河南省科技厅国际合作项目(134300510052)
- 作品数：6 被引量：37H指数：4
- 相关作者：范丙友史国安高水平张文婷徐杰更多>>
- 相关机构：河南科技大学更多>>
- 发文基金：河南省科技厅国际合作项目国家自然科学基金河南省高等学校青年骨干教师资助计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 芍药FPPS基因的克隆及生物信息学分析被引量：4
- 2016年
- 目的克隆芍药萜类物质生物合成关键酶法呢基焦磷酸合酶(farnesyl pyrophosphate synthase,FPPS)c DNA全长序列并对其进行生物信息学分析。方法根据芍药转录组测序数据,设计一对特异性PCR引物,应用RT-PCR技术扩增出芍药FPPS基因目标条带并克隆至p MD18-T载体上,菌落PCR和质粒PCR鉴定出阳性重组子后进行序列测定及序列同源性搜索、分子系统进化树构建、结构域搜索及3D结构预测等生物信息学分析。结果测序结果表明芍药FPPS基因全长1 315bp,含60 bp的5’-UTR、1 050 bp的CDS和205 bp的3’-UTR,共编码349个氨基酸,Gen Bank登录号为KP708571;Blastn和Blastp分析结果显示芍药FPPS(KP708571)及其编码的蛋白(AKJ26301)在核苷酸水平和氨基酸水平上与多种植物的FPPS基因和FPPS蛋白具同源性;分子进化树分析结果表明芍药FPPS蛋白与其他物种FPPS蛋白的亲缘关系相对较远;预测芍药FPPS蛋白相对分子质量为40 200,等电点为5.33,是一个定位于胞液、不含跨膜结构域、不含信号肽分子的亲水性、稳定蛋白;发现芍药FPPS含有底物结合位点、底物-Mg2+结合位点、催化位点、富含天冬氨酸位点1及富含天冬氨酸位点2共7个保守结构域;3D结构中α-螺旋所占比例高且α-螺旋之间由β-转角(loop)相连接;中央腔(central cavity)由大约10个核心α-螺旋排列而成。结论首次从芍药中克隆了FPPS基因并对其进行了初步的生物信息学分析。
- 徐杰高水平史国安范丙友
- 关键词：芍药基因克隆生物信息学分析
- 芍药‘桃花飞雪’开花衰老期间乙烯代谢生理机制的研究被引量：17
- 2014年
- 以芍药(Paeonia lactiflora Pall.)品种‘桃花飞雪’为试材,测定了不同发育时期花枝以及花瓣的呼吸速率、乙烯释放速率、ACC含量、ACS和ACO活性的变化。结果表明:芍药切花花瓣的乙烯释放速率有明显的跃变峰,整枝花乙烯释放表现为末期上升型。花瓣与花枝呼吸速率均有明显的跃变,花瓣的跃变峰早于整枝花。花瓣的乙烯释放速率及呼吸速率均明显高于花枝,揭示花瓣是花枝产生乙烯的主要器官,花瓣的乙烯释放决定了花枝的开放与衰老进程。花瓣ACS活性与乙烯释放量的变化趋势较为一致,说明ACS是影响乙烯生物合成的限制因子。
- 王哲史国安马雪情范丙友
- 关键词：芍药发育时期乙烯代谢
- 芍药肌动蛋白基因的克隆及表达分析被引量：11
- 2013年
- 目的克隆芍药肌动蛋白(Actin)基因并应用RT-PCR技术分析Actin基因在芍药不同组织中的表达情况。方法根据近缘物种Actin基因的保守序列设计一对PCR扩增引物,以"桃花飞雪"芍药根部总RNA反转录而成的cDNA为模板,采用RT-PCR的方法扩增出芍药Actin cDNA全长并克隆至pMD18-T载体上,阳性克隆经菌落PCR、质粒PCR及酶切鉴定后进行测序。基于测序结果设计特异性PCR引物,应用RT-PCR技术分析Actin基因在芍药根、茎、花、叶不同组织中的表达情况。结果测序结果表明芍药Actin基因全长1 134 bp序列,共编码377个氨基酸,GenBank登录号为JX310002;序列分析表明芍药Actin蛋白中存在3种肌动蛋白特征信号序列,与其他植物肌动蛋白氨基酸同源性达99%;基于同源模建预测的3D结构中含有4个结构域;生物信息学软件预测芍药肌动蛋白的相对分子质量为4.17×104,等电点(pI)为5.31,是一个定位于胞液、不含跨膜域、不含信号肽分子的亲水性、稳定蛋白;半定量RT-PCR技术分析表明Actin基因在芍药根、茎、叶、花组织中的表达量保持恒定。结论首次从芍药中克隆了Actin基因,半定量RT-PCR表达分析结果表明Actin基因适合作为芍药功能基因表达分析的内标基因,为有效利用该基因奠定了基础。
