文对间充质干细胞对放射性肠损伤的治疗作用及其机制的研究进展进行简要综述。; 孙瑞婷王华吴祖泽; 关键词：间充质干细胞生物疗法

靶向型辅助腺病毒的构建及其功能研究被引量：1: 2014年; 目的构建一种新型辅助腺病毒,并用于靶向型第三代腺病毒载体的制备,提高其对造血细胞的感染效率。方法采用重叠PCR的方法合成含有不完全包装信号序列A1-A4和loxP序列的DNA片段SynES,替换穿梭质粒pShuttle中原有的包装信号序列,得到穿梭质粒pShuttle-SynES;将所得穿梭质粒与骨架质粒Ad5/F11p在大肠杆菌BJ5183中同源重组,获得重组腺病毒质粒载体pAd5/F11p-HV,将其转染293细胞包装重组腺病毒Ad5/F11p-HV。参照第三代腺病毒包装策略,利用Ad5/F11p-HV包装获得携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的第三代腺病毒HD-Ad5/F11p-GFP;将其以不同的感染强度感染人白血病细胞系K562、U937、Jurkat和人脐带血CD34+细胞后,采用荧光显微镜和流式细胞术检测GFP的表达。结果采用DAN片段SynES替换穿梭质粒pShuttle上的包装信号,获得新的穿梭质粒pShuttle-SynES;进一步构建获得重组腺病毒质粒pAd5/F11p-HV,并制备了辅助腺病毒Ad5/F11p-HV。采用该辅助腺病毒包装pC4HSU-GFP,获得了第三代腺病毒HD-Ad5/F11p-GFP;CsCl密度梯度离心分离HD-Ad5/F11p-GFP和Ad5/F11p-HV,获得了高质量的HD-Ad5/F11p-GFP。与对照病毒HD-H14-GFP相比,HD-Ad5/F11p-GFP可明显提高对人白血病细胞U937、Jurkat和人脐带来源CD34+细胞的感染效率。结论设计并构建了一种靶向性辅助腺病毒,并以此为基础成功制备了对造血细胞高效感染的第三代重组腺病毒。; 杨月峰李泽良鲁茁壮王华肖凤君张群伟孙慧燕王立生; 关键词：辅助病毒白血病

SIRT1在血管相关性疾病中的研究进展被引量：2: 2015年; 沉默信息调节因子2相关酶类1(silent mating type information regulation 2 homolog-1,SIRT1)是一种依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide-adenine dinucleotide,NAD)的去乙酰化酶,其可对组蛋白和非组蛋白发挥去乙酰化作用从而调节能量代谢、细胞衰老及凋亡等众多生命过程。在多种血管相关性疾病中,SIRT1通过对相关因子去乙酰化增加细胞能量供应、减少细胞凋亡、减轻炎症反应、抵抗氧化应激、改善血管内皮细胞功能,从而在血管相关性疾病中发挥重要作用。该文旨在对SIRT1在缺血性脑卒中、动脉粥样硬化及肿瘤这3种常见血管相关性疾病中的作用的研究进展及相应的信号通路进行综述。; 高瞻哈小琴王立生; 关键词：缺血性脑卒中动脉粥样硬化肿瘤

凝血酶促进骨髓间充质干细胞增殖的作用与机制被引量：1: 2014年; 本研究旨在探讨凝血酶促进人间充质干细胞(MSC)增殖及其机制。在无血清基础培养液中添加不同浓度凝血酶,用MTT实验检测人骨髓MSC增殖状态,PCR检测细胞蛋白酶活化受体(PAR)和c-MYC表达,Western blot分析信号通路的变化,并通过特异性抑制剂阻断凝血酶受体和信号通路,验证凝血酶作用的机制。结果显示,凝血酶可显著刺激MSC增殖,效应呈浓度依赖性;当凝血酶浓度为0.5 U/ml时,细胞增殖明显提高,浓度为8 U/ml时,刺激活性达峰值(P<0.01);PCR结果表明,MSC表达PAR-1和PAR2;当PAR1受体被阻断后凝血酶的促增殖效应被抑制,而PAR2受体被阻断后凝血酶对增殖结果影响不明显;凝血酶刺激MSC后,信号分子AKT发生磷酸化,c-MYC基因表达上调;当AKT信号通路被抑制后,c-MYC表达被抑制,凝血酶刺激细胞增殖效应被明显抑制。结论:凝血酶可通过PAR1受体介导的AKT信号通路的活化,上调MYC基因的表达,从而促进间充质干细胞的增殖。; 陈津马予洁王姿林珊珊肖凤君王华王立生郭子宽; 关键词：间充质干细胞凝血酶细胞增殖蛋白酶活化受体

重组腺病毒载体靶向性策略的研究进展被引量：3: 2014年; 近年来，研究者致力于突破基因治疗的瓶颈，极大推动了基因治疗的发展。载体系统是基因治疗的基础，截止2013年7月，在“Gene Therapy Clinical Trial Worldwide”网站登记注册的基因治疗方案中，重组腺病毒载体占476项（23.5%）。在6个亚群（A-F）、50多种血清型的腺病毒载体中，5型腺病毒（adenovirus type 5，Ad5）可特异性识别并结合多种正常组织高表达的柯萨奇病毒-腺病毒受体（coxsackie-adenovirus receptor，CAR）从而进入细胞发挥作用，基因转导效率高，因此，Ad5是目前应用最广泛的腺病毒载体。; 薛淑雅杨月峰; 关键词：重组腺病毒载体 RECEPTOR 基因治疗

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国家高技术研究发展计划(2012AA020807)

文献类型

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