国家自然科学基金(30571631)
- 作品数：11 被引量：89H指数：6
- 相关作者：沈继龙罗庆礼储德勇罗飞郑美娟更多>>
- 相关机构：安徽医科大学安徽医科大学第一附属医院蚌埠医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HBV感染对日本血吸虫病患者肝纤维化的影响及Th1/Th2型细胞因子水平的变化被引量：9
- 2007年
- 目的评估慢性日本血吸虫病患者血清中 Th1型[γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]和 Th2型[白细胞介素(IL)-10、IL-13)]细胞因子水平,探讨晚期肝纤维化易感性与细胞因子水平的关系。方法358例晚期血吸虫病患者,采用 B 超对肝纤维化程度进行分级。随机选取HBsAg 阴性,早期肝纤维化患者39例,晚期肝纤维化患者29例。检测患者血清 IL-10、IL-13、IFN-γ、TNF-α的水平。结果358例患者 HBsAg 阳性率高达23.2%(83/358)。血吸虫病患者合并乙型肝炎感染较未感染者、晚期肝纤维化患者平均发病年龄并未提前,且构成比无明显差异(X^2=0.427,P=0.513)。晚期肝纤维化患者血清 IL-10水平[4.20(1.43～52.07)ng/L]高于早期肝纤维化患者[1.60(1.30～12.14)ng/L,z=-3.907,P<0.01];血清 IL-13水平[21.37(0.56～61.37)ng/L]显-著高于早期肝纤维化患者[12.94(3.37～26.99)ng/L,z=4.653,P<0.01];血清IFN-γ水平[3.12(1.38～66.14)ng/L]与早期肝纤维化患者[5.87(1.33～216.33)ng/L]比较差异无统计学意义(Z=-1.067,P>0.05);血清 TNF-α水平[2.48(0.79～19.86)ng/L]与早期肝纤维化患者血清TNF-α水平[2.28(0.67～15.72)ng/L]差异无统计学意义(Z=-0.112,P>0.05)。结论晚期血吸虫病患者中乙肝感染率高于全国平均水平。晚期肝纤维化的患者血清存在着高水平的 IL-13。
- 贾中伟储德勇王维罗庆礼沈继龙
- 关键词：细胞因子类血吸虫
- 日本血吸虫信号蛋白14-3-3在毕赤酵母菌中的分泌表达及其抗原性分析被引量：6
- 2007年
- 目的在毕赤酵母菌(Pichia pastoris)表达系统中表达日本血吸虫信号蛋白14-3-3(Sj14-3-3),并与原核表达rSj14-3-3比较其抗原性。方法以重组质粒pET28a-rSj14-3-3为模板,PCR扩增Sj14-3-3基因,将特异片段连接到pMD18-T载体,DNA序列分析后,亚克隆目的片段Sj14-3-3至酵母菌分泌表达载体pPICZαB。测序正确后,重组质粒经电转化转染至毕赤酵母菌X-33菌株,经抗生素Zeocin筛选得到高拷贝转化子。经甲醇诱导表达,取诱导上清进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blotting)分析。用间接ELISA法比较毕赤酵母菌表达的rSj14-3-3和原核表达rSj14-3-3检测血吸虫病患者血清抗体的特异性和敏感性。结果目的基因已在酵母菌基因组中得到整合,PCR扩增得到约1 300 bp的片段。经甲醇诱导,Sj14-3-3表达并分泌到培养上清中。表达产物经SDS-PAGE测定为Mr 35 000。Western blotting结果显示,Mr 35 000蛋白可被Sj14-3-3单克隆抗体识别,表明该真核表达产物具有免疫反应性。间接ELISA检测结果表明,该重组蛋白检测36份急性血吸虫病患者血清rSj14-3-3抗体,阳性率为81%。与12份华支睪吸虫感染者血清未见交叉反应,32份健康人血清假阳性反应率为9.3%。以原核表达的rSj14-3-3为抗原,间接ELISA检测,36份急性血吸虫病患者血清的rSj14-3-3,抗体阳性率为88.9%;与12份华支睪吸虫感染者的交叉反应率为16.7%,32份健康人血清假阳性反应率为12.5%,其差异均无统计学意义(P>0.05)。结论在毕赤酵母菌中成功表达了Sj14-3-3,培养上清中产物丰度较高,且免疫反应性良好。
- 郑美娟李敏王志成罗飞罗庆礼储德勇李丛磊沈继龙
- 关键词：日本血吸虫信号蛋白14-3-3毕赤酵母菌真核表达
- TH1／TH2免疫应答与血吸虫性纤维化被引量：4
- 2009年
- 李小月沈继龙
- 关键词：TH1/TH2免疫应答肝星状细胞活化肝纤维化形成TH1/TH2失衡TH1类细胞因子TH2类细胞因子
- 血吸虫感染对超敏性疾病与自身免疫性疾病的调控作用被引量：1