- 范丙友李芳张文婷史国安
- 关键词：芍药肌动蛋白基因克隆RT-PCR
- 采收期对芍药切花保鲜效果的影响被引量：4
- 2013年
- 适期采收是芍药切花采后保鲜的关键技术。为确定芍药切花的最适采收期,以西施面芍药为材料,研究了采收期对芍药切花的瓶插寿命、开放寿命、切花花径、鲜质量损失率的影响。结果表明,Ⅱ级(松瓣期)采收的芍药切花瓶插寿命及开放寿命均优于Ⅲ(转色期)和Ⅳ级(暄蕾期)花,尽管切花花径略小于Ⅲ和Ⅳ级花,但其观赏价值并未明显降低;保鲜液(2%蔗糖+200mg/L 8-羟基喹啉+1mol/L硫代硫酸银)对于增大切花花径、延缓并减少切花鲜质量损失具有一定促进作用。
- 高水平魏春梅王焰吕明范丙友
- 关键词：芍药采收期切花保鲜效果
- 芍药肌动蛋白基因组DNA的克隆及分析被引量：2
- 2014年
- 目的克隆芍药Paeonia lactiflora肌动蛋白(Actin)基因组DNA序列并解析基因结构,分析Actin基因在芍药不同组织中的表达情况。方法根据本课题组报道的芍药Actin基因cDNA序列(JX310002)设计特异性引物,以芍药栽培品种"桃花飞雪"总DNA为模板,用KOD-Plus高保真DNA聚合酶扩增芍药Actin基因组基因,克隆PCR产物并进行测序。应用生物信息学软件预测芍药Actin基因的外显子及内含子,基于Blastn程序分析芍药Actin基因在核苷酸水平上的同源性,应用MEGA5.0软件构建分子系统进化树;设计跨越内含子的半定量RT-PCR扩增引物,分析芍药Actin基因在芍药根、茎、叶、花中的表达情况。结果测序结果表明芍药Actin基因组DNA序列全长1 405 bp,含4个外显子和3个内含子,3个内含子中共6个剪接位点均遵循高等真核生物5’端供位GU与3’端受位AG模式;共编码377个氨基酸,GenBank登录号为KF363830。设计了一对半定量RT-PCR扩增引物,其中上游引物跨越了芍药Actin基因的第1个内含子,可有效防止由DNA污染而造成RT-PCR扩增的假阳性;半定量RT-PCR分析结果表明Actin基因在芍药根、茎、叶、花等不同组织中的表达量保持恒定。结论首次克隆了芍药Actin基因组DNA序列并明确了其基因结构,半定量RT-PCR分析结果表明Actin基因可以作为芍药功能基因表达分析的内标基因。
- 范丙友张文婷徐杰骞光耀高水平郭丽丽侯小改
- 关键词：芍药肌动蛋白基因组DNA克隆基因结构
- 芍药Actin基因在大肠杆菌中的高效表达被引量：2
- 2015年
- 目的构建芍药Paeonia lactiflora Actin（Pl Actin）基因原核表达载体,优化Pl Actin基因在大肠杆菌中的高效表达体系。方法基于Pl Actin基因c DNA序列及原核表达载体p ET-32a（＋）多克隆位点序列,设计一对5’末端分别插入Bam H I和Hind III酶切位点的特异性PCR引物,基于RT-PCR技术亚克隆Pl Actin基因;用Bam H I和Hind III双酶切重组质粒p MD18-T-Pl Actin和原核表达载体p ET-32a（＋）,胶回收纯化目的基因和空载体,连接、转化后应用菌落PCR、质粒PCR和双酶切鉴定出重组子p ET-32a（＋）-Pl Actin,转化BL21（DE3）菌株获得基因表达工程菌;分别设置诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）浓度梯度、诱导的菌体起始密度梯度及表达时间梯度,诱导Pl Actin基因在大肠杆菌中表达,SDS-PAGE电泳、考马斯亮蓝R250染色后制备干胶并比较重组Actin蛋白的表达量。结果亚克隆测序结果表明Pl Actin与目的序列完全一致,且其编码区序列（CDS）上下游成功插入了Bam H I和Hind III酶切位点;成功构建了芍药原核表达载体p ET-32a（＋）-Pl Actin;诱导剂IPTG的最佳浓度为0.1 mmol/L,诱导的菌体起始密度（A600）为0.4~0.6,最佳表达时间为4 h。结论构建了Pl Actin基因原核表达载体p ET-32a（＋）-Pl Actin,建立了Pl Actin基因在大肠杆菌中的高效表达体系。
- 徐杰高水平张文婷史国安范丙友
- 关键词：芍药ACTIN大肠杆菌SDS-PAGE电泳
