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响应面法优化阿维菌素B_(1a)生产菌株复合发酵培养基被引量：3: 2013年; 以棉籽饼粉替代酵母粉,采用响应面法优化阿维链霉菌Streptomyces avermitilis生产菌株的工业复合发酵培养基。首先采用Plackett-Burman设计筛选出玉米淀粉、棉籽饼粉和豆粕粉3个重要影响因子,并利用响应面中心组合设计进一步优化,得阿维菌素B1a复合发酵培养基的最佳配方:玉米淀粉14.22%,棉籽饼粉1.19%,豆粕粉2.67%,钼酸钠0.002 2%,氯化钴0.02%,硫酸锰0.000 2%,硫酸铵0.05%。在上述条件下,阿维菌素B1a摇瓶发酵效价为5 235 IU/ml,比优化前(4 580 IU/ml)提高了14.3%。; 梁剑光储消和储炬王永红; 关键词：阿维菌素 PLACKETT-BURMAN设计响应面法阿维链霉菌发酵

4″-异戊酰基转移酶基因重组质粒构建及其异源表达被引量：1: 2012年; 目的:通过构建重组质粒,异源表达4″-异戊酰基转移酶基因(4″-isovaleyltrasferase gene,ist)生产螺旋霉素。方法:在螺旋霉素的4″位加上异戊酰基侧链从而获得基因药物必特螺旋霉素基因。结果:研究表明acyB2基因是ist的正调控基因,ist基因与acyB2基因构建的ist-acyB2共表达质粒不能在变铅青链霉菌TK24中表达。启动区点突变的回复表明770bp到780bp之间有一碱基由原来的A回复成G。结论:经测序研究后发现在ist的启动区产生了一个点突变,拟回复此突变之后重新构建新的ist-acyB2载体,可用于检测ist基因在异源宿主中的表达情况。; 肖祥李大荣梁剑光赫卫清; 关键词：必特螺旋霉素异源表达

盐霉素产生菌原生质体的制备与再生被引量：5: 2014年; 为获得盐霉素产生菌的原生质体制备与再生的最佳条件,本文考察了影响盐霉素产生菌原生质体制备与再生的各种因素。结果表明,盐霉素产生菌的原生质体制备与再生的最佳条件为:菌丝体培养基选择为R2YE,一级菌丝体最佳培养时间为22h,二级菌丝体最佳培养时间为18h,最佳蔗糖的添加量为100g/L,最佳甘氨酸质量浓度为5g/L,菌丝体在酶解前要经玻璃珠打碎,最佳溶菌酶质量浓度为4g/L,最佳酶解温度为33℃,最佳酶解时间为60min。原生质体制备与再生条件经优化后,盐霉素产生菌的原生质体释放率可达95%,原生质体再生率可达17%。较高的原生质本制备率与再生率使得利用原生质体技术进行微生物菌种选育成为可能,同时,这种成熟的原生质体制备与再生工艺,确保了经原生质体诱变育种后发生基因突变的遗传个体绝大部分都是纯合体,从而避免了高产性状经传代后发生性状回复的现象,为盐霉素工业生产菌种的选育工作奠定了基础。; 贾永峰梁剑光王永红郝玉有储炬; 关键词：盐霉素白色链霉菌原生质体制备原生质体再生

原生质体紫外诱变高通量选育盐霉素高产菌被引量：2: 2013年; 以白色链霉菌(Streptomyces albus)S-610为出发菌株,利用溶菌酶水解菌丝体细胞壁获得原生质体,然后进行紫外诱变,并通过高通量筛选再生突变株。结果显示,当UV照射原生质体20 s时,细胞正突变率最大为24.5%,此时致死率为86.4%。经高通量筛选和摇瓶验证,最终筛得3株遗传稳定的高产菌S-612、S-620和S-622,产盐霉素能力较出发菌株S-610分别提高了57.6%、45.5%和69.7%。; 贾永峰梁剑光王永红郝玉有储炬; 关键词：盐霉素白色链霉菌原生质体技术高通量筛选

盐霉素高产菌株的筛选研究被引量：4: 2015年; 目的优化高通量筛选盐霉素高产菌株流程,高通量筛选出具有遗传稳定性的产盐霉素高产菌株。方法以核糖体工程理论为基础,常压室温等离子体(atmospheric and room temperature plasma,ARTP)及高通量筛选技术(high-throughput screening,HTS)对产盐霉素的白色链霉菌(Streptomyces albus)S12诱变筛选,并以琼脂块扩散法为基础建立一种快速检测盐霉素的方法应用于高通量筛选过程初筛。结果获得具有氯霉素和四环素双重抗性的高产菌株Tet30Chl25。摇瓶发酵实验结果表明:突变株Tet30Chl25盐霉素效价由初始菌株的16306U/m L提高到34712U/m L,提高了112%,且遗传稳定性良好。同时建立一种快速检测盐霉素的方法——琼脂块扩散法并应用于高通量筛选过程初筛中,缩短筛选周期12d,优化了筛选流程。结论首次综合运用核糖体工程推理选育技术、常压室温等离子体(atmospheric and room temperature plasma,ARTP)及高通量筛选技术(highthroughput screening,HTS)对产盐霉素的白色链霉菌(S.albus)诱变筛选,是很好的菌种选育策略,适合工业菌种的选育。; 胡莉莉梁剑光陈中兵郭美锦储炬庄英萍张嗣良; 关键词：盐霉素

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江苏省高校自然科学研究项目(11KJB180001)