国家科技支撑计划(2006BAK02A21)
- 作品数：37 被引量：151H指数：7
- 相关作者：张改平邓瑞广刘庆堂王自良柴书军更多>>
- 相关机构：河南省农业科学院河南科技学院河南科技大学更多>>
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- 相关领域：农业科学医药卫生轻工技术与工程生物学更多>>
- 二氟沙星单克隆抗体的研制及其免疫学特性的鉴定被引量：4
- 2008年
- 采用改进的碳二亚胺法,将半抗原二氟沙星(DIF)与载体牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(O-VA)偶联,制备得到二氟沙星全抗原DIF-BSA和DIF-OVA。采用紫外(UV),凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定;用BSA-DIF免疫BALB/C小鼠,间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠;应用杂交瘤技术制备二氟沙星单克隆抗体(DIF mAb),并对其效价、亲和力和特异性等进行鉴定。结果表明,BSA与DIF偶联成功,分子结合比为1:4.7,筛选出1H10、2F12、4D8共3株敏感特异的杂交瘤细胞,间接ELISA效价细胞培养上清分别为1:5.12×102、1:3.2×101、1:2.56×102,腹水效价分别为1:2.56×105、1:1.28×105、1:6.4×104。同种亚型分别为IgG1、IgG1、IgG2a,亲和常数(Ka)分别为2.94×1010L/mol、1.72×1010L/mol和1.35×1010L/mol。亲和力最高的1H10对DIF的IC50为2.2ng/ml,单抗与其他氟喹诺酮类药物和磺胺类药物无交叉反应。通过试验获得高效价、敏感、特异的mAb,适用于动物性食品中DIF的残留检测的免疫学试验。
- 李彬彬邓瑞广侯玉泽张改平王自良赵东刘庆堂柴书军
- 关键词：二氟沙星人工免疫原单克隆抗体免疫学特性
- 不同蛋白原料对生长鹅表观代谢率和肉品质的影响
- 2011年
- 在相同营养水平条件下,研究日粮中等比例的血粉、膨化血粉以及鱼粉对生长鹅营养物质表观代谢率和肉品质的影响,选用300羽健康活泼的28日龄豁眼鹅,随机分为3组:3%血粉组、3%膨化血粉组和3%鱼粉组,每组5个重复,每个重复20羽鹅,试验时间28 d。结果表明,与血粉组相比,膨化血粉组粗蛋白质的表观代谢率、蛋白质及12种氨基酸在腿肌中的沉积量显著提高(P<0.05),但与鱼粉组差异不显著(P>0.05);粗脂肪及5种氨基酸在腿肌中的沉积量,鱼粉组显著高于膨化血粉组及血粉组(P<0.05)。说明膨化血粉的饲喂效果显著好于血粉,但与鱼粉相比略显不足。
- 张海棠刘长忠崔建勋李国明王自良王淑云
- 关键词：膨化血粉生长鹅表观代谢率肉品质
- 赭曲霉毒素A人工抗原的合成与鉴定被引量：12
- 2011年
- 采用N-羟琥珀酰亚胺酯(N-hydroxysuccinimide NHS)法将赭曲霉毒素A(OTA)与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备了免疫抗原OTA-BSA,采用1-乙基-3(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)法将赭曲霉毒素A(OTA)与卵清白蛋白(OVA)偶联制备了包被抗原OTA-OVA。紫外扫描和SDS-PAGE凝胶电泳结果初步表明偶联成功。用OTA-BSA分10μg/只和50μg/只两个剂量分别免疫BALB/C小鼠,获得了高效价的特异性多克隆抗血清,效价可达1∶104,抑制效价达14.7ng,证明偶联成功,并显示低剂量免疫可以提高小鼠pAb的敏感性。本研究为OTA单抗的制备及其免疫学分析方法的建立奠定了基础。
