天津市科委基金(033605111)
- 作品数：2 被引量：10H指数：2
- 相关作者：王勇李轶女杨宗岐张志芳沈桂芳更多>>
- 相关机构：中国农业科学院生物技术研究所南开大学中国医学科学院中国协和医科大学更多>>
- 发文基金：天津市科委基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 猪瘟病毒E2基因在百脉根叶绿体基因组中定点整合载体的构建被引量：7
- 2007年
- 【目的】构建猪瘟病毒主要抗原E2基因在百脉根叶绿体基因组中定点转化载体,为百脉根叶绿体的转化及用叶绿体生产动物可直接食用疫苗奠定基础。【方法】通过用BLAST、DNAMAN等分子生物学分析软件对百脉根叶绿体基因组序列进行分析选定同源重组片段,采用PCR、分子克隆技术进行载体构建和鉴定。【结果】在百脉根叶绿体基因组中选择合适的外源基因整合位点,设计引物用PCR扩增叶绿体同源片段,将同源片段克隆后,构建百脉根特异的叶绿体转化载体;构建的百脉根叶绿体定点转化载体pAKE2以扩增的1.35kbpsbA和1.5kbtrnK两段相邻叶绿体DNA为定点整合外源基因的同源重组片段,包含以叶绿体基因特异强启动子Prrn和终止子TpsbA为调控序列的E2基因表达盒和aadA壮观霉素抗性基因表达盒。【结论】经PCR和酶切验证,所构建的转化载体符合预期设计。叶绿体转化及后续工作目前正在进行之中。
- 杨宗岐李轶女张志芳王勇沈桂芳
- 关键词：猪瘟病毒E2基因叶绿体转化同源重组百脉根
- 人可溶性TRAIL蛋白在衣藻叶绿体中的表达被引量：4
- 2006年
- 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)能选择性诱导多种肿瘤细胞凋亡而对正常细胞无毒性．以衣藻叶绿体基因组的clpP-trnL-petB-chlL-rpl23-rpl2为同源重组片段,壮观霉素抗性基因为选择标记,构建了编码TRAIL胞外区可溶性片段(sTRAIL)的cDNA衣藻叶绿体表达载体p64TRAIL,通过基因枪将其导入衣藻叶绿体中,经壮观霉素抗性筛选,获得了3个抗性衣藻转化子．转化子经过抗性继代筛选后,经PCR,Southern blot检测分析及暗培养,证实sTRAIL编码区DNA已整合到衣藻叶绿体基因组中,Western blot检测分析表明,sTRAIL编码区在衣藻叶绿体中获得了表达．Western blot影像摄录分析表明,表达的sTRAIL蛋白占衣藻细胞可溶性总蛋白的0．43％-0．67％．实验结果证明,用衣藻叶绿体作为生物反应器生产医药蛋白是可行的．
- 杨宗岐李轶女陈凤李董张志芳刘彦信郑德先王勇沈桂芳
- 关键词：衣藻叶绿体同源重组