- 2007年
- 近年来，与发展中国家相比，超敏反应性疾病与自身免疫性疾病的发病率在发达国家较高，并有上升趋势。随着卫生假说（hygiene hypothesis）的提出，许多学者进行了相关研究来试图解释这个假说。一些学者在研究血吸虫感染与超敏反应性疾病及自身免疫性疾病的关系时发现了相关机制，并促使了对该假说的进一步研究。
- 余轶婧沈继龙
- 关键词：自身免疫性疾病血吸虫感染超敏反应性疾病超敏性卫生假说
- TGF-β1与IL-13在血吸虫病肝纤维化细胞信号转导中的作用被引量：13
- 2009年
- 肝纤维化是由于胶原纤维的产生和分解失衡,肝组织细胞外基质(ECM)过度沉积的结果。研究表明,转化生长因子β1(TGF-β1)、替代激活的巨噬细胞(aaM)和白细胞介素-13(IL-13)在纤维化过程中起关键作用。其中TGF-β1和IL-13为近年来的研究热点,前者通过肝星状细胞(HSC)的TGF-β1-Smads细胞信号转导通路起促进作用,而后者通过JAK-STAT6信号途径促纤维化,作用似乎更加关键。此外,替代激活的巨噬细胞为TGF-β1的重要来源,其本身又受IL-13刺激。因此,本文就IL-13、TGF-β1与血吸虫病肝纤维化细胞信号传导进行综述,以探讨血吸虫病肝纤维化的新药作用靶点。
- 李静王维沈继龙
- 关键词：肝纤维化IL-13TGF-Β1信号转导
- 日本血吸虫谷胱甘肽-S-转移酶在虫卵阶段的定位被引量：19
- 2007年
- 目的探讨谷胱甘肽-S-转移酶(Sj26GST)在虫卵阶段的表达、定位和重组蛋白(rSj26GST)的免疫诊断价值。方法从感染日本血吸虫尾蚴6周的兔肝脏中分离虫卵,分别用RT-PCR和免疫印迹(Western blotting)法检测Sj26GST基因在虫卵阶段的转录和翻译;同时用兔肝做免疫组化观察Sj26GST在虫卵内的分布。利用纯化的rSj26GST和日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA),采用间接ELISA法检测急、慢性血吸虫病患者和正常人血清。结果RT-PCR从血吸虫虫卵中扩增670bp的基因片断,Western blotting证明在虫卵阶段Sj26GST的表达;同时免疫组化显示Sj26GST主要分布在虫卵内毛蚴两边的侧腺。rSj26GST检测急、慢性血吸虫病患者和正常人血清的阳性率分别为92%、80%和0;用SEA检测以上标本,阳性率分别为96%、84%和2%。结论Sj26GST是SEA的主要组分之一,能刺激机体产生高滴度的抗体;rSj26GST为抗原诊断日本血吸虫病显示出高度的敏感性和特异性,具有实用价值。
- 王志成徐元宏汪学龙李敏罗飞郑美娟罗庆礼沈继龙
- 关键词：血吸虫
- 血清透明质酸和层粘蛋白检测在日本血吸虫性肝纤维化程度判断的作用被引量：3
- 2008年
- 目的观察晚期日本血吸虫患者血清中透明质酸(HA)与层粘蛋白(LN)水平,探讨HA与LN在日本血吸虫性肝纤维化中诊断价值。方法358例晚期血吸虫患者,采用B超对肝纤维化程度进行分级。随机选取HBsAg阴性的早期肝纤维化患者39例、晚期肝纤维化患者29例,检测患者血清HA与LN水平。结果日本血吸虫性晚期肝纤维化患者血清HA与LN水平分别为(273.42±216.54)g/L、(152.48±43.32)g/L,其浓度显著高于早期肝纤维化组(P<0.01)和正常对照组(P<0.01)。早期肝纤维化患者血清HA与LN水平分别为(48.88±30.96)g/L、(125.05±19.72)g/L,与正常对照组差异无显著性(P>0.05)。结论在日本血吸虫性肝纤维化患者中,血清HA与LN水平不能作为肝纤维化的早期实验室诊断指标,但是可以作为肝纤维化发展的重要标志物。
- 贾中伟罗庆礼陆琼沈继龙
- 关键词：透明质酸层粘连蛋白血吸虫病肝硬化
- 芍药苷对日本血吸虫感染小鼠肝组织免疫病理的影响被引量：28
- 2008年
- 目的观察芍药苷(paeoniflorin)对日本血吸虫病小鼠肝组织免疫病理的影响,探索芍药苷预防血吸虫病肝虫卵肉芽肿和肝纤维化的作用机制。方法日本血吸虫尾蚴感染昆明小鼠,制成肝虫卵肉芽肿和肝纤维化小鼠模型。然后随机分为4组:模型组(A组)(15只),吡喹酮治疗前(B组)、治疗同时(C组)及治疗后(D组)给予芍药苷组(各45只)。其中后3组又各分为低剂量组[芍药苷30mg/(kg·d)×30d]、高剂量组[芍药苷120mg/(kg·d)×30d]及对照组(0.5%羧甲基纤维素钠溶剂2ml×30d)。B组感染后第12天起、C及D组分别于感染后第42及72天起,灌胃芍药苷或0.5%羧甲基纤维素钠溶剂。