- 孙亚宁胡骁飞邓瑞广职爱民刘庆堂柴书军王磊宋幸辉侯玉泽张改平
- 关键词：赭曲霉毒素AELISA
- 恩诺沙星单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其免疫学特性被引量：5
- 2008年
- 将恩诺沙星(ENR)偶联于载体蛋白BSA,形成完全抗原(BSA-ENR)并免疫BALB/c小鼠,应用细胞融合技术制备分泌抗恩诺沙星的杂交瘤细胞株,用体内诱生腹水法生产ENR单克隆抗体。结果筛选出4G1-B3,4G1-G1和4G1-B9 3株敏感特异的杂交瘤。3株单抗对ENR的半数抑制浓度(IC50)分别为1.04 ng/mL,2.44 ng/mL,4.24 ng/mL。4G1-B3与环丙沙星有0.02%的交叉反应,与其他竞争物的交叉反应率均小于0.01%;4G1-G1和4G1-B9与其他竞争物的交叉反应率均小于0.01%。
- 赵银丽滕蔓邓瑞广柴书军刘庆堂张改平
- 关键词：恩诺沙星杂交瘤单克隆抗体免疫学特性
- H5亚型AIV HA1基因与鸡IL-18基因共表达载体的构建及其表达被引量：3
- 2009年
- 参考GenBank上发表的H5亚型禽流感(AIV)血凝素(HA)基因序列及鸡白细胞介素18成熟蛋白(mChIL-18)的cDNA基因序列,分别设计了HA1和mChIL-18基因的2对引物。然后分别以pMD18-T-HA质粒和pGEX-mChIL-18质粒为模板,扩增出了H5亚型AIV的HA1基因和mChIL-18的cDNA片段。再以杆状病毒pFast-BacTMdual为载体,将H5亚型AIV HA中的HA1基因和mChIL-18基因分别插入到双表达载体pFastBacTMdu-al的p10启动子(PP10)和多角体蛋白启动子(PPH)的下游,构建携带HA1基因和mChIL-18基因的重组pFastBacTMdual-HA1-mChIL-18真核表达质粒。最后将构建的真核表达质粒转座入大肠杆菌DH10Bac,并利用昆虫细胞进行转染。这个重组载体的构建为考察mChIL-18作为免疫增强剂的作用及下一步AIV疫苗的研究奠定了坚实的基础。
- 孔娜田夫林兰邹然杨林冯涛梁成珠赵宏坤
- 关键词：禽流感病毒HA1基因真核表达
- 恩诺沙星多克隆抗体制备及阻断ELISA检测方法的研究被引量：11
- 2008年
- 采用混合酸酐法将恩诺沙星（ENR）分别与牛血清白蛋白（BSA）和卵清白蛋白（OVA）偶联制备免疫抗原（ENR—BSA）和包被抗原（ENR—OVA）．将免疫原免疫家兔，制备多克隆抗体（ENRpAb），应用ENRpAb研制ENR残留阻断ELISA快速检测方法，并对其灵敏度、半数抑制浓度IC50、特异性、准确度进行测定．结果阻断ELISA的线性检测范围为1～205ng／mL，灵敏度1ng／mL，半数抑制浓度（IC50）为11ng／mL，与其他化合物的交叉反应率（CR％）均〈0．1％，鸡肉样的平均添加回收率分别为87．35％，平均变异系数均〈10％．本检测方法具有快速、敏感、特异、简便等特点，适合ENR残留快速检测的推广应用．
- 赵银丽张改平邓瑞广柴书军滕蔓
- 关键词：恩诺沙星多克隆抗体阻断ELISA
- 恩诺沙星完全抗原的制备及免疫抗体的检测被引量：3
- 2008年
- 赵银丽王自良柴书军滕蔓刘庆堂张改平
- 关键词：免疫学检测免疫抗体恩诺沙星药物残留量动物体内支原体感染
- 恩诺沙星单克隆抗体的制备及ciELISA试剂盒的研制被引量：9
- 2009年
