国家自然科学基金(30271341)
- 作品数：6 被引量：33H指数：4
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- 小鼠骨髓未成熟树突状细胞体外扩增及鉴定被引量：18
- 2003年
- 目的 建立体外大量扩增小鼠未成熟树突状细胞 (DC)的方法 ,从形态学、免疫表型和细胞功能试验等方面予以鉴定。 方法 制备小鼠骨髓细胞 ,分别用不同剂量重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (rmGM CSF)培养 ,7d后收集悬浮细胞进行扫描电镜观察和免疫表型鉴定 ,并行混合淋巴细胞反应 ,观察其诱导未致敏T淋巴细胞增殖的情况。 结果 小剂量rmGM CSF培养获得的DC(GMlowDC)具有DC的典型特征 ,细胞表面高表达CD11c,低表达CD4 0、I A/I E ,不表达B7 1,与大剂量rmGM CSF培养获得的DC(GMhighDC)相比 ,其体外刺激未致敏T淋巴细胞增殖的能力较弱。 结论 本实验中获得的GMlowDC形态上具有DC的典型特征 ,在细胞表型、细胞功能试验上具有未成熟的特性 ,说明所建立的培养未成熟DC的方法是可行的 ;rmGM CSF的剂量与细胞的成熟程度相关 ,一般说来 ,较大剂量的rmGM CSF诱导生成的细胞以成熟DC为主 ,小剂量rmGM CSF诱导生成的细胞以未成熟DC为主。
- 王强彭毅志
- 关键词：树突状细胞体外扩增粒细胞巨噬细胞集落刺激因子免疫耐受
- 低剂量粒细胞巨噬细胞集落刺激因子诱导的小鼠骨髓未成熟树突状细胞抗成熟特性的研究被引量：5
- 2004年
- 目的 观察内毒素 /脂多糖 (LPS)、肿瘤坏死因子α(TNF α)、干扰素γ(IFN γ)等促成熟物质对低剂量粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (rmGM CSF)诱导的小鼠骨髓未成熟树突状细胞 (DC)成熟特性的影响。 方法 制备小鼠骨髓细胞 ,分别用不同剂量rmGM CSF培养 ,6d后收集悬浮细胞进行检测。用LPS、TNF α、IFN γ与小剂量rmGM CSF培养获得的DC(GMlowDC)共同孵育 3d后 ,行混合淋巴细胞反应 ,观察其诱导未致敏脾淋巴细胞增殖的情况 ,并与大剂量rmGM CSF培养获得的DC(GMhighDC)进行比较。 结果 GMlowDC不能激活未致敏脾淋巴细胞 ,且在与LPS、TNF α和IFN γ共同培养 3d后 ,仍不能有效诱导未致敏脾淋巴细胞增殖 ,刺激指数 (SI)均 <2 .0 0 ;而GMhighDC刺激未致敏脾淋巴细胞增殖的能力较强 ,SI为 4 .71。 结论 GMlowDC具有对LPS、TNF α和IFN γ刺激不敏感的抗成熟特性。
- 王强彭毅志
- 关键词：GM-CSF粒细胞巨噬细胞集落刺激因子脾淋巴细胞增殖未成熟树突状细胞悬浮细胞
- 第三方未成熟树突状细胞负载异体抗原诱导免疫耐受的实验研究被引量：1
- 2006年
- 目的观察第三方未成熟树突状细胞(imDC)负载同种异体抗原后对其免疫特性的影响。方法从健康足月新生儿脐血中分离单核细胞,采用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (rhGM-SCF)和重组人白细胞介素(rhIL)4联合培养7 d,诱导其分化成imDC,并通过光学显微镜和扫描电镜观察细胞形态、检测细胞表型及混合淋巴细胞反应(MLR);将培养的细胞与异体淋巴细胞抗原共同孵育,并给予共刺激分子阻断剂细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA-4Ig)处理,检测抗原负载前后的细胞表型变化,通过MLR比较致敏前后T淋巴细胞增殖的能力。结果 (1)培养后细胞具有典型的imDC特征,CD1α、CD83、CD80、CD86等成熟标志呈低表达,分别为 21．42％、0．59％、5．39％、3．85％;人类白细胞DR抗原(HLA-DR)的表达率为60．66％,MLR结果提示其不能刺激同种异体T淋巴细胞增殖。(2)负载抗原后的DC表现出成熟特性,CD1a、CD83、 CD80、CD86及HLA-DR表达明显增高,分别为65．51％、42．20％、56．45％、38．52％、76．44％(P< 0．05);能够刺激T淋巴细胞增殖[刺激指数(SI)>2．00]。(3)给予共刺激阻断剂CTLA-4Ig致耐处理后,SI由2．51下降到0．39,可明显抑制T淋巴细胞增殖。结论第三方imDC负载抗原后能表现出成熟特性;经CTLA-4Ig致耐处理,不能刺激未致敏T淋巴细胞增殖。有望诱导受体针对供者抗原的特异性免疫耐受。
- 游波彭毅志王强王逸涛王永权
- 关键词：树突细胞抗原阻断疗法免疫耐受
- 人外周血未成熟树突状细胞的体外扩增和鉴定及抗成熟特性的研究被引量：8
- 2005年