B、C和D等3组均于感染后第42天起灌胃吡喹酮[500mg/(kg·d)×2d]。感染后第102天处死取血及肝脏。用竞争放射免疫法检测血清透明质酸(HA)含量,苏木素-伊红(HE)及Masson胶原纤维染色观察肝虫卵肉芽肿面积及纤维化程度,用免疫组化技术评价α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)和Ⅰ型胶原(ColⅠ)表达情况。结果B组HA水平,低剂量组及高剂量组均显著低于对照组(F=9.429,P值均<0.01);肉芽肿面积及肝纤维化程度,低剂量组及高剂量组均显著低于对照组(F=862.540、F=29.738,P值均<0.01);α-SMA阳性细胞表达强度(F=12.323,P值均<0.01)、TGF-β1表达强度(F=148.990,P值均<0.01)、ColⅠ含量(F=180.881,P值均<0.01),低剂量组和高剂量组均显著低于对照组。C组及D组各项检测数据与其相应的对照组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论吡喹酮治疗前给予芍药苷,能明显降低肝虫卵肉芽肿和肝纤维化程度,减少肝组织TGF-β1、α-SMA的表达。
- 储德勇李丛磊杨枫吴强李静丁向东罗庆礼沈继龙
- 关键词：芍药苷日本血吸虫Α平滑肌肌动蛋白
- 芍药苷对小鼠巨噬细胞产生TGF-β1的影响被引量：14
- 2008年
- 目的探讨芍药苷(paeoniflorin,PAE)对血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)刺激小鼠腹腔巨噬细胞(PMs)产生转化生长因子β1(TGF-β1)的影响。方法研磨法制备SEA,分别加入含有小鼠PMs的培养板、培养瓶及培养皿中,培养24h,ELISA法测定TGF-β1含量,RT-PCR检测PMs内TGF-β1基因的表达,Western blotting检测PMs内TGF-β1蛋白的表达;在含PMs的培养瓶和培养皿中分别加入10mg/LSEA5ml,培养12h,再分别加入不同浓度的PAE(0、7.5、15、30、60及120mg/L),继续培养12h和24h。RT-PCR与蛋白质印迹(Westernblotting)分别检测PAE对SEA刺激的PMs内TGF-β1基因与蛋白的表达。结果10mg/L的SEA可明显刺激PMs产生TGF-β1(235.86±3.43ng/L),PAE呈浓度依赖性地抑制TGF-β1mRNA的表达(r=-0.827,P<0.01)和TGF-β1蛋白的表达(r=-0.952,P<0.01)。结论PAE能抑制SEA刺激的PMs产生TGF-β1。
- 储德勇李丛磊李静罗飞郑美娟吴强罗庆礼沈继龙
- 关键词：芍药苷日本血吸虫转化生长因子Β1巨噬细胞
- 重组Sj14-3-3,SjGST及mIL-12/聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)缓释微球对小鼠免疫保护性的研究被引量：3
- 2006年
- 目的研究聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)微球给药系统在血吸虫病分子疫苗中的应用,并探讨rSj14-3-3,rSjGST及mIL-12作为疫苗的协同作用,及mIL-12刺激机体产生CTL和辅助性T细胞(Th)在抗血吸虫病中的作用。方法从pET28a/Sj14-3-3和GST重组质粒中诱导表达rSj14-3-3及rSjGST,过柱纯化。构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)mIL-12,并共同包入PLGA缓释微球。对制备的微球进行体外释放,观察其释放速度。分组免疫BALB/c小鼠,进行尾蚴攻击感染实验。在攻击感染6w后,剖杀小鼠,计算各组的减虫率。结果各组的减虫率:单独rSj14-3-3组为27.6%,rSj14-3-3+PcDNA3.1(+)mIL-12组34.9%,rSj14-3-3+PcDNA3.1(+)mIL-12PLGA微球组37.5%,rSj14-3-3与rSjGST混合后+PcDNA3.1(+)mIL-12PLGA微球组38.8%;各组减卵率分别为(按以上组序)35.3%,49.1%,50.5%,和43.1%。结论PLGA微球给药系统可诱导并调节体液与细胞免疫从而增强了疫苗的抗感染,抗生殖作用。但rSj14-3-3和rSjGST抗原之间未表现出协同作用。mIL-12刺激机体产生CTL和辅助性T细胞(Th),在BALB/c鼠抗血吸虫攻击感染发挥作用,增强了疫苗保护作用。
- 罗飞沈继龙王志成李敏郑美娟罗庆礼袁小松储德勇
- 关键词：日本血吸虫分子疫苗PLGA