- 【目的】研制快速、灵敏、特异的恩诺沙星残留检测ciELISA试剂盒（ENR—Kit），为动物源性食品中恩诺沙星（ENR）残留的快速免疫学检测奠定基础。【方法】通过细胞融合技术制备恩诺沙星单克隆抗体（ENRmAb）杂交瘤细胞株，体内诱生腹水法生产ENR单抗，应用ENRmAb研制ENR残留间接竞争ELISA（ciELIsA）快速检测试剂盒，并对其灵敏度、半数抑制浓度（IC50）、特异性、准确度和基质效应性进行检测。【结果】筛选出2株杂交瘤细胞，其单抗亚类均为IgG1亚型。4G1-B3杂交瘤细胞株的ENRmAb间接ELISA效价为1：1.024×10^5，亲和常数（Ka）为9×10^10L／moL。ENR—Kit的线性检测范围为0．05～48．75μg／L，灵敏度0．05μg／L，半数抑制浓度（IC50）为1．31μg／L，与环丙沙星的交叉反应率（CR）为0．02％，与其他化合物的交叉反应率（CR）均〈0．01％。ENR-Kit对牛奶样、鱼肉样和鸡肉样中ENR的平均添加回收率分别为96．49％，86．95％和84．13％，平均变异系数均〈10％，不同基质对ENR—Kit检测结果影响小。【结论】研制的ENR—Kit具有快速、敏感、特异、简便等特点，适合ENR残留快速检测的推广应用。
- 赵银丽王建华王自良滕蔓刘庆堂邓瑞广范国英张改平
- 关键词：恩诺沙星杂交瘤细胞单克隆抗体CIELISA快速检测试剂盒
- 喹乙醇人工抗原的合成与鉴定被引量：5
- 2010年
- 采用琥珀酸酐法合成喹乙醇半琥珀酸酯(OLA-HS),以质谱法对其进行鉴定;活化酯法合成全抗原OLA-BSA、OLA-OVA,以紫外(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定之;用OLA-BSA免疫BALB/c小鼠,间接ELISA测定多抗血清效价,阻断ELISA鉴定其敏感性、特异性。紫外扫描测得OLA-BSA、OLA-OVA中OLA-HS和BSA、OVA的分子结合比分别为17.1∶1和12.4∶1;3号小鼠抗血清的效价最高,对OLA的IC50为58.923 ng/mL,与卡巴氧的交叉反应率为1.841%,与其他药物无交叉反应。通过系列ELISA鉴定,获得高价、敏感、特异的多克隆抗体(pAb),为OLA残留免疫学检测方法的建立奠定基础。
- 宋春美高爱中邓瑞广职爱民郅玉宝侯玉泽张改平
- 关键词：喹乙醇人工抗原
- H9N2亚型禽流感病毒非结构蛋白基因NS1的表达及其单克隆抗体的研制被引量：2
- 2011年
- 利用RT-PCR技术扩增获得了H9N2亚型禽流感病毒的NS1基因,ORF长度为654bp。成功构建了重组表达载体pET-NS1,将其转化BL21,并诱导表达出了相对分子质量大约为28 000的NS1融合蛋白。NS1融合蛋白经His trap Hp Kit柱子纯化,采用缓慢稀释和透析相结合的方法复性H9N2-NS1蛋白,获得纯度较高的NS1蛋白,以纯化的NS1免疫BALB/c小鼠,间接接ELISA方法筛选阳性克隆,对获得的抗H9N2-NS1单克隆抗体(McAbs)进行特异性分析;建立了2株稳定分泌抗H9N2-NS1McAbs的杂交瘤细胞系6B9和6C2;腹水的特异性鉴定结果表明,2株McAbs能特异性的识别H9N2-NS1,而与H5N2亚型AIV、H9N2亚型AIV、NDV、IBV、IBDV、ILTV、EDS76均不发生反应。Western blotting鉴定表明,所获得的单抗只与NSl蛋白条带反应。亚类显示,6B9为IgG1,6C2为IgG2b。结果表明,2株抗H9N2-NS1McAbs的制备对H9N2亚型禽流感病毒检测试剂盒的研制以及该病的防治有重要意义。另外,NSl蛋白单抗的成功研制为进一步研究NSl蛋白的结构、功能与细胞的相互作用机制及AI遗传变异规律奠定了一定的基础。
- 杨霞陈少渠李建丽王川庆王泽霖
- 关键词：H9N2亚型NS1基因单克隆抗体