- 目的 建立体外诱导、扩增具有抗成熟特性的未成熟树突状细胞 (DC)的方法。方法 从健康成人外周血分离单个核细胞 (PBMC) ,以rhGM -CSF和rhIL -4体外培养 9d ,于第 7d加入rhIL -10 ,收集悬浮细胞 ,电镜观察形态 ,流式细胞仪测定细胞表型 ,并进行混合淋巴细胞反应 (MLR) ,观察其刺激同种异体未致敏T淋巴细胞增殖的能力。将培养的细胞分别用LPS、TNF -α继续刺激 2d ,再进行MLR ,观察结果。结果 PBMC经rhGM -CSF +rhIL -4诱导并经rhIL -10处理后获得的细胞具有典型的DC形态特征 ,表达DC的特异性标志CD1a ,不表达DC的成熟标志CD83 ,与对照组相比其共刺激分子CD86、CD40 的表达显著下降 ,MLR示不能刺激同种异体T细胞增殖。经LPS、TNF -α刺激后亦不能刺激T细胞增殖。结论 与rhIL -10联合培养可获得具有抗成熟特性的未成熟DC ,这对于诱导大面积深度烧伤病人的异体皮移植免疫耐受具有良好的应用前景。
- 姜艳彭毅志袁志强
- 关键词：人外周血未成熟树突状细胞PBMC悬浮细胞体外扩增
- 脂质体介导的基因转染对人未成熟树突状细胞成熟特性的影响被引量：4
- 2006年
- 目的探讨脂质体介导的基因转染对人未成熟树突状细胞(imDC)表型特征及免疫学功能的影响。方法贴壁法分离人脐血来源的单核细胞,用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和重组人白细胞介素4将其诱导分化为imDC后,进行形态学观察和免疫表型鉴定,并将其分为转染组和对照组。转染组将pEGFP-N1质粒通过脂质体转染imDC；对照组不作特殊处理。流式细胞仪检测此法的转染率和两组细胞表面分子[CD86、CD83、人类自细胞DR抗原(HLA-DR)等]的表达率；混合淋巴细胞反应(MLR)检测imDC在转染前后刺激未致敏T淋巴细胞增殖的能力。结果人脐皿来源的imDC形态结构和表面标志符合文献报道的典型特征。脂质体介导的基因转染法转染率约在10%左右。转染组CD86、CD83和HLA-DR的表达率分别为(12±6)%、(8．6±2．3)%和(71±7)%；对照组分别为(13±6)%、(9．1±3．8)%和(72±8)%,两组比较,差异无统计学意义(P＞0．05)。MLR提示imDC转染后其免疫刺激功能较转染前无明显变化(P＞0．05),刺激指数＜2。结论脂质体介导转染imDC后不影响其成熟特性,但转染率不高。
- 王永权彭毅志王强王逸涛游波
- 关键词：树突细胞转染脂质体免疫表型分型胎血
- 负载异体抗原对低剂量粒细胞巨噬细胞集落刺激因子诱导的树突状细胞免疫学性状的影响被引量：4
- 2006年
- 目的观察低剂量粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱生的未成熟树突状细胞(GM^(low)DC)对异体抗原的摄取能力,以及负载异体抗原后细胞表型和功能的改变。方法对处于增殖期的C_(57)BL/6小鼠单个核细胞(MNC)作氚标记亮氨酸(~3H-Leu)掺入处理,制备~3H-Leu标记的抗原上清液。将此抗原上清液分别与昆明小鼠GM^(low)DC和成熟树突状细胞(DC)孵育30、60、90 min,检测细胞每分钟放射性荧光闪烁计数(cpm)值；用流式细胞仪检测负载异体抗原前后GM^(low)DC表面I^A/I^E、CD80分子的表达情况。分离C_(57)BL/6小鼠的T淋巴细胞,根据加入的刺激因素分组并进行同种混合淋巴细胞反应(MLR)：对照组(不加刺激因素)、GM^(low)DC组、GM^(low)DC+异体抗原组、GM^(low)DC+异体抗原+细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4Ig(CTLA-4Ig)组。检测各组细胞cpm值,计算刺激指数(SI)。结果加入异体抗原上清液后30、60、90 min,GM^(low)DC的cpm值均明显高于同时相点的成熟DC(P＜0．05或0．01)。负载异体抗原前,GM^(low)DC细胞表面I^A/I^E的表达率为(32±8)%,CD80的表达率为(25±10)%；负载后两者分别为(54±10)%、(71±18)%,均明显升高(P＜0．05或0．01)。MLR：GM^(low)DC+异体抗原组细胞cpm值明显高于对照组(P＜0．05),SI＞2．0；GM^(low)DC组以及GM^(low)DC+异体抗原+CTLA-4Ig组细胞cpm值与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0．05),AI均＜2．0。结论GM^(low)DC具有较强的抗原摄取能力,负载抗原后,细胞在表型及功能上渐趋成熟。应用CTLA-4Ig可阻断其免疫应答效应,建立免疫耐受。
- 王强彭毅志王逸涛王永权游波
- 关键词：树突细胞抗原粒细胞巨噬细胞集落刺激因子免疫耐受
